口腔螺旋体镜检湿片法与革兰染色法两种方法的比较

吴坤

（黔东南民族职业技术学院医药技术系 贵州 凯里 556000）

口腔螺旋体检测，在临床上为口腔相关疾病提供有效的辅助诊断，口腔螺旋体检测湿片法受到多种因素影响，降低了检测结果的准确性，出现检查误差，口腔螺旋体检测的准确性是为临床口腔相关疾病提供辅助诊断的重要依据。本文主要对140例大学生作为检测对象通过湿片法与革兰染色法分别检测结果的差异性进行比较分析，使其更好的在临床口腔疾病检测中得到广泛应用。现将检测方法与检测结果简述如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

以140例黔东南民族职业技术学院的在校大学生牙垢样本作为研究对象，其中男40例，女100例，年龄l8～22岁 分别用湿片法与革兰染色法对标本进行口腔螺旋体检测观察，并及时、准确记录检测结果。

1.2 方法

（1）湿片法。载玻片上放一滴生理盐水用牙签挑取牙缝中的牙垢制成悬液，置(10×40)倍镜下观察口腔螺旋体。

（2）革兰染色法。待标本湿片法观察完毕后，让湿片上的牙垢悬液自然干燥，通过酒精灯外焰3次进行固定，常规进行革兰氏染色。染色完毕后，用吸水纸吸于载玻片上的水分，置(10×100)油镜下观察计数每一视野中的口腔螺旋体数目，观察10个视野，计算均值。

1.3 判断标准

阴性(-）：未检出口腔螺旋体（仔细观察300个视野未发现口腔螺旋体）；阳性(+)：检出口腔螺旋体

1.4 统计学方法采用SPSS 16.0统计学软件进行处理，湿片法与革兰染色法镜检口腔螺旋体体结果差异比较采用配对χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

采用湿片法镜检口腔螺旋体阳性率为20%；而采用革兰染色法镜检口腔螺旋体阳性率为52%，两组数据差异有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 两种检测法口腔螺旋体检出水平对比

3.讨论

口腔螺旋体种类较多，其中包括大齿密螺旋体、齿密螺旋体、口腔密螺旋体、奋森氏密螺旋体等[1]，其中奋森疏螺旋体是口腔常居菌丛之一，革兰染色阴性，菌体细长呈螺旋状，螺旋规则或不规则，奋森氏螺旋体栖居于口腔龈下菌斑中，过去认为无致病性，近年来发现成年人牙周病患者的龈下菌斑标本中，螺旋体为优势菌群，从而推测其具有致病性[2]。对口腔螺旋体的准确检测对于辅助诊断口腔类疾病有重要意义。

本次检测结果中，采用湿片法镜检口腔螺旋体阳性率为20%；而采用革兰染色法镜检口腔螺旋体阳性率为52%，两组数据差异明显，湿片法镜检操作简便省时，但易造成误检、漏检，湿片法放大的倍数相对较小，只适合在高倍镜下观察，容易和牙垢中的食物纤维、细长物体等相混淆，以致误判，牙垢食物残渣所含成分多，各种成份相互挤压重叠，可能遮挡运动中的口腔螺旋体，加之背景不清晰，都可能造成漏检，其次口腔螺旋体本身具有运动活泼的特性，在高倍镜视野下，运动速度极快，有时候来不及识别，导致漏检，在次光学显微本身也具有缺陷，对湿片中微生物运动的观察效果欠佳，暗视野显微镜效果好。综上多层因素，导致湿片法检测口腔螺旋体的阳性率大大降低，不能满足临床辅助诊断口腔类疾病的需要，革兰染色法镜检虽然比湿片法增加了干燥、固定、染色的程序但其准确度高，易辨认。口腔螺旋体被染成革兰阴性，与口腔牙垢中的其它残渣成份界线清晰，油镜放大倍数髙，不会和牙垢中的其它成分相混淆，易于辨认，而且染色后的标本，涂片中的口腔螺旋体不在具有运动性，镜检相对固定，避免了湿片检测法观察的随机性，只要仔细观察涂片，不会出现误检、漏检，即使是初学者也易于掌握，而且成本低廉、简便、准确。更适用于广大基层卫生实验室的开展。为临床诊断口腔类疾病及亚健康口腔判断提供有力的辅助依据。

本次的140例口腔牙垢样本检测中，革兰染色法检出口腔螺旋体阳性的标本共73例，其中有36例学生反映经常或偶伴有牙龈出血，单纯的牙龈肿痛、蛀牙标本，口腔螺旋体为阴性，但是牙龈肿痛、蛀牙伴牙龈出血的标本，口腔螺旋体为阳性，这可能与口腔螺旋体机械性穿入破坏致病有一定的关系，从本次实验来看，口腔螺旋体每个油镜视野检出数量较少者，牙龈出血的概率较少，口腔螺旋体每个油镜视野检出数量较多时，牙龈出血的概率较高，所以口腔螺旋体的致病性与其存在数量具有相关性，如果把口腔螺旋体每个油镜视野的检出分等级的数量化，这样就与牙龈出血等口腔疾病具有明显的相关性。鉴于本次口腔螺旋体检测的标本量有限，口腔螺旋体的量化与牙龈出血还有待扩大样本进一步证实。

综上所述，建议临床口腔螺旋体的检测普遍用革兰染色法镜检，可以更大程度上提高检出阳性率，如果把口腔螺旋体每个油镜视野的检出分等级的数量化，就与牙龈出血等口腔疾病具有明显的相关性，可为临床口腔相关疾病提供有效的辅助诊断。为口腔相关疾病的诊断与治疗提供更多有力依据。

[1]张炳新，杨霖，樊明文，等。螺旋体在口腔疾病中的地位和作用。《国外医学：口腔医学分册》1989年第1期13-16，共4页.

[2]倪语星，尚红.临床微生物学与检验（第5版）.北京：人民卫生出版社，2014年11月：第247页.