中重度特应性皮炎患者外周血IL-31水平及IgE表达与临床相关性

张蕴颖，齐晓怡，王傲雪，唐田，涂彩霞

（大连医科大学附属第二医院，大连116027）

特应性皮炎是皮肤科临床中常见、反复发作的一种疾病。特应性皮炎的发病率较高[1-2]，严重影响患者的生活质量。瘙痒是其常见症状之一，严重影响患者的生活质量。最近研究显示白细胞介素（IL）-31在特应性皮炎的发病中发挥重要作用，与瘙痒相关[1-2]。本研究通过检测中重度特应性皮炎患者外周血IL-31及IgE的水平，并分析其与临床评分的相关性，为判断病情提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集大连医科大学附属第二医院皮肤科门诊中重度特应性皮炎患者18例，其中男9例，女 6例；患者年龄 16～48 岁，平均（27.11±9.80）岁；特应性皮炎病程4周～43年；根据中国特应性皮炎诊疗指南（2014版），应用SCORing Atopic Dermatitis（SCORAD）评分判定患者病情严重程度，计算公式为（A/5+7B/2+C）。其中A为皮损面积：成人的头颈部、上肢各9%，躯干前、后各13.5%，下肢各22.5%；14岁以下儿童头颈部、上肢各9%，躯干前、后和下肢各18%；2岁以下儿童头颈部为17%，上肢各9%，躯干前、后各18%，下肢各12%；以1%的面积为1分。B为皮损严重程度，包括6项体征：红斑、丘疹（或）水肿、渗出（或）结痂、表皮剥脱、苔藓化、皮肤干燥（评价未受累皮肤）。根据皮损轻重程度，评分标准为0～3 4级评分法；C为瘙痒和影响睡眠程度：按最近3昼夜平均来分，每项各评分为0～10分（视觉模拟尺）。总分范围为0～103分。在临床使用中，根据总分来确定疾病的严重程度，0～24分为轻度，25～50分为中度，51～103分为重度。根据SCORAD评分标准，得分大于25的患者入组。入组者 SCORAD 评分为 53.1～84.2，平均（69.04±9.86）。选取25例健康志愿者作为对照，年龄为18～50岁，平均（31.88±10.53）岁。纳入标准：中重度特应性皮炎患者（SCORAD评分＞25分）；近2个月未使用糖皮质激素、抗组胺药物、免疫抑制剂或免疫调节剂治疗。排除标准：合并有免疫相关性疾病如白癜风、银屑病、自身免疫性甲状腺疾病、Ⅰ型糖尿病、斑秃、慢性荨麻疹等患者；严重肝肾等系统性疾病患者；孕妇及哺乳期妇女。

1.2 试剂和仪器 APC标记的抗人CD3（Becton Dickinson，美国），FITC 标记的抗人 CD4（Becton Dickinson，美国），PE 标记的抗人 CD69（Becton Dickinson，美国），同型对照抗体PE标记的鼠IgG1（Becton Dickinson，美国），FACSCalibur流式细胞仪（Becton Dickinson，美国），人 IL-31试剂盒（Elabscience，中国），人免疫球蛋白E ELISA试剂盒（Elabscience，中国），酶标仪（Molecular Devices Corporation，美国）。

1.3 方法

1.3.1 流式细胞仪检测 抽取患者及健康对照者外周静脉血2 mL于肝素抗凝管中，加入2 mL PBS重悬后2 000转/min，常温离心5min后弃上清，重复洗3遍，400 μL PBS重悬。每个试管中各加入50 μL混悬液，分别依次加入8 μL APC标记的抗人CD3、8μL FITC 标记的抗人 CD4、8μL PE 标记的抗人CD69、8μL同型对照抗体PE标记的鼠IgG1，混匀避光孵育15 min。加入溶血素0.5 mL，混匀，避光孵育10 min，2 000转/min离心5 min，弃上清。2 mL PBS重悬，2 000转/min离心 5min，弃上清。300 μL PBS重悬，流式细胞仪检测。

1.3.2 ELISA检测 采用双抗体夹心分别测定血清中IL-31、IgE的水平，按试剂盒说明书同一批次完成。建立标准曲线,通过酶标仪测定450 nm处光密度值，根据标准曲线及相应软件计算出IL-31、IgE的水平。

1.4 统计学分析 2组间比较采用配对t检验，相关性分析应用Person检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 中重度特应性皮炎患者外周血CD4+T细胞的活化 应用流式细胞仪检测，中重度特应性皮炎患者外周血CD3+CD4+CD69+T细胞占CD3+CD4+T细胞比例为（4.80±2.05）%，正常人外周血CD3+CD4+CD69+T细胞占CD3+CD4+T细胞比例为（1.36±0.92）%，2 组间比较，t=7.44，P＜0.01，差异有统计学意义，见图1。

图1 健康人及AD患者外周血CD3+CD4+T细胞表面CD69的表达

2.2 中重度特应性皮炎患者外周血IL-31的检测及与临床相关性 中重度特应性皮炎患者外周血IL-31水平为（111.51±25.79）pg/mL，正常人为（64.20±8.86）pg/mL，2 组间比较，t=8.534，P＜0.01，差异有统计学意义；中重度特应性皮炎患者外周血IL-31水平与SCORAD评分进行相关性分析，t=0.506，P＜0.05，两者差异有统计学意义。

2.3 中重度特应性皮炎患者外周血IgE的检测及与临床相关性 中重度特应性皮炎患者外周血IgE水平（514.72±205.27）IU/mL，正常人为（49.32±33.96）IU/mL，2 组间比较，t=11.18，P＜0.01，差异有统计学意义；中重度特应性皮炎患者外周血IgE水平与SCORAD评分进行相关性分析，t=0.567，P＜0.05，两者差异有统计学意义。

3 讨论

IL-31是2004年被发现的，属于IL-6细胞因子家族成员，主要由活化的T细胞特别是CD4+T细胞产生。IL-31成熟分子主要包括141个氨基酸，其空间结构包含4个螺旋束。2004年，通过转基因鼠慢性皮炎动物模型，发现IL-31与严重瘙痒相关，并且特异性淋巴结过度表达IL-31[3]。在转基因鼠中特异性淋巴结IL-31表达升高，其可诱导严重的瘙痒，并与慢性皮炎的加重相关[3]。在Nc/Nga小鼠中有搔抓行为的小鼠比没有搔抓行为的小鼠皮肤IL-31mRNA水平明显升高[4]。与正常人相比，瘙痒明显的AD患者皮肤中IL-31mRNA明显升高[1]。目前研究证实IL-31在特应性皮炎中发挥作用，特应性皮炎中血清表达水平升高，且临床SCORAD评分与IL-31水平呈正相关[5]。与此相似，有研究显示55例特应性皮炎患者外周血中IL-31水平明显升高，且与血清总IgE水平及瘙痒程度相关[6]。本研究显示18例中重度异位性皮炎患者外周血IL-31、IgE水平明显升高，与既往研究结果一致，同时均与SCORAD评分具有相关性，临床中其表达水平可作为监测特应性皮炎严重程度的指标。

在皮肤T淋巴细胞瘤中，抽取自觉瘙痒的患者外周血，提取CD4+T细胞并刺激培养后，IL-31的水平明显升高。CD69为活化诱导分子，为T淋巴细胞激活后最早表达的表面抗原，是T细胞介导的免疫应答的一部分，其表达后可上调某些细胞因子及其受体的合成与表达，可促进T细胞进一步活化、增殖，在某些疾病中作为活动期监测指标。Szegedi等[7]研究发现在特应性皮炎中产生IL-31的T细胞明显增加，且患者外周血中IL-31的水平与产生IL-31的CD4＋T细胞数量及疾病严重程度相关。在本研究中，笔者应用流式细胞仪检测，结果显示中重度特应性皮炎中CD4＋CD69+T细胞数量明显增加，提示特应性皮炎患者体内T细胞被信号分子激活活化，从而可能促进细胞因子的进一步分泌，加重临床症状，但其具体调控机制尚须进一步研究探讨。

[1]Sonkoly E,Muller A,Lauerma AI,et al.IL-31:a new link between T cells and pruritus in atopic skin inflammation[J].J Allergy Clin Immunol,2006,117:411-417.

[2]Takaoka A,Arai I,Sugimoto M,et al.Involvement of IL-31 on scratching behavior in NC/Nga mice with atopic-like dermatitis[J].Exp Dermatol,2006,15:161–167.

[3]Dillon SR,Sprecher C,Hammond A,et al.Interleukin 31,a cytokine produced by activated T cells,induces dermatitis in mice[J].Nat Immunol,2004,5:752-760.

[4]Takaoka A,Arai I,Sugimoto M,et al.Expression of IL-31 gene transcripts in NC/Nga mice with atopic dermatitis[J].Eur J Pharmacol,2005,516:180-181.

[5]Raap U,Wichmann K,Bruder M,et al.Correlation of IL-31 serum levels with severity of atopic dermatitis[J].J Allergy Clin Immunol,2008,122:421-423.

[6]Kim S,Kim HJ,Yang HS,et al.IL-31 Serum protein and tissue mRNA levels in patients with atopic dermatitis[J].Ann Dermatol,2011,23:468-473.

[7]Szegedi K,Kremer AE,Kezic S,et al.Increased frequencies of IL-31-producing T cells are found in chronic atopic dermatitis skin[J].Exp Dermatol,2012,21:431-436.