黑果小檗提取物对高脂血症大鼠血脂、血液流变学和脂质过氧化水平的影响

2018-02-06阿依西姑巴伍敦阿迪力阿不都热合曼赵双清衣布拉音江阿地力布阿吉尔艾尼玩帕合热依亚森艾尼瓦尔吾买尔周文婷

新疆医科大学学报 2018年2期

阿依西姑·巴伍敦，阿迪力·阿不都热合曼，赵双清，衣布拉音江·阿地力，布阿吉尔·艾尼玩，帕合热依·亚森，艾尼瓦尔·吾买尔，周文婷

(新疆医科大学1临床医学2014-1班； 2基础医学院药理学教研室，乌鲁木齐 830011)

黑果小檗(Beberisheteropoda)为小檗科(Beberidaceae)小檗属(BeberiL.)多年生灌木黑果小檗的果实，含有葡萄糖、果糖、苹果酸、胡萝卜素、抗坏血酸、绿原酸、小檗碱及色素类等化学成分[1-2]。研究表明，黑果小檗中总黄酮类成分具有体外抗氧化作用[3]，但未见体内抗氧化作用的研究报道[4-5]。黑果小檗在新疆栽培资源非常丰富，研究其物质基础及药理活性，对开发利用黑果小檗资源有着广阔的前景。本研究采用高脂血症大鼠模型，探究黑果小檗提取物的降血脂及抗氧化作用，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器TDL-5A型离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司)，SHB-III型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，KQ500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BS-320 型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，Coda-KM-00025-00 型酶标仪(法国 Bio-Rad 公司)，LBY-N6C型全自动自清洗血流变仪(北京普利生仪器公司)。

1.2试剂辛伐他汀片(默沙东制药有限公司，批号160209)、胆固醇(Amresco，批号0818C1205)、胆酸钠(中国医药集团上海化学试剂公司，批号201605)、丙硫氧嘧啶(中国医药集团上海化学试剂公司，批号20160828)，超氧化物歧化酶检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号201603)，丙二醛检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号201605)，谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号201606)，总胆固醇检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号20160524)，甘油三酯检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号20160218)，低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号20160505)，高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号20160128)，丙氨酸转氨酶检测试剂盒(深圳迈瑞有限公司，批号201604)，天冬氨酸转氨酶检测试剂盒(深圳迈瑞有限公司，批号201605)。

1.3实验动物SD大鼠60只，体质量(240±20)g，清洁级，雌雄对半，购自新疆医科大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK(新)2011-0004，动物使用许可证号：SYXK(新)2011-0004。

1.4药材黑果小檗果实2016年8月采购自新疆阿勒泰地区，经新疆医科大学天然药物化学与生药学教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为小檗科(Beberidaceae)小檗属(BeberiL.)黑果小檗(Beberisheteropoda)的果实。

2 方法

2.1黑果小檗提取物的制备将黑果小檗果实干燥后粉碎，以10倍蒸馏水80℃回流提取2 h，过滤，重复3次，合并滤液，减压蒸馏浓缩后得浸膏，并冷冻干燥成固体粉末(每1克粉末相当于约11.1 g生药)，备用。

2.2高脂乳剂的制备称取猪油20 g和胆固醇10 g放入烧杯加热熔化，再加入丙硫氧嘧啶1 g，搅拌均匀既得油相；称取胆酸钠2 g加入30 mL蒸溜水中充分搅拌溶解后，加入丙二醇10 mL和吐温-80 10 mL搅拌均匀即得水相。将水相缓缓加入油相，搅拌均匀，用蒸馏水定容至100 mL，即得高脂乳剂，4℃冰箱保存备用。使用前用将冷藏后凝固的高脂乳剂置于60℃水浴加热，融化后给予大鼠灌胃。

2.3大鼠造模、分组及给药方法

2.3.1 造模方法将50只SD大鼠灌胃给予高脂乳剂(10 mL/kg体质量)，连续灌胃20 d；10只SD大鼠给予水(10 mL/kg体质量)，连续灌胃20 d。

2.3.2 分组方法将高脂血症模型大鼠随机分为5组：模型组、辛伐他汀组(5 mg/kg)、黑果小檗提取物低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg)。每组10只，雌雄各半。10只SD大鼠作为正常对照组。

2.3.3 给药方法黑果小檗提取物低、中、高剂量组大鼠每天10:00分别灌胃给予黑果小檗提取物混悬液(100、200、400 mg/kg)，16:00灌胃给予高脂乳剂(10 mL/kg)；辛伐他汀组大鼠每天10:00灌胃给予辛伐他汀混悬液(5 mg/kg)，16:00灌胃给予高脂乳剂(10 mL/kg)；模型组大鼠每天10:00灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)，16:00灌胃给予高脂乳剂(10 mL/kg)；正常对照组大鼠每天10:00灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)，16:00灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)。各组大鼠连续给药6 w，给药期间每周测量体质量1次。

2.4指标测定实验期间每天观察并记录各组大鼠的饮食、饮水、排尿、排便、毛发色泽及脱落、行为特征等情况，如遇动物死亡则进行尸体解剖分析死亡原因，必要时进行组织器官病理检查。各组大鼠灌胃给药6 w，于末次给药后，禁食不禁水12 h，腹腔注射20%乌拉坦溶液实施麻醉，先用含肝素的一次性真空抽血管经腹主动脉取血，置全自动血流变仪测定血液流变学指标，包括全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、聚集指数、变形指数、刚性指数。另取不含抗凝剂的一次性真空抽血管取血，静置10 min，置4℃冷冻离心机3 000 r/mim离心15 min，分离上层血清，采用全自动生化仪检测TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST和ALT的含量,采用全自动酶标仪检测血清SOD、GSH-Px、MDA 活力。

2.5统计学处理采用SPSS 17.0对实验结果进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，检验水准α=0.05。

3 结果

3.1黑果小檗提取物对高脂血症大鼠一般情况的影响各组大鼠食欲良好，毛色光亮顺滑，体质量正常增长，并且行为活动及排便排尿情况均正常。与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠体质量增加，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组大鼠比较，黑果小檗提取物低、中、高剂量组大鼠体质量减轻，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。