我院妇科门诊就诊女性HPV亚型分布情况

马艳云 王春霞

（甘肃省兰州市第一人民医院检验科 甘肃 兰州 730050）

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤，病因明确，持续感染高危型人乳头瘤病毒（HR -HPV）是其主要致病因素[1]，可以通过预防性HPV疫苗进行预防，但高危型HPV亚型多且分布具有明显的地域性差异[2-3]，甘肃省地处西北偏远地区，经济水平落后，卫生资源匮乏，是宫颈癌的高发地区。而目前的HPV疫苗只覆盖HPV-16和HPV-18两种高危亚型，防御能力有限。本研究旨在对甘肃地区HPV感染做出客观的评估，为甘肃地区HPV疫苗的研发和其他相关研究提供基础数据。

1.材料与方法

1.1 一般资料

样本源自2014年9月—2017年3月于我院妇科就诊的宫颈HPV感染筛查患者。

1.2 仪器和试剂

试剂盒：《人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）》（广州安必平医药科技股份有限公司），可检测28种HPV亚型，是目前分型较多的一款试剂，它可以检测出15种高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82型，3种中危型：26、53和66型，10种低危型：6、11、40、42、43、44、54、61、81、和83型；实时荧光PCR仪Rotor-Gene Q（德国QIAGEN）；核酸分子杂交水浴摇床（上海精宏）；生物安全柜Hfsafe-1200B2（上海力申）；台式冷冻高速离心机H1850R(长沙湘仪)；移液器（德国eppendorf）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 用阴道张开器暴露宫颈，棉拭子拭去宫颈口分泌物，将宫颈刷置于宫颈口，顺时针旋转5周，取得足够的移行区上皮细胞，取出宫颈刷置于放入2ml生理盐水的无菌小试管中，立即送检验科检测，不能立即检测者于-20℃保存，一周内检测。

1.3.2 PCR扩增 将样本提取DNA并行PCR扩增，扩增条件为：50℃3分钟，95℃预变性15分钟，然后按94℃40秒→55℃40秒→72℃40秒扩增40个循环，最后72℃延伸7分钟。

1.3.3 杂交染色，分析结果。

2.结果

被检患者例数1584，其中阳性367例，阳性率23.17%（367/1584）；单一感染281例，占总感染例数的76.57%，多重感染86例，占感染例数的23.43%（见表1）；单一感染中高危型198例，占70.46%(198/281)，主要以HPV-16、52和58为主，中危型16例，占5.69%(16/281)，26型未检出；低危型67例，占18.26%（67/281）(见表2、表3)；HPV-73和-83（MM7）型未检出。多重感染中以双重感染居多，占70.93%（61/86），双重感染中最多见的型别组合为16+52型，占9.83%（6/61）；86例多重感染中出现频次最多的亚型为52（25次）、16型（15次）和58（13次）。

3.讨论

甘肃地处偏远地区，经济水平落后，卫生条件差，卫生资源匮乏，宫颈癌筛查工作起步晚于发达地区，人们对HPV与宫颈癌的相关性认知程度不高，宫颈癌患病率居高不下。上世纪70年代和90年代肿瘤流行病学调查显示，甘肃省武都区等地的宫颈癌死亡率在全国处于较高水平；2010年—2013年，甘肃陇南市作为全国重大公共卫生服务项目农村妇女宫颈癌筛查项目试点，有9万名35～59岁农村妇女免费接受宫颈癌筛查，共检出宫颈癌147例，患病率为163/10万；而肃州区7402名35～59岁城镇妇女中，筛查出5例宫颈癌，患病率为67.5/10万,省内各地宫颈癌患病率有差异,城镇低于农村，但均高于全国平均水平14.9/10万。不足之处是这些大规模筛查工作采用巴氏涂片细胞学检测方法，并未行HPV检测，不能为HPV疫苗的研发提供数据支持。

HPV28种分型是目前国内市场较全面的HPV分型模式，本文旨在统计分析用该分型模式检测的我院就诊女性HPV感染情况及各亚型的分布情况，为宫颈癌的防治提供基础数据。

表1 各感染类型构成比

表2 单一感染病例不同亚型分组的构成比

表3 单一感染高危型HPV各亚型感染例数及比值

[1]zur Hausen H.Papillomaviruses and cancer: from basic study to clinical application [J].Nature Reviews Cancer.2002.

[2]Guan P,Howell-Jones R,Li N,Bruni L,de Sanjosé S,Franceschi S,Clifford GM. Human papillomavirus types in 115,789 HPV-positive women:a meta-analysis from cervical infection to cancer [J]. Int J Cancer. 2012 Nov 15；131(10):2349-59.

[3]Li N,Franceschi S, Howell-Jones R, Snijders PJ,Clifford GM. Human papillomavirus type distribution in 30,848 invasive cervical cancers worldwide:Variation by geographical region, histological type and year of publication [J].Int J Cancer. 2011 Feb 15；128(4):927-35.