循环肿瘤细胞动态变化监测在转移性乳腺癌患者诊疗中的应用

陈海涛 陈 平 徐林成

(盐城市第一人民医院，江苏 盐城 224005)

循环肿瘤细胞动态变化监测在转移性乳腺癌患者诊疗中的应用

陈海涛 陈 平 徐林成

(盐城市第一人民医院，江苏 盐城 224005)

目的 探究循环肿瘤细胞动态变化监测在转移性乳腺癌患者诊疗中的应用价值。方法 选择2016 年1月至2017年1月我院收治的转移性女性乳腺癌患者 325 例(年龄37～66岁)，给予表阿霉素(90 mg/m2)联合多西紫杉醇(75 mg /m2) 静脉化疗(既往均未接受此方案)，3 周为 1 周期，共 2 个周期。同时，在化疗前，化疗每个周期后进行循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)个数统计，同时期以健康女性志愿者200例为空白对照。结果 以健康组为空白对照，对乳腺癌转移组化疗前、周期1后、周期2后进行静脉采血检测，统计分析发现，癌症组与健康组血液循环中CTCs个数存在显著性差异(P<0.05)，且化疗前后CTCs个数同样存在显著性差异(P<0.05)；分别对化疗患者在化疗后进行随访，在1个月、3个月、6个月进行CTCs细胞个数检测，6个月时对是否发生转移恶化进行组织验证，统计分析结果表明，发生组织转移的CTCs细胞数达到(3.89±1.08)个/10 ml,与未发生转移者(2.74±1.07)个/10 ml具有显著性差异(P<0.05)。结论 循环肿瘤细胞动态变化监测对于转移性乳腺癌是否发生转移以及化疗之后效果的验证具有显著地临床意义，值得推广使用。

循环肿瘤细胞；转移性乳腺癌；指标检测

世界范围内，乳腺癌是导致妇女死亡的主要原因之一[1]，其中远处转移的发生是导致乳腺癌患者死亡的最主要原因。当前，肿瘤检测手段主要依赖于影像学和血清标志物。基于肿瘤细胞播散理论，检测循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs) 有可能早期发现肿瘤转移和复发情况[2]。然而，外周血循环中的转移性肿瘤细胞是否可以成为治疗效果和患者癌症发病情况的预估指标还不是十分清楚。本研究主要探究循环肿瘤细胞动态变化监测在转移性乳腺癌患者诊疗中的应用价值。

1 资料和方法

1.1一般资料

选择 2016 年1月至2017年1月我院收治的转移性女性乳腺癌患者 325 例(年龄37～66岁) 。纳入标准:(1)所有患者签署自愿捐献血液样本和接受化疗的知情同意书; (2) 所有患者既往均有明确的病理组织学诊断，现具有充分的临床或影像学证据确诊为转移性乳腺癌，且转移病灶可测量或可评估;(3)具有良好的沟通能力和理解力;(4) ECOG 评分为 0～2，预计生存期≥3 个月;(5) 无第二肿瘤;(6) 多程治疗的患者距末次治疗(包括口服化疗、静脉化疗、放疗、免疫治疗等) ≥1 个月。排除标准:(1)有明确的感染病灶;(2)明显的认知障碍。本研究经医院伦理委员会批准同意实施。另选取同期200例健康女性志愿者作为对照。

1.2方法

1.2.1血样处理 采集 325例转移性乳腺癌患者化疗前和200例健康志愿者的外周血10 ml， 4 h 内处理样品。将血样与 10 倍体积的溶血素混合，冰上孵育 15 min，450 r/min离心5 min，弃上清，PBS 洗涤 2 次，制成细胞悬液。

1.2.2CTCs 检测系统 CTCs 检测和表征技术进步包括: (1)基于图像方法，经典的免疫细胞化学(ICC) ，美国食品和药物管理局(FDA) 批准的 Cell Search系统(Veridex) ，Ariol系统，镭射扫描细胞计数。

1.2.3治疗方案及疗效评价 给予表阿霉素(90 mg/m2) 联合多西紫杉醇(75 mg/m2) 静脉化疗(既往均未接受此方案) ，3 周为 1 周期，共 2 个周期。用药前后给予地塞米松和昂丹司琼预防不良反应。根据实体瘤疗效评价标准 RECIST1.1 版进行疗效评价[3]，分为CR、PR、SD和PD。以CR+PR计算有效率(RR) 。

1.3统计学方法

2 结 果

2.1一般资料比较

健康对照组与乳腺癌转移组一般资料比较差异无统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 一般资料比较

2.2化疗前后血液循环中CTCs个数比较

以健康组为空白对照，对乳腺癌转移组化疗前、周期1后、周期2后进行静脉采血检测，统计分析发现，癌症组与健康组血液循环中CTCs个数存在显著性差异(P<0.05)，且化疗前后CTCs个数同样存在显著性差异(P<0.05)，见表2。

表2 化疗前后血液循环中CTCs个数比较(/10ml)

注：*是指与健康组相比，P<0.05；#是指与化疗前相比，P<0.05。

2.3CTCs细胞数与预后发生癌细胞转移比较

分别对化疗患者在化疗后进行随访，在1个月、3个月、6个月进行CTCs细胞个数检测，6个月时对是否发生转移恶化进行组织验证，统计分析结果表明，发生组织转移的CTCs细胞数与未发生恶化者具有显著性差异(P<0.05)，见表3。

表3 CTCs细胞数与预后发生癌细胞转移比较(/10 ml)

注：*是指与未恶化组相比，P<0.05。

3 讨 论

乳腺癌占全球女性侵袭性癌症的 22.9%。中国女性乳腺癌发病年龄较西方女性偏小，并且发病时处于绝经前的比例较高(60%～70%)。绝经前罹患乳腺癌的患者因年轻及卵巢功能活跃等因素，往往较绝经后罹患乳腺癌的患者更易出现复发和转移，预后也较差[4]。从理论上讲，转移性乳腺癌是不可治愈性疾病，治疗目的是尽可能延长患者的生存期及提高患者的生活质量。因此，转移性乳腺癌研究的一个重要目标就是找到可以方便准确预测复发和转移的生物标记物以提示治疗效果和患者实时病情[5]。 随着对转移性乳腺癌的深入研究， 对于手术后切除预后预测，疗效评估及复发监测，体液检测在转移性乳腺癌中逐渐进入更为广泛的研究。其主要指血液中包含的两种可以用于分析肿瘤分子表型的物质， 即循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)和循环肿瘤DNA(circulating tumor， ctDNA)[6-7]。循环肿瘤细胞是指能在肿瘤患者外周血中检测到、来源于实体肿瘤、逃离宿主免疫杀伤后存活的异质性肿瘤细胞。进入血液循环而未被清除的肿瘤细胞通过迁移、黏附、相互聚集形成微小癌栓，并在一定条件下发展为转移灶。CTCs以单个细胞或细胞团(又称循环肿瘤微栓子，CTM)存在于循环系统中[8]。研究发现 CTCs 的形成与上皮细胞—间充质转化机制有关。 血液中的 CTCs既可能是直接从病灶脱落进入血液中的上皮特征 CTCs，也可能是经历 EMT 由原发灶或转移灶脱落进入并生存于血液循环中的 CTCs。最新研究发现， CTM与间质细胞表型 CTCs密切相关，并且高比例的间质细胞表型CTCs与化学治疗耐药有关[9]。

CTCs可以预测患者预后。一项国外研究发现[12]，当 CTCs>3个/10 ml，则转移性乳腺癌的5年生存率较低，治疗效果也较差； 但如果治疗后 CTCs水平可下降(<3 个/10 ml)，则预后较好。该研究表明， CTCs数量的多少与转移性乳腺癌远处转移以及预后关系密切，可用于判断转移性乳腺癌患者预后。同时Cohen 等人发现，CTCs≥2 个是转移性乳腺癌患者的不良预后因素(HR： 2.78，95% CI：1.10～7.02)， 并且与围手术期死亡率相关。乳腺癌转移患者 CTCs平均数目普遍多于无转移的患者， 而且可切除的乳腺癌转移患者CTCs 阳性率远低于不可切除患者。结合本次试验结果显示，CTCs计数不仅在晚期肿瘤患者的预后评估方面具有意义， 其治疗前后的数目变化， 也可在一定程度上反映疗效， 可能在疗效监测方面具有意义。治疗前 CTCs超出 5 个/7.5 ml的转移性乳腺癌患者， 约一半患者的 CTCs数目可在治疗中降低。若CTCs数目无变化或增高， 则提示治疗无效。

[1] 彭德刚. 转移性乳腺癌的化疗进展[J]. 中国社区医师:医学专业,2013,10(4):104-105.

[2] Shiomi-Mouri Y, Kousaka J, Ando T, et al.. Clinical significance of circulating tumor cells (CTCs) with respect to optimal cut-off value and tumor markers in advanced/metastatic breast cancer [J]. P Breast Cancer, 2016 ,23(1):120-127.

[3] 笪洁,杜瀛瀛,卜丽佳,等. 替吉奥单药三线治疗转移性乳腺癌的临床研究[J]. 中华疾病控制杂志,2015,19(7):751-753.

[4] 王玲,董桂芝,杜朝晖,等. 药物性卵巢去势在绝经前转移性乳腺癌患者中的应用[J]. 实用药物与临床,2015,18(1):9-12.

[5] Bulfoni M, Turetta M, Del Ben F, et al. Dissecting the Heterogeneity of Circulating Tumor Cells in Metastatic Breast Cancer: Going Far Beyond the Needle in the Haystack. [J] Int J Mol Sci, 2016,17(10): pii: E1775.

[6] Uěiaková Z, Mikulová V, Pintérová D, et al. Circulating tumor cells in patients with breast cancer: monitoring chemotherapy success[J]. In Vivo, 2014 ,28(4):605-614.

[7] 杜兴,阿迪力江·买买提明,地力木拉提·艾斯木吐拉. 外周血循环肿瘤细胞对非转移性乳腺癌预后预测价值的Meta分析[J]. 中国循证医学杂志,2014,14(6):721-728.

[8] 徐慧,贾文霄. 转移性乳腺癌转移方式与ER及PR表达状态关系的研究[J]. 临床放射学杂志,2010,29(1):47-50.

[9] 杨亮,李涌涛,艾斯卡,等. 多西他赛联合希罗达治疗蒽环类失败复发转移性乳腺癌的疗效评价[J]. 中国癌症杂志,2010,20(5):390-392.

[10] Madic J, Kiialainen A, Bidard FC, et al. Circulating tumor DNA and circulating tumor cells in metastatic triple negative breast cancer patients [J]. Int J Cancer, 2015,136(9):2158-2165.

Application of circulating tumor cell dynamic change monitoring in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer in China

CHEN Hai-tao CHEN Ping XU Lin-cheng

(First People's Hospital of Yancheng, Yancheng 224005, China)

Objective: To explore the application value of circulating tumor cell dynamic monitoring in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer. Methods: 325 patients (aged 37～66 years) with metastatic female breast cancer admitted in our hospital from January 2016 to January 2017, were treated with epirubicin (90mg/m2) combined with docetaxel (75mg/m2) intravenous chemotherapy (previously not accepted this program), 3 weeks for 1 cycle, a total of 2 cycles. At the same time, before chemotherapy, the number of CTCs was counted after each cycle of chemotherapy, and 200 healthy volunteers were used as controls. Results: The results showed that there were significant differences in the number of CTCs between the cancer group and the healthy group (P<0.05) . There was significant difference between the two groups (P>0.05) . There was significant difference between the cancer group and the healthy group (P<0.05). The patients were followed up after chemotherapy. The number of CTCs was detected at 1 month, 3 months and 6 months respectively. The number of CTCs was significantly different between the two groups (P<0.05). The results showed that the number of CTCs in the tissue metastasis was (3.89±1.08)cells/10ml, which was significantly different from that in the untreated group [(2.74±1.07) cells/10ml] (P<0.05). Conclusion: The results show that the monitoring of circulating tumor cell dynamics is of great clinical significance in the detection of metastatic breast cancer and the effect of chemotherapy after chemotherapy, which is worthy of popularization.

circulating tumor cells; metastatic breast cancer; index detection

陈海涛(1982—)，男，江苏盐城人，本科，主治医师，主要从事病理诊断工作。

R446.1

A

1004-7115(2018)01-0018-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.005

2017-10-20)