干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）与蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的方法比较

任丽萍

（太原市第四人民医院中心实验室，山西 太原 030053）

目前，临床上对结核分枝杆菌采用干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）与蛋白芯片法进行检测，详细报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院收治的80例确诊为结核病的患者进行分析，男性为51例，女性为29例，年龄在19～62岁，平均年龄为（38.2±10.2）岁，病程为1个月～5年，平均病程为（1.6±0.5）年，35例为肺结核，45例为肺外结核，排除原发性免疫缺陷性疾病、检测前接受放化疗以及免疫抑制药物的患者，同时还有合并糖尿病的患者。采集患者外周血进行TB-IGRA以及蛋白芯片法检测。

1.2 方法

干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）：采集患者4ml静脉血进行肝素锂抗凝，在2h内将其分装在对照培养管（N）、测试培养管（T）以及阴性对照培养管（P）中，在37度恒温条件下培养（22±1）h，在3500r/min转速下离心10min，取出血浆进行ELISA检测。采用酶标仪对吸光度（A值）进行检测，其阳性标准为T-N≥14。

蛋白芯片法：清晨空腹情况下采集患者静脉血，立即将血清分离。在芯片上做编号进行标记，在芯片盒窗口滴加4滴试剂A，完全浸湿膜表面，在室温在放置1min，加入待检血清100µl。血清完全渗入后依次滴加6滴试剂B、C、D，反应结束0.5h内观察结果。对抗结核菌的特异性细胞壁脂多糖LAM抗体、38kD抗体以及16kD抗体进行测定，若其中一种为阳性则测定抗结核分枝杆菌抗体为阳性。

1.3 评价指标

观察两组患者的特异度、灵敏性、阳性预测值、阴性预测值以及Youden指数并对比分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件进行分析，计数资料采用%表示，进行x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

TB-IGRA法测定结核分枝杆菌的特异度为95.00%，灵敏度为91.25%，阳性预测值为97.50%，阴性预测值为76.25%，Youden指数为85.1，蛋白芯片法测定结核分枝杆菌的特异度为91.25%，灵敏度为35.00%，阳性预测值为90.00%，阴性预测值为28.75%，Youden指数为24.6，两种方法的特异度之间差异性不明显，（P＞0.05）,TB-IGRA法的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值以及Youden指数显著优于蛋白芯片法，存在明显差异性，（P＜0.05），有统计学意义。

3 讨 论

结核病近年来在我国具有较高的发病率，不利于患者的疾病诊断。结核分枝杆菌又被称为结核杆菌，是结核病的重要病原菌，其可对全身器官造成侵犯，其中最常见的是肺结核。结核病仍是一种重要的传染病，严重影响患者的身体健康，危害社会安定和谐。结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4um。结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。结核分枝杆菌的致病物质：与荚膜、脂质和蛋白质有关。随着医学水平的不断发展，结核病在临床上使用蛋白芯片和TB-IGRA进行诊断，Th1细胞介导的细胞免疫应答是结核分枝杆菌感染的免疫反应。TB-IGRA的检测原理：结核分枝杆菌感染患者的外周血中有结核菌特异性T淋巴细胞，重组后对结核菌特异性T淋巴细胞进行刺激、增殖并释放IFN-γ。通过对样品中IFN-γ含量进行检测来判断结核分枝杆菌的感染情况。蛋白芯片的检测原理：载体是微孔滤膜，采用微阵列技术对结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM以及基因工程DNA技术生产纯化的结核菌蛋白16kDa和38kDa等抗原进行固定，通过微孔滤膜进行渗透、浓缩以及凝集，对样品中的特异性抗体进行检测，快速在抗原抗体反应上进行，将复合物与胶体金标记进行作用在膜上形成紫红色斑点。然后采用芯片对PBT-X2生物进行识别，对不同抗原点阵的灰度值采用专门软件进行分析。任何一个抗体若检测结果显示阳性则判定为阳性，若3种抗体检测结果均显示为阴性则可判定为阴性。蛋白芯片检测具有操作简便、快捷的特点，但是检测灵敏度较低，其原因是结核病患者血液中的抗原抗体结合形成复合物，可降低游离抗体滴度[1]，若显示的结果低于疾病的临界值，可判定为阴性。除此之外还有可能与患者自身免疫功能异常情况，体内特异性结核抗体产生量较少或者是不产生有关。TB-IGRA法检测灵敏度较高，这是因为TB-IGRA法不需要对淋巴细胞进行分离，对设备以及操作的水平较低，在临床上得到广泛性的使用，是目前临床上对结核分枝杆菌的重要诊断方法，但在使用其检测时还需要结合患者的临床症状以及其他诊断方法如痰菌培养、痰菌涂片以及影像学诊断技术等，同时还需要考虑到患者自身的免疫状态。TB-IGRA法测定结果出现假阴性的原因有不正确的标本处理方式如剧烈操作是患者细胞损伤，患者自身免疫系统缺陷如接受免疫抑制治疗或者AIDS。TBIGRA法还存在一定的缺点，其重点在于阳性对患者的临床病变部位没有相应的提示，活动性结核病或潜伏感染者不能采用数值的高低来进行判断，仍需要结合临床症状进行诊断。本次对我院收治的80例结核分枝杆菌进行研究分析，结果显示，两种方法的特异度之间，差异无统计学意义（P＞0.05），TB-IGRA法的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值以及Youden指数显著优于蛋白芯片法，差异有统计学意义（P＜0.05），说明结核分枝杆菌采用TB-IGRA与蛋白芯片进行测定，前者检测阳性率较高，灵敏度也较高，建议使用在临床检测中。

综上所述，结核分枝杆菌采用TB-IGRA检测的灵敏度和阳性率均显著高于蛋白芯片，可在临床上应用。

[1] 王 科,代红莹,张 银,等.结核蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的临床评价[J].中华检验医学杂志,2016,39(10):776-778.