T细胞斑点试验在老年性HIV/AIDS中的临床诊断价值

李业明

(玉林市红十字会医院，广西 玉林 537000)

结核感染是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者最常见的机会性感染之一，约30%的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者死于结核病〔1〕。目前，结核病的诊断金标准为结核杆菌培养。有研究表明，HIV/AIDS 合并结核病患者痰抗酸染色阳性及痰培养阳性率低，影像学不典型，常导致误诊及漏诊〔2～4〕。T细胞斑点试验 (T-spot.TB) 是一种用于结核感染检测的新技术，已被研究证实在HIV/AIDS 合并结核感染中具有重要的辅助诊断价值〔5～7〕。然而，目前尚无研究证实其在老年HIV/AIDS患者中是否仍具有诊断价值。本研究采用回顾性研究的方法对此进行探讨。

1 资料与方法

1.1研究对象 选择2013年1月至2015年6月在玉林市红十字会医院感染科及结核病科住院的HIV/AIDS患者，所有入选患者经初筛及确诊试验确诊为HIV/AIDS，且均行T-spot.TB检查。其中，HIV/AIDS及结核病的诊断符合《艾滋病诊疗指南》〔8〕中的相关标准。排除标准：既往2 w有激素使用病史者及抗结核药物使用者。共纳入97例符合上述标准的患者，男59，女38例，平均年龄68.5(60～83)岁。HIV/AIDS合并结核病者作为试验组，HIV/AIDS未合并结核病者作为对照组。其中41例合并结核病：肺结核18例、肺外结核23例中结核性胸膜炎9例、淋巴结结核5例，结核性腹膜炎、结核性脑膜脑炎、肠结核各2例，结核性心包炎、腰椎结核和膝关节结核各1例；无结核病的HIV/AIDS患者56例：真菌性脑膜脑炎15例，卡氏肺囊虫肺病12例，肺炎或肺部感染11例，败血症(包括真菌、大肠杆菌等G-杆菌、葡萄球菌G+球菌等)9例，地方斑疹伤寒3例，肺癌合并阻塞性肺炎、伤寒和细菌性痢疾各2例；上述病例都做了相应病原学或病原抗体检查结果确诊；急性胃肠炎3例。

1.2方法 所有患者入组后进行T-spot.TB检测〔英国牛津大学研究发、原装进口试剂，注册证号：国食药监械(进)字2013第1401892号〕，由广州市华银医学检验中心-南宁分公司进行检测。方法如下：取5 ml外周静脉血，加入肝素抗凝，分离外周血单个核细胞。加入 AIM-V 培养液，调整细胞浓度至 2.5×106/ml。取已包被抗干扰素(IFN)-γ抗体微量板，加入 50 μl AIM-V至阴性对照孔，加入50 μl植物血凝素(PHA)至PHA对照孔，加入50 μl结核分枝杆菌特异抗原 A(ESAT-6)至A检测孔，加入50 μl抗原B(CFP-10)至B检测孔。各孔分别加入100 μl 2.5×105/ml的单核外周血单个核细胞(PBMC)溶液，置于5%CO2培养箱中，37℃下培养20 h。用磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，各孔分别加入50 μl标记过的IFN-γ抗体，4℃下孵育1 h，PBS洗脱，加入50 μl底物进行显色，室温下孵育7 min，纯水洗涤终止反应。对各孔颜色斑点数进行计数。判断标准：①当阴性对照孔的点数<6时，检测孔点数-阴性对照孔点数≥6为阳性；②当阴性对照孔的点数≥6时，检测孔点数>阴性对照孔的2倍为阳性。比较两组T-spot.TB阳性率，并分析其对老年性HIV/AIDS合并结核病的诊断价值。

1.3统计学方法 采用SPSS17.0统计软件包进行χ2检验。

2 结 果

试验组35例(85.25%)T-spot.TB检测阳性，明显高于对照组T-spot.TB检测阳性〔5例(8.93%)，χ2=20.08，P<0.05〕。T-spot.TB对老年HIV/AIDS患者合并结核病的灵敏度为 86.9%，特异度为 91.1%，阳性预测值为87.5%，阴性预测值为89.5%。

3 讨 论

近年来，由于老年化社会的到来及抗病毒治疗延长了HIV/AIDS患者的寿命等原因，大多数国家与地区老年HIV/AIDS的患病率逐年增长，已成为严重的社会公共卫生问题。我国老年HIV/AIDS患者也成倍增加，据最新流行病学调查显示，我国老年HIV/AIDS患者占同期住院患者的比例已达16.98%〔9〕。而且，对于老年患者而言，一方面其机体生理及免疫功能较青年人明显降低，易合并各种慢性疾病，尤其是其呼吸器官功能的减低、支气管肺泡弹力功能退化及纤毛运动能力的减弱，导致其咳嗽能力大大降低，最易合并呼吸道的感染；另一方面，老年患者合并HIV/AIDS后，其免疫功能进一步下降，上述慢性病及机会性感染的发生率更高，且病情进展更加迅速，死亡率极高〔10，11〕。其中，结核病是HIV/AIDS患者最常见的机会性感染之一，此类患者发生结核病的风险是非HIV/AIDS患者的29倍。同时，HIV与结核分枝杆菌两者可相互促进，互相影响，形成恶性循环，从而增加患者的病死率。据统计，约25%的HIV/AIDS患者死于结核病，后者也占HIV/AIDS患者全因死亡率的30%，且有逐年上升的趋势〔12〕。而随着我国老年HIV/AIDS患者的逐年增加，HIV与结核分枝杆菌的双重感染局面也将日益严重。因此，针对老年HIV/AIDS合并结核病患者的流行病学特征及诊治方案进行深入研究，对及时发现并治疗活动性及潜伏性结核病具有重要的临床意义，并在提高患者生活质量及防止耐药结核的广泛传播等方面也有举足轻重的公共卫生意义。

研究表明〔13〕，我国约16.16%的老年HIV/AIDS患者合并结核病。对这类患者而言，不仅临床及影像学表现极其不典型，而且由于受年龄及HIV感染等因素的影响，免疫力较同类非HIV/AIDS患者更加低下，以至于抗酸染色阴性及痰培养阴性均不能除外结核病的可能。而作为诊断结核病金标准的结核分枝杆菌培养及分型，又不易获取标本、培养周期长，且阳性率极低。国内研究对126例HIV/AIDS合并结核病的临床特点进行分析就发现，仅有34例患者痰抗酸染色呈阳性，痰培养阳性者更低至10例〔14〕。可见，如何早期诊断及治疗这类患者是摆在临床医生面前的难题。因此，有必要寻求一种更加敏感的诊断指标。T-spot.TB试验是由酶联免疫斑点技术发展起来的结核感染检测新技术，检测原理为：患者被结核分枝杆菌感染后，机体会分泌产生记忆性T 淋巴细胞，后者受结核相关抗原的刺激，记忆性 T 淋巴细胞可快速增殖为效应性T淋巴细胞，并会分泌出IFN-γ。因此对 IFN-γ 的数目进行检测，就可以判定机体是否发生结核感染，且由于其不会与卡介苗和其他非结核分枝杆菌发生抗原交叉反应，故特异性强〔15～17〕。研究发现，T-spot.TB检测在AIDS并肺结核患者中阳性率为81.1%，而在HIV/AIDS非肺结核患者中的阳性率为15.2%，且其检测AIDS并肺结核的灵敏度为 86.0%，特异度为 79.6%，阳性预测值为 81.1%，阴性预测值为 84.8%〔18〕，这提示T-spot.TB可对HIV/AIDS患者是否感染结核病进行诊断，本研究结果表明，T-spot.TB试验对老年HIV/AIDS患者是否合并结核病也具有诊断价值。

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