广西肝癌高发区人群机体免疫水平与HBV感染的关系

梁新强，宁淑芳，刘海洲，王海燕，唐亚梅，张力图，崔 英，利基林*

（广西医科大学附属肿瘤医院，1.实验研究部；2.教务科，广西 南宁 530021）

原发性肝癌（primary liver cancer，PLC）是我国甚至全世界最常见的恶性肿瘤之一，据我国2010年肿瘤登记资料统计，广西肝癌的发病率和死亡率分别为43.76/10万和38.52/10万，均高于全国的28.71/10万和26.04/10万水平[1]，肝癌的发生是多因素、多步骤的过程，其最主要的生物危险因素是乙型肝炎病毒（HBV）感染[2-3]。在广西肝癌高发区，我们应用流式细胞术（FCM）检测715例人员外周血淋巴细胞亚群的表达水平和NK细胞活性，同时以100例健康人作为对照，以了解高发区人群的免疫状态，对肝癌的防治提供参考依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

715例肝癌高发区人员为广西扶绥县城乡居民，男459例，女256例，28～61岁，平均45.1±8.2岁，其中有HBV感染者574例，无HBV感染者141例。100例健康对照者为同期献血人员，男61例，女39例，25～55岁，平均42.5±7.9岁。组间性别构成比和年龄，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂

流式细胞仪为Epics XL型，COULTERQ-PREP型自动溶血仪，ABC溶血素，鼠抗人单克隆抗体CD 45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD19/CD3，上述仪器与试剂均为美国Beckman coulter公司生产；血清HBsAg检测使用上海科华生物有限公司生产的试剂盒。

1.3 方法

分别于清晨空腹抽取肘静脉血5 mL，其中2.5 mL置于含乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）的抗凝管中，另外2.5 mL置于普通生化管中。从抗凝管中吸取100 μl全血分别与荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD 19/CD3 20μl混匀、同型对照IgG各20 μL混匀，避光反应（室温）30 min，溶血后1 h内上机完成检测。上机后圈出拟测定的淋巴细胞群，每次捕获取10000个细胞，双参数分析淋巴细胞表面标记，计算出CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK和CD3+CD19+细胞的百分比含量；分离出生化管中的血清，用于检测HBsAg，严格按说明书操作。

1.4 统计学分析

应用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析处理，计量资料以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肝癌高发区人员外周血淋巴细胞亚群表达水平和NK细胞活性与健康人比较

与健康人比较，高发区人员外周血CD3+/CD8+升高，CD3+/CD19+下降，差异有统计学意义（P＜0.01）；CD3+、CD3+/CD4+和NK细胞活性，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 肝癌高发区人员外周血淋巴细胞亚群表达水平和NK细胞活性与健康人比较（±s，%）

表1 肝癌高发区人员外周血淋巴细胞亚群表达水平和NK细胞活性与健康人比较（±s，%）

组别nCD3+CD3+/CD4+CD3+/CD8+NKCD3+/CD19+高发区人员71569.31±11.8935.11±10.2329.28±11.6015.70±8.303.02±2.68健康人对照10069.63±10.5335.70±7.2924.69±6.0616.97±5.2213.62±3.90 t 0.25550.55713.8821.4894.967 P 0.79840.57760.0010.13690.0000

2.2 肝癌高发区人员有无HBV感染者外周血淋巴细胞亚群的表达水平和NK细胞活性比较

在高发区人群中，有感染乙型肝炎者和无感染乙型肝炎者比较，各项指标的，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 肝癌高发区人员有无HBV感染者外周血淋巴细胞亚群的表达水平和NK细胞活性比较（x±s，%）

3 讨 论

肝癌的发生是多因素、多基因、多阶段作用的结果，至今病因尚未完全确认。有研究[2-3]表明，HBV、黄曲霉毒素B1摄入和饮用水源污染等是肝癌的主要危险因素，HBV感染人员患肝癌的危险性是阴性人员的25～37倍，肝癌高发区人群HBsAg阳性率高达17.83%，远高于全国9.09%的平均水平，差异有统计学意义（P＜0.01）。

乙型肝炎免疫应答的主要途径是以CD8淋巴细胞为主导的细胞免疫，T细胞清除实验数据表明，CD8 T细胞是与病毒清除直接有关的细胞亚群，在清除病毒过程中起到关键的作用，慢性乙型肝炎患者CD3+/CD8+T细胞百分率显著上升，与肝炎病毒的复制密切相关。本研究显示，肝癌高发区人群外周血CD3+/CD8+升高，CD3+/CD19+下降，表面机体感染HBV后，由于病毒复制，从而导致CD3+/CD8+T细胞百分率上升，而对血液中HBV的杀灭，又使得CD3+/CD19+下降。但CD3+/CD8+升高和CD3+/CD19+下降却与机体是否感染HBV无关，对非HBV感染者如何解析？是什么因素导致该地区人群外周血普遍CD3+/CD8+升高，值得我们进一步研究。

[1] 左婷婷,郑荣寿,曾红梅,等.中国肝癌发病状况与趋势分析[J].中华肿瘤杂志,2015,37(9):691-696.

[2] 高 蕊,刘中景,陈 菲,等.乙型肝炎相关性原发性肝癌相关危险因素的Logistic回归分析[J].临床肝胆病杂志,2014,30(4):370-372.

[3] 薛万江,冯 盈,李 鹏,等.肝细胞癌组织中Ras相关结构域家族1A基因甲基化与环境因素的关系[J].中华实验外科杂志,2012,29(4):650-652.