肺炎支原体抗体及荧光定量PCR检测法的对比分析

丁友辉

[摘要] 目的 比较研究肺炎支原体抗体及荧光定量PCR检测法在肺炎支原体感染性疾病诊断中的应用效果及价值。方法 该文随机抽取2016年1月—2017年6月间该院收治的下呼吸道感染患儿500例作为研究对象，对采集到的血清标本和痰液标本分别实施细菌培养法、PCR检验法检查，比较两种检验方法的检出阳性率，并按照患儿的年龄进行分组，比较不同方法对不同年龄段、不同性别患儿中肺炎支原体的检出结果。 结果 抗体检测法和荧光定量PCR 检验法检查肺炎支原体感染的阳性率分别为27.0%（135/500）和23.4%（117/500），抗体检测法的的阳性率略高于荧光定量PCR 检验法，但比较差异无统计学（P>0.05）。具體到不同年龄段患儿的检出阳性率比较，则有<1岁患儿中，荧光定量PCR检测法检测阳性率（7.0%）更高，而≥1岁患儿中，抗体检测法检测阳性率更高，比较差异有统计学意义（P<0.05）。但不同性别患儿的应用抗体及荧光定量PCR检测法的检出阳性率比较差异无统计学意义（男性患儿的阳性率分别为26.4%、24.2%，女性患儿的分别为阳性率27.5%、22.7%）（P>0.05）。结论 抗体检测法检测法更利于≥1岁患儿的诊断，荧光定量PCR检测法更利于<1岁患儿的诊断。应用抗体检测法和荧光定量PCR 检测法都是检验肺炎支原体的有效方法，二者各有优缺点，联合应用可以实现优势互补，提高检测效果。

[关键词] 肺炎支原体；抗体检测法；荧光定量PCR检验法；应用价值

[中图分类号] R725.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）12（a）-0014-03

[Abstract] Objective To compare and research the clinical application effect and value of mycoplasma pneumoniae antibody and fluorescent quantization PCR test method in diagnosis of mycoplasma pneumonia infectious diseases. Methods 500 cases of children with lower respiratory tract infection admitted and treated in our hospital from January 2016 to June 2017 were selected as the research objects and divided into two groups according to the age， and the test results of mycoplasma pneumonia of different age phases and genders were compared. Results The positive rates of mycoplasma pneumoniae antibody and fluorescent quantitation PCR test method were respectively 27.0%（135/500）and 23.4%（117/500）， and the positive rate of antibody test method was slightly higher than that of fluorescent quantitation PCR test method， and the difference was not statistically significant（P<0.05）. and the positive rate of fluorescent quantitation PCR test method was higher in children < 1 year old （7.0%）， and the positive rate of antibody test method in children ≥1 year old， and the difference was statistically significant（P<0.05）， but the difference in the positive rate between the antibody and fluorescent quantitation PCR test methods in diagnosis of children of different genders was not statistically significant （the positive rates of male children were respectively 26.4% and 24.2%， the positive rates of female children were respectively 27.5% and 22.7%（P>0.05）. Conclusion The antibody test method is more conducive to the diagnosis of children ≥1 year old， but the fluorescent quantization PCR test method is more conducive to the diagnosis of children<1 year old， and both are the effective methods in diagnosis of mycoplasma pneumonia， each has advantages and disadvantages， and the combined application can complement each other， and improve the test effect.endprint

[Key words] Mycoplasma pneumonia； Antibody test method； Fluorescent quantization PCR test method； Application value

肺炎支原体是一种临床常见病原菌，可致多种呼吸道感染性疾病、 原发性非典型性肺炎等[1]。感染肺炎支原体的患儿正常呼吸道纤毛运动被破坏、呼吸道黏膜上皮细胞发生损伤，并引起咳嗽、咳痰、气喘、气促等一系列主要临床症状。肺炎支原体不同于其他细菌、病毒，其并无细胞膜，因而以细胞膜为主要作用位置的抗菌药物无法对其产生杀伤力，在治疗方法上也与常规的细菌感染性疾病、病毒感染性疾病有所區别[2]。做好病原体的实验室快速和特异性检测对于阴肺炎支原体感染诱发的疾病治疗具有重要意义。该文随机抽取2016年1月—2017年6月间该院收治的下呼吸道感染患儿500例作为研究对象，通过对比抗体检测法和荧光定量PCR 检验法的检查结果，分析二者的应用效果及价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机抽取该院收治的下呼吸道感染患儿500例作为研究对象，患儿均有咳嗽、气喘、咽喉发炎、咽痛、头痛、发热等主要临床症状。其中，男227例，女273例，其年龄在5个月～15岁之间，平均年龄为（4.8±1.1）岁。

1.2 方法

患儿入院后分别采集其静脉血标本和痰液标本，实施血清抗体检测和荧光定量PCR检测。血清抗体检测：将采集到的3 mL静脉血标本在3 000 r/min的速度下离心，获取上层血清，通过被动凝集法对其血清抗体进行测定，检测试剂盒为SERODIA R-MYCOⅡ肺炎支原体抗体诊断试剂盒，按照说明书的操作要求对MP-IgM实施检测，以操作3 min后有两个斑点出现的情况记为阳性，仅有1个斑点出现的情况则记为阴性。如检测未见斑点出现，则可能操作中存在不规范的情况，需行重新检测。荧光定量PCR检测：通过一次性的咽拭子采集患儿的痰液标本，在拭子样本管中加入无菌生理盐水，振荡摇匀后，转移液体至离心管中，经离心弃去上清液，通过组织细胞/提取试剂盒对下层沉淀中的DNA进行提取，采用达安基因股份有限公司生产的肺炎支原体核酸扩增荧光定量检测试剂盒进行检测。以咽拭子标本中MP-DNA的检测结果咋5×106基因拷贝及以上的情况记为阳性[3]。分别对两种方法获得的检测结果：肺炎支原体检测阳性率进行对比分析。同时，比较不同年龄段、不同性别患儿的检测阳性率。

1.3 统计方法

该次实验数据采用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析，计数资料对比采用χ2检验，用[n（%）]表示，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

抗体检测法和荧光定量PCR 检验法检查肺炎支原体感染的阳性率分别为27.0%（135/500）和23.4%（117/500），抗体检测法的的阳性率略高于荧光定量PCR 检验法，但比较差异无统计学意义（P>0.05）。具体到不同年龄段患儿的检出阳性率比较，则有<1岁患儿中，荧光定量PCR检测法检测阳性率更高，而≥1岁患儿中，抗体检测法检测阳性率更高的情况（除4～6岁的患儿外），比较差异有统计学意义（P<0.05）。但不同性别患儿的检出阳性比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1、表2。

3 讨论

肺炎支原体感染诱发的非典型肺炎在所有细菌性肺炎患者中占比超过1/3，尤其是在青少年儿童群体中，感染率较高。肺炎支原体可通过飞沫传播，近年来，在婴幼儿群体中的检出率也不断升高。由于小儿的机体免疫力差，在感染肺炎支原体后，可刺激性产生炎症细胞，并在感染部位出现大量淋巴因子释放的情况，进一步诱发组织损伤，出现非典型性肺炎中，尤以间质型肺炎最为常见[3]，轻者出现咳嗽咳痰等不适症状，重者可诱发各种急性重症并发症，如阻塞性细支气管炎、肺纤维化、急性呼吸窘迫综合征等。虽然支原体感染引起的肺炎与细菌、病毒感染引起的肺炎在临床症状上有很高的相似性，但治疗上却又极大的差异。采用针对细菌、病毒感染的临床常规抗生素的敏感性较低，经验用药无法有效治疗的情况下还可能导致病情延误，增加患儿的痛苦[4]。因此，对致病病原体类型进行快速准确的检测、鉴别十分重要。

临床上常用的肺炎支原体检测方法包括：经典肺炎支原体的分离培养与鉴别法、胶体金检测法、快速培养法、肺炎支原体血清抗体检测法、荧光定量PCR检测法等多种[5]。其中，经典的肺炎支原体的分离培养与鉴别法被认为是肺炎支原体鉴别的金标准，具有极高的检测特异性，但是其培养难度较大、时间长、操作相对复杂，且操作不当的情况下还会出现假阴性结果，已经不适用于现代临床工作需要，其他几种方法则是临床上比较常用的快速检测方法[6]。

该文分别采用血清抗体法和荧光定量PCR 检验法对下呼吸道感染患儿中的肺炎支原体感染情况进行了检测，结果发现，两种方法的检测阳性率均在25%上下，差别不大。抗MP-IgM是机体受到肺炎支原体侵袭感染后出现的一种特异性抗体，在感染后1周出现，而3～4周达到高峰[7]，检测的灵敏度和特异性都比较好，但容易受到患儿抗体生产能力、病程等的影响。荧光定量PCR检测法是通过体外扩增特异DNA片断实现肺炎支原体检验的新方法，能在短时间内使极微量的核酸片断扩增至数百万个拷贝，是分子生物学检测方法，诊断灵敏度极高，且操作简便，在起病早期、未生成抗体的情况下即可进行检测，但检测结果易受标本影响[8-10]。具体到不同年龄段患儿的检测，则可见抗体检测法检测法更利于≥1岁患儿的诊断，其阳性率为23.2%，高于PCR法16.4%；荧光定量PCR检测法更利于<1岁患儿的诊断，其阳性率为7.0%，高于抗体法的3.8%。对不同性别患儿的检测结果显示，两者差异无统计学意义（P>0.05），对检测影响较小，可忽略不计。endprint

该文研究与庄严等[4]的研究结果大致一致，其对确诊为肺炎支原体感染的患儿进行了检测，抗体法和荧光定量PCR检测的检出阳性率分别为79.00%和55.63%，抗体法的优势略明显，这可能与样本量的多寡有关。其研究还发现两种方法联合应用的情况下，检出阳性率可提高至99.56%，建议同时选择两种方法以提高临床的诊断率。

综上所述，应用抗体检测法和荧光定量PCR 检测法都是检验肺炎支原体的有效方法，两者各有优缺点，联合应用可以实现优势互补，提高检测效果。

[参考文献]

[1] 尚晓东，刘晓华，宋明艳，等 .儿童肺炎支原体的种检测方法对比分析与临床检验学研究[J].中国医药指南，2016，14（26）：126-128.

[2] 张磊，郭桂林，张如，等.实时定量PCR和ELISA检测支原体感染在儿童肺炎诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志，2014，24（13）：1906-1908.

[3] 张杰，胡军，刘杨，等.肺炎支原体快速检测方法的建立及应用评价[J].国际检验医学杂志，2016，37（17）：2379-2381.

[4] 庄严，栗俊杰，张诗蒙，等.肺炎支原体感染的两种不同实验室检测方法分析[J].中国实验诊断学，2017，21（5）：799-801.

[5] 李正秋，刘兰香，刘云花 .两种不同方法检测儿童肺炎支原体感染的对比分析[J].中国中西医结合儿科学，2016，8（4）：423-426.

[6] 陈广道，梁少媛，冯柏潮.儿童支原体肺炎的临床表现和实验室检查及影像学特点分析[J].中国全科医学，2015，4（1）：59-64.

[7] 颜加林.儿童支原体肺炎的临床表现和实验室检查及影像学特点分析[J].医药，2017（2）：00273-00274.

[8] 李艷丽.联合应用多实验室辅助检查法诊断小儿肺炎支原体感染的效果分析[J].当代医药论丛，2015，8（8）：52-53.

[9] 瞿新，颜敏.肺炎支原体的实验室检验及中西医结合治疗小儿支原体肺炎的临床疗效分析[J].中国处方药，2016，14（4）：133-134.

[10] 银广悦，韩旭，孙岩.小儿肺炎支原体感染两种检验方法的探讨[J].中华医院感染学杂志，2015，6（3）：699-700.

（收稿日期：2017-09-06）endprint