新疆焉耆县不同动物源大肠杆菌耐药性调查

姚晓慧，隆茂俊，库尔班乃木·卡地尔，王 凯，夏利宁

(1.新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052；2.新疆焉耆县畜牧兽医站，新疆焉耆 841100)

0 引 言

【研究意义】大肠埃希氏菌又称大肠杆菌，是一种典型的革兰氏阴性无芽孢直杆菌，是人畜临床常见的肠道共栖菌，在特定条件下可致大肠杆菌病，并能随着粪便排出而污染环境[1]。【前人研究进展】大肠杆菌病发生后一般多采用抗菌药物进行治疗，使其得到一定的控制，但是由于防控过程中抗菌药物广泛及不合理使用，使细菌耐药严重，并且多重耐药问题更加突出。随着出现多重耐药菌株的出现，严重影响临床治疗效果，且增加治疗成本[2]。耐药大肠杆菌不仅直接威胁家畜，也可以通过环境污染间接影响家畜，从而对类的健康构成威胁。【本研究切入点】对新疆焉耆县主要规模化养殖场不同动物粪源大肠杆菌进行临床常用抗菌药物的耐药性调查，了解不同动物携带大肠杆菌的耐药情况。【拟解决的关键问题】为补充新疆地区大肠杆菌耐药数据库的建设提供有效依据，耐药结果可为当地临床合理用药提供参考意义。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株

2016年10月在新疆焉耆县主要的规模化养殖场进行样品采集。猪源：采集对象为健康仔猪(40日龄：100份粪样；60日龄：110份粪样)和妊娠母猪(100份粪样)；羊源：采集对象为健康2～3岁羊(218份粪样)；牛源：采集对象为2～8岁健康牛(85份粪样)。通过肛拭子在直肠采集新鲜粪样共613份。大肠杆菌标准质控菌为ATCC25922，购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.1.2 培养基

麦康凯培养基、普通肉汤和Mueller-Hinton(MH)培养基均购自北京奥博星生物技术有限公司。

1.1.3 药品

喹诺酮类：环丙沙星(含量93.9%)、诺氟沙星(含量99.9%)和恩诺沙星(含量100%)；β-内酰胺类：头孢噻呋(含量89.6%)、氨苄西林(含量99.4%)和阿莫西林(含量95%)/克拉维酸(含量100%)；氨基糖苷类：安普霉素(含量100%)、庆大霉素(含量63.3%)和阿米卡星(含量99.06%)；酰胺醇类：氟苯尼考(含量98%)。上述药品均为标准品，购自中国兽药监察所。

1.2 方 法

参考美国临床实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)推荐的操作程序，采用琼脂稀释法检测大肠杆菌对上述10种抗菌药物的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)值测定，以大肠杆菌ATCC25922作为质控菌株，根据CLSI标准进行结果判定。

2 结果与分析

2.1 细菌的分离鉴定

不同动物粪源大肠杆菌总体分离率为87.1%。列出采集的粪样及大肠杆菌分离情况。表1

2.2 不同动物粪源大肠杆菌耐药

不同动物粪源大肠杆菌对10种临床常用抗菌药物的耐药结果为，40日龄仔猪粪源大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、头孢噻呋、庆大霉素、安普霉素、阿米卡星10种抗菌药物的耐药率依次为97.6%、97.6%、97.6%、96.4%、91.6%、96.4%、12.0%、73.5%、45.8%、8.4%；60日龄仔猪粪源大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、头孢噻呋、庆大霉素、安普霉素9种抗菌药物的耐药率依次为77.0%、68.0%、83.0%、63.0%、66.0%、73.0%、18.0%、40.0%、24.0%；妊娠母猪粪源大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素、安普霉素8种抗菌药物的耐药率依次为58.2%、66.3%、28.6%、18.4%、43.9%、26.5%、39.8%、6.1%。

牛粪源大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、头孢噻呋、庆大霉素、安普霉素9种抗菌药物的耐药率依次为100%、50.6%、25.9%、14.8%、12.3%、14.8%、7.4%、16.0%、18.5%。

羊粪源大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、头孢噻呋、庆大霉素、阿米卡星9种抗菌药物的耐药率依次为50.6%、22.1%、60.5%、7.0%、2.9%、7.0%、5.2%、9.9%、4.7%。图1

2.3 不同动物粪源大肠杆菌多药耐药

不同动物粪源大肠杆菌的多药耐药率显示，40日龄仔猪粪源大肠杆菌以6耐(19.3%)、7耐(27.7%)和8耐(42.2%)为主，占89.2%；60日龄仔猪粪源大肠杆菌以4耐(18.0%)、6耐(17.0%)、7耐(18.0%)和8耐(14.0%)为主，占67.0%；妊娠母猪粪源大肠杆菌以2耐(20.4%)、3耐(22.4%)和4耐(20.4%)为主，占63.2%；牛粪源大肠杆菌主要以1耐(32.1%)、2耐(25.9%)和3耐(13.6%)为主，占71.6%；羊粪源大肠杆菌主要以0耐(17.2%)、1耐(37.2%)和2耐(26.7%)为主，占81.1%。其中40日龄仔猪粪源大肠杆菌有1株菌对被检10种抗菌药物均耐药。图2

表1 不同动物粪源的大肠杆菌分离
Table 1 The rate of Escherichia coli isolated from feces of different animals

来源Source采样数Numberofsamples分离数Numberofisolates分离率Separationrate(%)猪源(40日龄仔猪) Strainsfrom40-day-oldpiglets1008383猪源(60日龄仔猪) Strainsfrom60-day-oldpiglets110100909猪源(妊娠) Strainsfrompregnantsows1009898牛源 Strainsfromcattle8581953羊源 Strainsfromsheep218172789总计 Total613534871

图1 不同动物粪源大肠杆菌的耐药率
Fig.1 Resistance rate of Escherichia coli isolated from feces of different animals

图2 不同动物粪源大肠杆菌的多药耐药率比较
Fig.2 Comparison of multidrug resistance rates of Escherichia coli isolated from feces of different animals

3 讨 论

3.1 不同生长期的猪粪源大肠杆菌耐药比较

40日龄仔猪粪源大肠杆菌对青霉素类、酰胺醇类及喹诺酮类抗菌药物的耐药程度明显高于60日龄仔猪粪源大肠杆菌和妊娠母猪粪源大肠杆菌的耐药率；60日龄仔猪粪源大肠杆菌和妊娠母猪粪源大肠杆菌耐药结果相比较，两者均对阿米卡星耐药率为0%，60日龄仔猪粪源大肠杆菌对庆大霉素和氨苄西林的耐药率与妊娠母猪粪源大肠杆菌对这两种抗菌药物相近，60日龄仔猪粪源大肠杆菌对其余7种抗菌药物均是高于妊娠母猪粪源大肠杆菌。总的看来，不同生长期猪粪源大肠杆菌都对β-内酰胺类及酰胺醇类抗菌药物耐药，对阿米卡星都非常敏感，呈现一定的相似性，但它们对被检抗菌药物的耐药有各自的特点，可能与不同生长阶段发病频率和用药不同有关。

研究表明，仔猪粪源大肠杆菌对被检10种抗菌药物耐药情况比妊娠母猪粪源样大肠杆菌耐药情况严重，这可能由于哺乳仔猪的抵抗力较差，相应使用抗菌药物也较多，而妊娠母猪由于怀孕，尽量避免使用抗菌药物，但也存在不同程度的耐药现象[3]。该县主要的规模化养殖场猪源多药耐药现象较严重，建议以后治疗大肠杆菌病时应避免使用青霉素类、酰胺醇类及喹诺酮类抗菌药物，以便提高治疗效果。

3.2 不同动物源粪源大肠杆菌耐药性

研究表明，猪粪源大肠杆菌对10种抗菌药物的耐药情况整体比牛粪源大肠杆菌和羊粪源大肠杆菌复杂多样，0～10耐均有分布，以8耐为主，分析其原因是在猪的养殖过程中，使用的抗菌药物数量多且种类全。牛粪源大肠杆菌对阿莫西林的耐药率高达100%。分析其原因是阿莫西林作为治疗乳房炎的首选药，养殖场长期使用。牛粪源与羊粪源大肠杆菌均以1和2耐为主，造成这一现象的主要原因可能是长期使用一类抗菌药物，在治疗过程中不进行药敏试验，不合理使用抗菌药物。该县主要的规模化养殖场在治疗牛源与羊源大肠杆菌病时应该采用敏感药物，方可提高治疗效果。

3.3 与其他地区耐药

李鹏[4]对西藏猪源大肠杆菌耐药进行检测，结果显示对头孢噻呋、氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率分别为89.1%、72.1%、7.8%、7.0%和27.9%，除了头孢噻呋和氨苄西林的耐药率高于试验的耐药结果，其余三个均低于试验结果，这可能与地区差异、抗菌药物使用数量及种类不同有关系，也有可能与养殖场常发病及其用药方案不同有关系。赵睿[5]对四川地区猪源大肠杆菌耐药性检测中发现对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氟苯尼考和阿米卡星耐药率分别为88.2%、82.7%、78.2%、92.0%、24.0%；王磊杰[6]对哈尔滨地区致病性猪源大肠杆菌进行耐药性检测，发现其对氟苯尼考的耐药率超过85%，对恩诺沙星、庆大霉素的耐药率均超过50%，两人的耐药结果均高于试验耐药检测，造成耐药差异可能与动物的生理与病理状态有关。多药耐药结果显示，仔猪粪源大肠杆菌以6～7耐为主，多药耐药水平与夏利宁等[7]报道相近，妊娠母猪的耐药程度较低于其的报道。

张伟等[8]对北方不同地区犊牛腹泻大肠杆菌耐药性进行检测，结果显示其对庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氟苯尼考的耐药率分别为38.9%、23.5%、34.3%、20.6%、50.0%，耐药结果均高于试验耐药检测，造成耐药差异可能是因为在兽医临床上，氯霉素类的氟苯尼考、氨基糖苷类的庆大霉素等都是治疗大肠杆菌病的常用药物。张金宝[9]对宁夏地区牛源大肠杆菌耐药性分析，发现其对氨苄西林、庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考、诺氟沙星和恩诺沙星的耐药率分别为54.7%、27.4%、13.7%、13.2%、11.2%和18.3%，其中氨苄西林、环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星耐药结果与其的耐药结果相符合。轩慧勇等[10]对新疆奎屯地区不同团场的牛源大肠杆菌进行耐药性调查，奎屯地区牛源大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、安普霉素、氟苯尼考、庆大霉素、恩诺沙星和诺氟沙星的耐药率分别为2.2%、20.0%、13.3%、6.7%、3.3%、5.5% 和1.1%。试验牛粪源大肠杆菌对安普霉素的耐药结果与轩慧勇等报道的耐药结果接近，其余6种抗菌药物耐药率均高于其耐药结果。奎屯地区牛源大肠杆菌多重耐药最多达到5耐，其中以1～2耐为主，耐药率分别为20.0%和6.7%。试验中牛源大肠杆菌多药耐药可达到9耐，也以1～2耐为主，耐药率高于奎屯地区。两者相比较表明大肠杆菌的耐药性在呈上升趋势，逐年增加，其可能的原因与细菌耐药机制的进化速度相关。Sato等[11]发现用添加抗生素的饲料喂养的奶牛粪源中大肠埃希菌对氨苄西林、庆大霉素的耐药率明显高于不添加抗生素饲养的奶牛。说明抗生素在养殖业中作为饲料添加剂或保健药物，长期、大量使用加速了细菌选择过程，导致耐药菌株逐渐增多。牛源大肠杆菌耐药率比其他两种动物源菌的耐药率低，可能是因为最近几年相关部门对奶制品的质量监督更加严格，使牛在饲养过程中降低对抗菌药物的使用，导致牛源大肠杆菌对抗菌药物的耐药率较低[12]。

底丽娜等[13]对新疆地区羊源大肠杆菌进行耐药性检测，发现其对安普霉素、阿莫西林/克拉维酸、阿米卡星、氨苄西林、头孢噻呋的耐药率依次为33.9%、21.2%、15.5%、14.1%、8.8%；以1～3耐为主，占62.5%。试验中羊粪源大肠杆菌对氨苄西林和头孢噻呋耐药结果与其相近，安普霉素和阿米卡星的耐药与其相比较低，而对阿莫西林的耐药率则高。多药耐药结果来看，试验以0～2耐为主，多以青霉素类抗菌药物为主，占81.1%。

4 结 论

新疆焉耆县主要的规模化养殖场不同动物粪源大肠杆菌总体耐药情况从高到低依次为40日龄仔猪、60日龄仔猪、妊娠母猪、牛、羊。该县主要的规模化养殖场在治疗细菌性疾病时，需慎用青霉素类、酰胺醇类及喹诺酮类药物，合理交替轮换使用抗生素能有效减少耐药菌产生。

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