新城疫抗体血凝抑制试验比对结果分析

2018-01-15刘华陈曦朱良强占松鹤何长生

现代农业科技 2018年22期

关键词：检验

刘华陈曦朱良强占松鹤何长生

摘要为掌握某獸医实验室新城疫抗体血凝抑制（HI）试验能力，用新城疫标准阳性血清和阴性血清制备52份盲样，由6名检测技术员同时进行HI抗体检测。将检测结果与参考值进行比较，计算阳性、阴性一致性以及符合率，并用Win Episcope 2.0软件进行Kappa一致性检验，计算二者差值并进行统计描述。结果表明，312个检测值阳性率为13.5%，低于参考值15.4%的阳性率（p<0.01）；二者阳性结果的一致性为68.8 %（33/48），阴性结果一致性为96.6%（255/264），符合率为92.3%（288/312），Kappa值为0.69（95%置信区间0.58～0.80）；检测值与参考值差值在2个滴度范围内浮动（95%置信区间-2.2～1.8），完全符合的占70.5%（220/312）。由此可知，该兽医实验室新城疫抗体HI试验定性结果与参考值一致性强度为高度，但在定量结果方面仍有进一步提升的空间。

关键词新城疫抗体；血凝抑制试验；比对试验；Kappa 检验

中图分类号 S852.4+3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）22-0230-02

Abstract A comparison of HI method for detection of Newcastle Disease（ND）antibody was conducted to estimate the test capability of HI method at a veterinary laboratory.The standard NDV antibody positive serum which was diluted into different titers，together with the standard NDV-antibody-negative ones were prepared totally 52 for the 6 technicians who did the HI test at the same time.The HI titers of the 52 samples were observed by the staffs and were compared with the reference values.The positive and negative coincidence，the coincidence rate were calculated separately and Kappa-test was conducted by using Win Episcope 2.0 software. Meanwhile，difference between the tested and the reference values was described by statistics method.The results showed that positive rate was 13.5%，which showed a statistic difference with the reference 15.4%（p<0.01）.The positive consistency rate was 68.8%（33/84），the negative consistency rate was 96.6%（255/264）and the coincidence rate was 92.3%（288/312）.The Kappa value was 0.69（95% CI= 0.58-0.80）.The difference between the observed and the reference values was existed，and the different values were at the range of -2.2 to 1.8（95% CI），in which the rate of fully agreement of these two values was 70.5%（220/312）.The results indicated that，for the qualitative test of NDV HI antibody there was a high agreement between the observed results and the reference values at this veterinary laboratory，but the quantitative test showd be further improved.

Key words Newcastle Disease antibody；hemagglutination inhibition test；comparison test；Kappa-test

为适应当时畜牧业生产发展的需要，某兽医实验室成立于1918年。近些年，受财政预算减少等因素影响，政府采取兽医实验室商业化、私有化等措施，如为养殖户和利益相关方提供有偿兽医实验室检测服务，以解决当前的问题。但兽医实验室也面临着科研人才流失、仪器设备老化和日益复杂的动物疫病流行形势等诸多挑战。为掌握该兽医实验室血凝抑制试验（HI）的检测能力，由6名具备检测资质的技术人员同时进行HI抗体检测，笔者对试验结果进行了比对分析。

1 材料与方法

1.1 试验材料

新城疫标准阳性血清（批号：2/12），新城疫标准阴性血清（批号：06/15A），新城疫标准检测抗原（批号：08092015），均由意大利IZSAM实验室提供。

1.2 试验方法

将鸡新城疫标准阴性、阳性血清分别进行倍比稀释后分装，共制成52份盲样，其中8份为阳性，即HI效价≥1∶16，结果（即参考值）记为Nlog2。6名检测技术员参照《OIE陆生动物诊断试验与疫苗手册—2012》第2.3.14章，对这52份盲样进行鸡新城疫病毒HI抗体检测，检测结果记为nlog2。

1.3 统计方法

检测值（n）和参考值（N）均按≥4为阳性，反之为阴性进行定性判断。应用Epi Info 7对结果进行2×2表格统计（图1），计算阳性一致性（）、阴性一致性（），用Win Episcope 2.0计算符合率（Observed proportion of agreement）（），再用Win Episcope 2.0软件进行试验一致性（Agreement）分析，计算Kappa值，以比较HI定性试验的符合情况。参照经典文献进行一致性强度判断，即Kappa值 <0，极差；0～0.20，微弱；0.21～0.40，弱；0.41～0.60，中度；0.61～0.80，高度；0.81～1.00，极强[1]。

用SPSS 20和Excel软件对检测值和参考值的差值进行统计描述和频数分析，统计差值的极大值、极小值、均值、标准差、方差、频数和直方图，分析定量结果的总体分布情况。

2 结果与分析

2.1 定性结果一致性

将6名检测技术员的312个检测值与参考值的定性结果全部进行相关统计，结果检测陽性42份，阳性率13.5%，低于参考值15.4%的阳性率（χ2=148.85，P<0.01）。二者阳性结果的一致性为68.8%（33/48），阴性结果一致性为96.6%（255/264），符合率为92.3%（288/312）。经Kappa一致性检验，Kappa值为0.69（95%置信区间0.58～0.80），表明该实验室的新城疫抗体HI试验定性结果与参考值的一致性强度为高度一致。

2.2 定量结果统计描述

将312个检测值与参考值进行比较，计算两者差值。将这些差值用SPSS 20进行统计描述，结果极大值为4，极小值为-7，均值为-0.23（表1）。

再将这些差值用SPSS 20进行频数和直方图统计。312个检测值中，完全与参考值一致的有220个（即差值为0），约占样本总数的70.5%；差值在-1～1之间的占87%，其中比参考值小的有67个，比参考值大的有25个（表2）。

由表2和图2可知，二者差值呈中间高、两边低、左右基本对称的分布，差值在2个标准差范围内（-2～2），大约包括95.5%的观察值；差值在3个标准差范围内（-3～3），大约包括99.0%的观察值；2个极端组各占0.32%。因此，本组数据近似满足正态分布条件。用X±1.96 S（X为样本均数，S为标准差）[2]计算95%置信区间为-2.20～1.75，即近似正、负偏差2个滴度。

综上，定量结果统计结果表明，该兽医实验室新城疫的HI实验结果与参考值95%在2个滴度范围内浮动，其中完全一致的占样品总数的70.5%。

3 结论与讨论

（1）在实际工作中，往往以NDV HI抗体效价≥4log2为阳性，反之为阴性来诊断或判断免疫抗体是否合格。定量试验通常允许检测结果与参考值上下偏差1个滴度，如果抗体效价为4 log2时，则可能出现假阴性；为3 log2时，则可能出现假阳性。因此，在进行定量结果评价的同时还要进行定性结果的评价。符合率是直接的方法，但当样本量较小时，包括了相当部分的机遇可能；而卡方检验只能分辨差异有无统计学意义，不能反映是否一致[3]。Kappa统计量是在校正机遇可能后衡量定性结果一致性的方法[4]，可以用于有序和无序变量资料的一致性检验，近年来在医学检验、流行病学及临床资料可靠性考察等方面的应用较为广泛[3-5]，在兽医实验室检测中也逐渐开始应用[6-10]。Kappa值越大，表明2种结果可靠程度越高[5]。本次比对试验中，观察值与参考值之间的定性结果一致性强度为中度～极高，总体达到高度一致。

（2）参考值是与一个可溯源到一个国家或国际标准的标准物质或标准并进行分析、测量或比对检测物品所确定的值。观察值是若干参加者提交的测量值。两者之间的差值是对定量结果能力验证数据中常用的统计技术，在国际标准ISO 5725—4 中被称为“实验室偏移的估计值”[11]。二者差值的统计描述可以直观反映出实验室或操作者定量结果与参考值之间的差异以及数据分布情况。如果符合正态分布条件，则可进一步估算实验室或操作者的观察值与参考值的偏差范围。从本次试验比对的结果来看，该实验室新城疫HI抗体检测结果与参考值间差值呈近似正态分布，95%的差值在-2～2范围内，即检测值与参考值上下相差1或2个滴度或完全吻合。我国规定在进行HI定量检测比对试验时，观察值与参考值上下相差1个滴度或完全吻合则判为正确[12]，该兽医实验室HI试验有进一步提升的空间。

4 参考文献

[1] LANDIS J R，KOCH G G.The measurement of observer agreement for categorical data[J].Biometrics，1977，33：159-174.

[2] 宇传华.Excel统计分析与电脑实验（配光盘）[M].北京：电子工业出版社，2009，137-163.

[3] 夏邦世，吴金华.Kappa一致性检验在检验医学研究中的应用[J].中华检验医学杂志，2006，29（1）：83-84.

[4] 张波.Kappa一致性检验中流行病学中的应用举例[J].宁夏医学院学报，1995，17：（4）：336-337.

[5] 宋斌斌，赵瀛，张春燕，等.两种抗中性粒细胞胞浆抗体检测方法的结果比较[J].检验医学，2011，26（7）：457-460.

[6] 吴雪军，周彩琴，赵灵燕，等.检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒抗体的两种ELISA方法的比较及其应用[J].中国兽医杂志，2012，48（4）：27.

[7] 刘华，占松鹤，何长生，等.应用Kappa检验比较猪蓝耳病ELISA抗体检测试剂盒[J].中国动物检疫，2014，31（11）：95-96.

[8] 刘华，钱昌银，占松鹤，等.应用Kappa法检验IHA和ELISA在检测猪瘟抗体中的一致性[J].中国动物检疫，2015，32（2）：69-71.

[9] 杨涛，李谓娟.Kappa检验比较2种猪伪狂犬病gE抗体ELISA检测试剂盒[J].福建畜牧兽医，2015，37（6）：11-13.

[10] 钱昌银，程帮照，季晶晶，等.以鸡鸭红细胞作血凝抑制指示剂检测鸭高致病性禽流感抗体的比较[J].中国动物检疫，2015，34（4）：60-62.

[11] 王丽玲.能力验证、实验室间比对常用统计技术及评定方法[J].中国卫生检验杂志，2006，16（8）：985-986.