马比木不同部位喜树碱含量测试分析

高渐飞 张凡 杨艳 张明

摘要：分析了马比木不同部位喜树碱含量及其运移过程，采用高效液相色谱法对其进行了测定。结果表明：色谱柱Syncyronis C18（4.6 mm×250 mm，5μm）;流动相：甲醇一水（60：40），等度洗脱;监测波长：254nm;流速：0.8 m L/min;柱温：30℃。测定结果表明：马比木喜树碱含量为叶一嫩枝皮<嫩枝木质部<主枝皮<主枝木质部<主干皮<主干木质部<根木质部<根树皮。不同部分喜树碱含量差异较大，根部到地上部分至植株顶端喜树碱含量逐渐降低，不同部位树皮喜树碱含量差异比木质部大。

关键词：马比木;喜树碱;含量;差异

中图分类号：S759. 3+5

文献标识码：A

文章编号：1674-9944（2018）01-0001-03

1 引言

马比木（Nothapodyres pmosporoides （Oliv.） sieum），别名公黄珠子、追风伞，为茶茱萸科海桐假柴龙树属植物。该属植物有5～9个种，主要分布印度、泰国、越南等热带地区，我国约有5个种，产于云南、四川、湖南、广西等地[1]。已有报道马比木和该属的植物臭味假柴龙树（Notha Podytes oetida]、青脆枝（又名臭马比木）（Nothapodytes nimmoniana （Graham） Mablerley）均含有喜树碱[2-4]。现代药理研究表明，喜树碱类有很好的药理活性，具有抗肿瘤、抗病毒、细胞毒性和抗菌等药理作用[5]，是很有应用前景的一类化合物。目前喜树碱的两种水溶性衍生物拓扑替康（Topotecan）和伊利替康（Irinotecan）已成为很畅销的抗癌药物。喜树碱主要是从喜树（Camptotheca acuminata Decne）中提取[6，7]，由于世界市场对喜树碱类抗癌药物的需求量日益增加[8]，导致了大量的树木被完全砍伐，对物种安全造成严重威胁，喜树已被列入中国国家二级保护植物。上述3种海桐假柴龙树属植物含有喜树碱的发现，较低原料成本，较高的含量，使其成为提取喜树碱的重要原料，一定程度上缓解了对喜树资源的依赖。但由于植物都有特定的分布范围，该属植物尤其马比木对生长环境要求更为严格，生长缓慢，产量有限，且药用部位为根，必须对树木进行砍伐后采挖，极其不可持续。据报道印度的臭马比木数量已减少了80%，中国湘西[8]、目前贵州东北部（铜仁）马比木种植资源安全已受到严重威胁。

国外对味假柴龙树的研究较为深入，国内则对青脆枝（臭马比木）研究较多，对2种植物提取喜树碱工艺及其在器官中的分布、植物组织培养和产喜树碱内生菌等方面都有深入的认识[3，4，9-15]。相比较，对马比木研究较晚，目前已开展马比木根、不同部位（细根、主根、主茎、幼茎和叶）喜树碱含量测定、化学成分、抑菌作用[4，16～18]等方面研究。本研究将同一马比木植株分为树叶、嫩枝、主枝、主枝木、根部，并将木质部和皮分开进一步深入不同部位喜树碱含量差异，揭示喜树碱运移特征，为拓宽开发利用方式提供支撑。

2 材料与方法

2.1 样品来源

样品于2015年6月4日取与贵州省万山区，树龄15—20年，主干部分地面30 cm以上被砍伐，已萌发枝条，枝条年龄3年左右。将植株分为叶（顶芽以下5 cm成熟叶片）、嫩枝（当年生幼嫩枝条）、主枝（取与主干直接连接部至20 cm）、主干（地面以上30 cm）、根部（地表以下部分）;进一步分为树皮和木质部，每个样一式2份平行样送检，取平均值。

2.2 样品处理

对照样品溶液的制备喜树碱：实验室制备，精密称取对照喜树碱，配成浓度为77.2 μg/mL的对照溶液。

2.3 供试品溶液的制备

马比木不同部位低温干燥后，粉碎，取相应细粉0.1g，精密秤定，置于圆底烧瓶中，精密加70%乙醇25 mL，称重，以70℃回流提取60 min放冷，用70%乙醇補重，摇匀，滤过，取继续液，0.45μg微孔滤膜滤过即得。

2.4 色谱条件

高效液相色谱质谱仪Agilent 1100 HPLC。色谱柱syncronis C18（4.6 mm×250 mm，5μm）;流动相：甲醇一水（60：40），等度洗脱;检测波长：254 nm;流速：0.8mL/min;柱温：30℃。

3 结果与分析

由表1可知，马比木叶和嫩枝皮喜树碱含量最低，为0. 011%，根树皮部分含量最高，为0.378%，两者相差37倍多。不同部位喜树碱含量特征为，叶=嫩枝皮<嫩枝木质部<主枝皮<主枝木质部<主干皮<主干木质部<根木质部<根树皮。

由图1—11可知，树皮部分喜树碱含量最大值和最小值差距巨较大（37，5倍），木质部含量相差12倍，相比较木质部分喜树碱含量差异较小;树皮和木质部分均表现出越接近根部喜树碱含量越高的特征。

相同部位，嫩枝、主枝、主干树皮喜树碱含量均低于木质部分;但根部皮中喜树碱却高于木质部。

4 结论

马比木不同部分喜树碱含量差异较大，根部到地上

部分至植株顶端喜树碱含量逐渐降低，这与吕江明等[4]研究湖南湘西州马比木结果一致;且这种量的动态变化与臭马比木中根的喜树碱量大于茎、茎大于叶的结果亦是一致的。本研究发现马比木主干木质部、根木质部、根树皮含量均超过0.24%，大于臭马比木中相同部位喜树碱含量，远超过喜树果实中喜树碱最高量（0.190%）[19]，马比木主干部分亦可作为提取喜树碱的

本研究马比木根的喜树碱平均含量为0. 327%，大于吴开慧等[20]对贵州铜仁马比木根部的喜树碱含量0.18%，可能与测试时间和树龄有关。时间上喜树碱含量从春节至夏季逐渐降低，到秋冬以后有升高;树龄对其含量影响还有待进一步证实。

初步推断马比木中喜树碱由根部（树皮）生产，有待进一步揭示根部（树皮）生产喜树碱的机制，为探索促进马比木高效生产喜树碱的措施提供支撑，从而为抗癌药物生产提供更多原料、降低成本，并促进马比木种质资源的保护。

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