高效液相色谱法测定乐山栀子熊果酸含量

钱婉霞

摘 要：本文采用高校液相测定了乐山栀子中熊果酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）为流动相，检测波长为210nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。熊果酸在5～55μg·mL-1范圍内呈良好的线性关系。熊果酸的平均回收率为99.5%，RSD为0.76%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于乐山栀子中熊果酸的含量测定。

关键词：乐山栀子；熊果酸；含量

栀子（学名：Gardenia jasminoides Ellis）别名：黄栀子、山栀、白蟾，是茜草科植物栀子的果实。《医学启源》记载：“疗心经客热，除烦躁，去上焦虚热，治风。”栀子具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用。栀子果实含有栀子甙（gardenoside）、都桷子甙（geniposide）、山栀甙（shanzhiside）、栀子酮甙（gardo-side）、都桷子甙酸（geniposidic acid）、绿原酸（chlorogenic acid）、熊果酸、D-甘露醇（D-mannitol）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、叶黄素（xanthophyll）等成分。熊果酸具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。桅子产于浙江、江西、云南、贵州、江苏、安徽、湖南、福建、四川、湖北、广东、广西、河南等地。本文采用高校液相测定了乐山栀子中熊果酸的含量。

1 仪器与试药

STI-501Plus梯度高效液相色谱仪（赛智科技（杭州）有限公司）；UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；HN-6AL功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司）；XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；BT赛多利斯电子天平（北京五洲东方科技发展有限公司）。大黄素和大黄酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。熊果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇（杭州汇普化工仪器有限公司）、磷酸（天津市顺隆达科技有限公司）、乙腈（杭州汇普化工仪器有限公司）、磷酸二氢钾（天津市顺隆达科技有限公司）、冰乙酸（杭州汇普化工仪器有限公司）、三乙胺（天津市顺隆达科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取栀子，粉碎过40目，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇40毫升，超声处理30分钟，放冷，过滤，将滤渣再加甲醇30毫升，超声处理20分钟，过滤，合并滤液，滤液置100ml量瓶中，用甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取熊果酸对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含20？滋g的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

取流动相依上述方法测定，结果在熊果酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，熊果酸对照品在5～55μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取熊果酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.76%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

称取同一批的乐山栀子样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.68%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品熊果酸峰面积积分值的RSD为0.67%。结果表明熊果酸至少在4小时内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的熊果酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.76%。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定乐山栀子三批样品中熊果酸的含量，含量为0.266mg/g、0.256mg/g、0.255mg/g。

3 讨论

分别考察甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（80∶20∶0.02∶0.01），甲醇-0.1%磷酸水溶液（30：70），甲醇-水-磷酸（30：70：0.1），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（70∶30∶0.02∶0.01），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（含三乙胺0.5%，磷酸调pH至3.0）（40：60）不同比例的流动相，结果以甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于乐山栀子中熊果酸的含量测定。乐山栀子中熊果酸的含量应不少于0.2mg/g。

参考文献

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