两种检验方法在肺结核早期诊断中的应用比较

黄杰，曾成林，陈博智

（广东省化州市人民医院 检验科，广东 茂名525100）

肺结核是临床具有高传染性、高发病率的肺疾病，主要通过呼吸道传播，致病菌为结核分枝杆菌，体征、症状表现以咳嗽、咳血、消瘦等为主。有统计显示我国肺结核发病率位居世界第二位，男性发病率略高于女性［1］。肺结核发病隐匿、病程长，且无特效药物可治疗，若诊治不及时不仅对患者身心健康造成影响，严重者还可危及生命，故早期有效诊断疾病对临床治疗有重要意义［2］。目前临床较为常见的检验方法包括抗原胶体金法、皮肤结核菌素纯蛋白衍生物 （PPD）检验、聚合酶链式反应 （PCR）检验以及痰涂片结核菌检测法等。本研究对我院收治的54例肺结核早期患者以及57例健康体检者进行PPD、PCR检验，观察两种方法对肺结核的诊断效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以我院2015年6月至2017年3月期间收治的54例肺结核早期患者为观察组，患者因出现不同程度咳嗽、倦怠、咳血症状入院检查，经胸部CT、胸膜活检确诊为肺结核；其中男性34例，女性20例；年龄32～68岁，平均年龄（48.0 ± 3.5） 岁； 病程 2 ～ 10 个月， 平均病程 （6.4 ± 1.8） 个月。同时随机选取57例同期入院进行健康体检、所有指标均正常者为对照组，其中男性35例，女性22例；年龄30～67岁，平均年龄 （48.3±3.6）岁。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有对象均自愿参与并签署知情同意书。两组对象的一般资料 （年龄、性别）比较，差异无统计学意义 （P＞0.05）。

1.2 检验方法 ①PCR检验：取受检者晨起深咳后痰液0.5 mL加入1 mol／L的氢氧化钠溶液5 μL，混合后在37℃的环境下放置40分钟，后使用离心机以10 000 r／min速度对混合液进行离心处理，离心时间5分钟，吸除上清液并以生理盐水对剩下液体进行洗脱至中性。同时取患者胸水、血清各1 mL进行离心沉淀处理，再加入50 μL裂解液行沸水浴，水浴时间控制在10分钟左右，水浴后行离心处理，以10 000 r／min速度离心5分钟，将15 μL反应液加入0.2 μL Taq酶中混合均匀，再加入石蜡油 20 μL封顶，最后加入 5 μL上清液形成 TB－DNA模板。行离心处理，参数为10 000 r／min速度、离心时间5分钟，后在不同温度90℃、55℃、72℃下扩增30 s、30 s、60 s，循环35次后取PCR扩增液20 mL进行电泳。②PPD检验：将PPD（北京华怡生物技术公司）以生理盐水稀释成不同浓度，取0.1 mL注射于患者左前臂掌侧前1／3处，48～96 h观察患者皮肤局部反应。

1.3 观察指标 观察PPD、PCR检验用于肺结核诊断的阳性率，比较两种检验方法的诊断价值。其中PCR阳性标准［3］：紫外线下有160 bp橙黄色荧光带。PPD阳性标准：患者注射部位出现红肿、硬节且硬节直径0.5 cm以上、1.5 cm以下为阳性，患者局部反应强烈、硬节直径1.5 cm以上为强阳性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 15.0统计软件进行统计学分析。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以x±s表示，采用t检验；以ROC分析两种检验方法的诊断价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的PCR、PPD检验结果比较 PCR检验中，观察组阴性率为31.5%，对照组阴性率为94.7%；PPD检验中，观察组阴性率为59.3%，对照组阴性率为78.9%。见表1。

表1 两组的PCR、PPD检验结果比较 ［n（%）］

2.2 观察组两种检验方法的阳性率比较 PCR检验的阳性率为68.5%， 显著高于 PPD 的检验阳性率 40.7% （P ＜0.05）， 见表 2。

表2 观察组两种检验方法的阳性率比较 （n＝54）

2.3 两种检验方法诊断肺结核早期的价值分析 经ROC分析，PCR、PPD均对肺结核早期患者具有一定的诊断价值 （P<0.05），且PCR的诊断价值显著高于PPD，见表3。

表3 两种检验方法诊断肺结核早期的价值分析

3 讨论

近年来临床肺结核发病率呈明显上升趋势，此病不仅对患者肺脏有影响，同时其还可侵害人体其他多个器官，对患者的生命安全造成威胁，目前已成为我国公共卫生防治的主要疾病之一［4］。但由于疾病发病隐匿，肺结核早期症状不典型且表现多样，造成临床诊断难度加大，易出现误诊、漏诊，故临床一直在寻求一种检验手段能有效诊断早期肺结核，从而确保患者能得到及时有效的治疗。

目前临床肺结核检验手段较多，常见方法有抗原胶体金法、PPD检验、PCR检验以及痰涂片结核菌检测法等，临床实践发现痰涂片检验用于肺结核诊断的准确性高，但在早期肺结核中检出率较低，而抗原胶体金法受患者血液中免疫抑制因子、结核抗体等影响，检验时易出现误诊、漏诊情况［5］。PPD是临床筛选结核感染的重要指标，操作简便，本研究结果显示，PPD用于诊断时，观察组阳性率为40.7%，对照组阳性率为21.1%，表明PPD检验能有效判断患者是否有肺结核感染，用于肺结核早期诊断具有一定临床意义。PPD检验机理为人体在感染结核杆菌后会促使机体内产生相应致敏淋巴细胞，该细胞对结核杆菌有识别能力，当再次遇到少量结核菌素时，此细胞会刺激机体释放淋巴因子，使血管通透性增加，局部出现皮肤反应［6］。但观察组的检验结果显示，PCR检验的阳性率为68.5%， 显著高于 PPD 检验的 40.7% （P ＜0.05）， 表明 PCR 检验方法用于早期肺结核诊断的准确性高于PPD检验，造成PPD出现假阴性与部分患者虽然已感染但尚未产生变态反应或检验使用的PPD液纯度不够等有关。

PCR检验是对患者结核菌基因片段进行检测，不仅灵敏度高、特异性高，且准确度高，将其用于早期肺结核诊断，能有效避免体内因子、未产生变态反应、抗体等影响，从而有效提高诊断阳性率［7］。本研究结果显示，PCR检验中，观察组阳性率为68.5%，对照组阳性率为5.3%，表明PCR检验能有效判断患者是否有结核杆菌感染，有效诊断早期肺结核患者。PCR检验通过将结核菌特异性荧光探针与结核菌特异性引物经过PCR反应液、Taq酶等成分处理后，以体外扩增法检测结核菌DNA，根据DNA结果来判断患者是否被感染。ROC分析结果显示，PCR、PPD检验均对肺结核早期患者具有一定的诊断价值，且PCR的诊断价值显著高于PPD。PCR扩增时在密闭环境下进行，能有效避免扩增物被污染，从而提高疾病诊断准确度，避免假阴性情况出现。

综上所述，采用PCR检验诊断早期肺结核，准确性高，具有临床应用价值。

[1] 黄丽美,林健雄,李宏彬,等.肺结核早期诊断中不同检验方法的应用 [J].现代诊断与治疗,2015,26(3):493-494.

[2] 韦惠玲.两种检验方法在肺结核早期中应用及预防研究 [J].河南预防医学杂志,2016,27(5):345-346.

[3] 曹冉冉,刘邦英,周子人,等.分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用 [J].中国防痨杂志,2012,34(2):103-106.

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[5] 蔡常辉,梁连辉,曾桂云,等.实时荧光PCR与BACTEC MGIT960快速培养在初治痰涂片阴性未受抗结核治疗的肺结核诊断中的应用 [J].放射免疫学杂志,2012,25(1):68-70.

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[7] 杨萍,闫国蕊,王勇鸣,等.3种结核抗体检测方法对结核病诊断价值对比分析 [J].河南预防医学杂志,2012,23(6):465-466.