甲炎康泰颗粒制备工艺研究

石浩霞，徐云玲，解生旭，徐雅娟，李 博，高佳琪，魏 颖，王东超，徐暾海*，刘铜华

（1.北京中医药大学中药学院，北京 100029 ；2.中医养生学教育部重点实验室，北京 100029；3.吉林省中医药科学院，长春 130021）

桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis，HT）又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎[1-2]，中医属“瘿病”范畴[3]，病机始于情志不畅、肝郁气滞，日久则血行不畅而致血瘀或气郁化火，火热灼津，肝阳上亢，为本虚（脾虚等）标实（气滞、痰浊、血瘀等）[4]。现代医家林兰教授[5]认为，甲状腺为奇恒之腑，助肝疏泄，助肾生阳。中医根据病程发展所对应的临床表现将其分为早、中、晚3个时期[6]，以辨证论治、多层次论治，获得理想疗效；古代对于瘿病的治疗以“顺气为先”，古今医家以之为训，采用疏肝理气法消退甲状腺肿大及结节以改善患者自觉症状[7]。甲炎康泰颗粒由北柴胡、郁金、夏枯草、穿山龙等九味药组成，是按照中药新药研发要求研制的6类新药，为临床经验方。具有疏肝解郁、化瘀祛痰、软坚散结之功效，主治肝郁气滞、痰浊瘀阻。本文对其制备工艺做如下研究。

1 仪器与试药

岛津LC-2010C高效液相色谱仪（日本）；Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱（美国）；AG245型分析天平（0.01 mg，瑞士）；KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。药材购自北京市双桥燕京中药饮片厂；迷迭香酸（批号111871-201505）、柴胡皂苷A（批号110777-201510）、柴胡皂苷D（批号110778-201510），购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇，色谱纯，霍尼韦尔；三氟乙酸（TFA），分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；双蒸水为实验室自制。

2 方法与结果

2.1 提取工艺研究 方中夏枯草活性成分为三萜及甾体皂苷类，玄参主含环烯醚萜及苯丙素类，黄芪含多糖及三萜皂苷类，乌梅含有机酸类。结合2015版《中国药典》一部各药[浸出物]项下规定[8]，确定以上4味药用水煎煮法提取；柴胡主含皂苷类成分，郁金含姜黄素类成分，穿山龙含甾体皂苷，浙贝母含生物碱，山慈菇含木质素类。结合药典[8]确定以上5味药采用乙醇回流法提取。

经预实验发现，水提工艺影响因素主要是加水量、提取时间、提取次数（表1）；醇提工艺影响因素主要是乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数（表2）。

2.1.1 水提工艺设计 称取处方量药材共9份，按照L9(34)正交设计表依次试验，以出膏率和迷迭香酸提出量为指标，进行方差分析。

表1 水提因素水平表

表2 醇提因素水平表

1） 色谱条件：甲醇-0.1%TFA水，梯度洗脱：0～60 min，20%→40%甲醇[9-10]；流速1 mL/min，柱温35 ℃；UV检测器-330 nm。2）对照品溶液的制备：精密称定迷迭香酸对照品5 mg，甲醇定容至5 mL，摇匀，得对照品储备液。3）供试品溶液的制备：正交试验所得膏粉各2 g，精密称定，置密塞锥形瓶，精密加稀乙醇50 mL，称重。超声30 min（功率100 W），放冷，再次称重，稀乙醇补足失重。滤过，用20 mL稀乙醇分两次洗涤药渣和器皿，合并至滤液，蒸干，稀乙醇定容至10 mL。4）测定法：对照品进样量为5 μL；供试品进样量为10 μL。

结果分析：3个因素对提取结果的影响顺序为，C＞B＞A，A2＞A3＞A1，B3＞B1＞B2，C3＞C2＞C1，因此，最佳水提工艺为A2B3C3，即加15倍量的水，提取3次，每次提取2 h。

2.1.2 醇沉工艺研究 取5倍处方量药材提取，提取液浓缩至相对密度为1.05（50～60 ℃），等分为4份，分别加乙醇至含醇50%、60%、70%、80%，沉淀过夜，上清液蒸干，考察指标为出膏率和迷迭香酸提出量。

1）色谱条件：甲醇-0.1%TFA水，梯度洗脱：0～35 min，20%→40%甲醇。2）供试品溶液的制备：取各浸膏1 g，精密称定，精密加入稀乙醇30 mL，密塞，称重，超声处理30 min（功率100 W），放冷，称重，稀乙醇补足失重，过0.45 μm滤膜。3） 测定法：对照品进样量5 μL；供试品进样量为20 μL。

结果分析：醇沉实验应选择出膏率相对较小，且迷迭香酸提出量最大的条件。综合分析以上实验结果，采用70%乙醇进行醇沉，迷迭香酸提出量最大，因此采用70%乙醇进行醇沉。

2.1.3 醇提工艺设计 称取处方量药材9份，按照正交设计表提取，以出膏率和柴胡皂苷A、D提出量为指标，进行方差分析。1）色谱条件：乙腈-水，梯度洗脱：0～90 min，25%→80%乙腈；流速1 mL/min，柱温35 ℃；UV检测器- 210 nm。2）对照品溶液的制备：分别精密称定柴胡皂苷A、D对照品4、5 mg，甲醇定容至10 mL，摇匀，得混合对照品储备液。3）供试品溶液的制备：取正交醇提各试验所得干浸膏1 g，精密称定，置密塞锥形瓶，精密加甲醇20 mL，称重。超声30 min（功率100 W），放冷，称重，甲醇补足失重。滤过，用10 mL甲醇洗涤药渣和器皿，合并至滤液。蒸干，甲醇定容至5 mL。4）测定法：对照品、供试品进样量各15 μL。

结果分析：按柴胡皂苷A、D的提出总量分析，影响提取因素的顺序为A＞D＞B＞C，A3＞A2＞A1，B3＞ B1＞ B2，C2＞ C3＞ C1，D3＞ D2＞D1最佳工艺条件为A3 B3C2D3，即最佳工艺为：加6倍量80%乙醇，回流提取3次，每次1 h。

2.2 成型工艺研究

2.2.1 原料药的制备 取10倍处方量的药材，按“2.1”项下最佳工艺提取、浓缩、粉碎，过80目筛备用。

2.2.2 辅料种类的选择 选择有助于成型、溶解且吸湿性小的辅料。初步确定以可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素（MCC）[11-14]等为辅料。以吸湿性、成型性等因素综合评分确定最佳辅料种类。综合评分[15-16]=（20/最大成型性值）×成型性值+（最小吸湿率值×30）/吸湿率值+（25/最大溶化性值）×溶化性值+（10/最大堆密度值）×堆密度值+（最小休止角值×15）/休止角。

制粒：取过80目筛的干膏粉13份，每份10 g，0号不加辅料考察吸湿性，1-12号物料比按表5加入，混匀，以80%乙醇作为润湿剂制软材，14目筛制粒，60 ℃干燥2 h（逐渐升温，及时翻动，避免结块），14目筛整粒，60 ℃干燥30 min，即得。

1）成型性的测定[17]：将制备好的颗粒称重，分别过一号筛、五号筛，收集能过一号筛但不能通过五号筛的颗粒，称重，计算成型率，结果见表4。

成型率=过筛后颗粒质量/过筛前颗粒质量×100%。

2）堆密度的测定：将过筛后的一定质量（m/g）的颗粒放入量筒轻晃均匀，读出体积（v/mL），计算堆密度，结果见表4。

堆密度= m/v。

3） 休止角的测定：休止角系指粉体堆积成的自由斜面与水平面所形成的最大角，休止角越小，流动性越好[18]。本文采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于坐标纸上1厘米处，将颗粒沿漏斗壁倒入漏斗直到药粉形成的圆锥尖端接触到漏斗口，从坐标纸上测出圆锥直径（2R），计算休止角，结果见表4。

休止角α = arctg（H/R）。

4） 溶化性的测定[15]：在干燥至恒重的5 mL离心管中加入精密称定的样品颗粒，精密加入沸水5 mL，振摇5 min，4 000 r/min离心15 min，弃去上清液，残渣于80 ℃下烘干至恒重后精密称定，计算溶化率，结果见表4。

表3 辅料种类考察

溶化率=融化的颗粒质量/总质量×100%。

5）吸湿性的测定：将底部盛有NaCl过饱和溶液的干燥器在室温下放置48 h，使其内部相对湿度为75%[19]。精密称取0.5 g颗粒平铺于干燥至恒重的称量瓶中，于60 ℃干燥至恒重，精密称定后置于干燥器内，开盖，于72 h后精密称定，计算吸湿率，结果见表6。

吸湿率=吸湿前颗粒质量/吸湿后颗粒质量×100%。上述结果表明，糊精-乳糖（3:1）辅料综合评分最高。

表4 不同辅料综合评分

2.2.3 辅料用量考察 取干膏粉5份，每份10 g，将上述结果中制粒最好的辅料（组合），即糊精-乳糖3:1加入，同“2.2.2”项下方法制粒，以成型性为指标选择最佳辅料用量，结果显示药辅比在1:1～1:1.5的范围内，制粒过程容易，颗粒均匀，成型率最高，实际扩大生产可根据情况做微调。

2.2.4 矫味剂用量考察 本方提取物味酸、苦、涩，为改善服用口感，考虑加入矫味剂。本研究选择阿斯巴甜作为矫味剂[20]，结果显示，当阿斯巴甜用量为1%时，口感最佳。

2.2.5 润湿剂考察 以70%、75%、80%、85%、90%、95%浓度的乙醇作为润湿剂进行制粒，以成型率为指标，结果显示，以80%乙醇作为润湿剂，制粒过程容易，颗粒软硬程度最适宜，成型率最高。

2.2.6 临界相对湿度（CRH）考察 根据上述实验结果确定的最佳成型工艺制粒，并在以下不同湿度环境中使颗粒吸湿至恒重，计算吸湿百分率，以相对湿度为横坐标，吸湿百分率为纵坐标绘制吸湿曲线，曲线两条切线的交点处即为临界相对湿度[21]。提示颗粒的任何操作环境相对湿度不得高于该临界值。结果（表5、图1）显示，颗粒CRH为78%。

表5 临界相对湿度考察

图1 甲炎康泰颗粒临界相对湿度

2.3 结果 本文通过正交试验确定了甲炎康泰颗粒的最佳提取工艺，方中夏枯草等4味药采用水煎煮法提取，最佳工艺为：加15倍量水，提取3次，每次2 h，水提液浓缩至相对密度1.05，通过70%醇沉过夜；柴胡等5味药采用乙醇回流法提取，最佳工艺为：80%乙醇，加6倍量，提取3次，每次1 h。该工艺可以保证出膏率及相应活性成分最大化的提出。

以吸湿性和成型性等为指标，本文所得甲炎康泰颗粒的最佳成型工艺为，以糊乳糖3:1作为辅料，药粉辅料比为1:1.5，加入1%阿斯巴甜作为矫味剂，以80%乙醇作为润湿剂制软材，该条件下制得的颗粒质地均匀、成型性高、溶化性好、吸湿性小，综合评分最高且口感最佳。

临界相对湿度实验结果显示，其CRH为78%。提示通过该方法制得的颗粒，操作坏境相对湿度不得高于78%。

3 讨论

本方含9味药，因其有效成分极性各异，溶出率各不相同，因此本文通过预实验并参考药典对不同药材采用不同的提取方法。其中，柴胡、郁金、穿山龙、浙贝母、山慈菇采用乙醇回流提取法；夏枯草、玄参、黄芪、乌梅等药有效成分水溶性较好，采用水煎煮法提取。设计影响提取率的因素水平，针对不同提取方法选取不同的指标性成分，将提出量作为考察依据，通过正交试验优化最佳提取工艺。

成型工艺中，选择储存、携带、运输和服用较为方便的颗粒剂为本方剂型。初步确定使用糊精、乳糖、微晶纤维素等优良的无糖型辅料作为稀释剂，以成型性、流动性、防潮性、溶化性等为考察指标选择最佳辅料及配比；又因膏粉苦、酸、涩，服用口感不佳，考虑加入矫味剂以期改善味觉，人工合成的甜味剂用量已受限制，矫味剂的使用趋向于天然化，本研究采用甜度高、用量少、价格合理的阿斯巴甜（蛋白糖）作为矫味剂，用1%的量即可较好地改善服用口感。最后考察该方法下制备颗粒的临界相对湿度值，为扩大生产环境条件提供参考。

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