513例尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒感染特征分析

梁爱芬，何韶坚，华仙丽，雷亚利，隋洪

为了解东莞地区尖锐湿疣（condyloma acuminate，CA）组织中人乳头瘤病毒 （human papilloma virus，HPV）感染的型别特点及分布情况，采用导流杂交基因芯片技术检测HPV21种亚型。现对在我院门诊就诊的513例尖锐湿疣患者HPV亚型阳性结果进行分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 研究对象参照中国疾病预防控制中心制定的《性传播疾病临床诊疗指南》中CA的诊断标准，选取2014年6月-2016年6月来自本院皮肤科确诊为HPV阳性的CA患者，共513例，男性尖锐湿疣患者156例，占30.41%；女性尖锐湿疣患者357例，占69.59%，年龄16～55岁。

1.2 采样方法 疣体样本使用专用手术剪刀，剪下疣体组织放入细胞保存液或使用棉拭子反复摩擦疣体直至疣体出血，然后将棉拭子放入细胞保存液中。

1.3 仪器与试剂 广东凯普生物科技股份有限公司提供的PCR仪（KPTC48）、Hybrid Max医用核酸分子快速杂交仪、人乳头瘤病毒HPV分型试剂盒（PCR+膜杂交法）。

1.4 检测方法 ⑴DNA分离提取：取保存有样本的细胞保存液500μl，14000rpm离心5min，去上清后，加入细胞裂解液提取DNA。最后取1μlDNA提取液进行PCR扩增；⑵PCR扩增：在KPTC48型PCR扩增仪器上进行扩增，反应条件为95℃9min→95℃20s、55℃ 30s、72℃ 30s 扩 增 40 个 循 环 →72℃5min，扩增结束后进行第二个程序，95℃7min变性处理；⑶导流杂交：95℃7min变性处理的PCR产物→冰水浴 2～5min→加入反应槽孔 45℃杂交10min→加入0.5ml封阻液封闭膜→显色。⑷结果判读：阳性为呈蓝紫色的点，HPV病毒类型判断依据HPV分型膜条上的阳性点分布位点情况。

1.5 统计学方法 所有数据采用SPSS 21.0统计软件包进行分析。计数资料的比较采用χ2检验，检验标准为 P<0.05。

2 结果

2.1 513例尖锐湿疣患者HPV亚型检测结果和分布 21种HPV亚型均被检出，其中单一型HPV感染占 74.27%（381/513）， 多重型 HPV感染占25.73%（132/513），低危型阳性率为 59.84%，高危型阳性率为40.16%；主要HPV型别：6型(23.93%)、11 型 (19.52%)、16 型 (8.91%)、52 型(7.64%)、58 型(6.09%)、18 型(4.87%)，详见表 1。

2.2 HPV感染性别分组比较 男性患者感染HPV阳性率为30.41%(156/513)，多重型感染率为13.46%（21/156），高危型感染率为 36.54%（57/156，包含多重）；女性患者感染HPV阳性率为69.59%(357/513)，多重型感染率为 31.09%（111/357），高危型感染率为63.03%（225/357，包含多重）。男、女性HPV高危型以16、52、58亚型为主。男女性高危型HPV感染阳性率差异有统计学意义（P<0.01）。

表1 513例尖锐湿疣患者HPV亚型分布情况

2.3 多重感染病例分布情况 132例多重HPV亚型混合感染者中，二重HPV亚型感染87例（65.91%），三重 HPV 亚型感染 30例（22.73%），四重HPV亚型感染9例（6.82%），五重HPV亚型感染 3例 （2.27%）， 六重 HPV亚型感染 3例（2.27%）。组合方式以低-低危型、低-高危型和高-高危型三种，主要以低-高危型为主，详见表2。

表2 HPV多重感染病例分布情况

3 讨论

尖锐湿疣（CA）是以生殖器部位皮肤黏膜的良性增生性损害为主的一种性传播疾病，复发率及传染性强，据报道其居于国内性传播疾病的第二位[1]。而人乳头瘤病毒（HPV）是其病原体，与多种恶性肿瘤如宫颈癌、阴茎癌、食道癌、肺癌、肠癌的发生相关[2]，是宫颈癌发生的主要因素[3，4]。 目前已发现的HPV基因型约200多种，有45型HPV可感染生殖道和经性接触传染，主要有 6，11，16，18，31，33等20多个型别[5]。本研究运用分子生物学技术导流杂交基因芯片法，是目前常用的检测方法，可同时检测多种HPV型别，在检测的灵敏度和特异性有很大的提高[6]。本研究所用试剂盒检测出21种高低危型HPV基因型，涵盖了主要流行型别，结果显示在阳性患者中共检出21种型别，单一型HPV亚型感染的低危型感染率较高的有HPV6型(23.93%)，HPV11 型(19.52%)，高危型感染率前四名有 HPV16 型(8.91%)、HPV52 型(7.64%)、HPV58 型(6.09%)、HPV18型(4.87%)。与国内文献报道CA患者 HPV 亚型分布相似[7，8]，与国外 Potocnik U 等[9]研究CA患者皮损中HPV分型以低危型为主，且HPV6、11型明显占优的报道一致，而在检测结果中多重型感染的感染率为25.73%，多重型感染形式有低-高危型、低-低危型和高-高危型，以二重感染（65.91%）最多，与山西报道的多重型感染占22.5%和二重感染占72.22%相近[10]。本研究显示在本地区CA患者中以HPV6型和HPV11型感染为主，可存在多重型别HPV亚型感染。

HPV感染与患者性别因素的关系非常密切，国内一项针对3489例CA患者的流行病学调查显示，男性患者的发病率明显高于女性患者，但女性的HPV检出率却高于男性[11]，与本研究结果相似，在HPV感染性别分组比较显示，女性感染比例（69.59%）明显高于男性。而在HPV感染类型中，本研究结果显示，男性以HPV6、11、43型等低危型感染为主，女性以HPVl6、52、58型等高危型感染为主，在HPV多重感染中，高危型HPV以混合感染为主(89.7%)，女性更容易感染高危型HPV，而且女性多重感染比例明显高于男性[12-15]，这值得引起我们的重视。

本研究通过对尖锐湿疣组织HPV型别的检测，所映出目前该地区尖锐湿疣患者HPV感染型别特点，女性对高危型HPV的易感性，男女性别感染具有差异性，加强HPV感染的预防与健康教育，重视女性CA患者的HPV筛查。