沙咪珠利预防鸡球虫病的药效试验研究

佘如凤 ， 费陈忠 ， 赵其平 ， 薛飞群 ， 张丽芳 ， 张可煜 ，王 米 ， 王霄旸 ， 王春梅 ， 刘迎春 ， 郑文丽

(中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 , 上海 闵行 200241)

鸡球虫病是一种危害严重的全球性寄生虫病，具有分布广、发病率高、死亡率高等特点，是制约养鸡业发展的主要传染病之一，鸡球虫的感染多为2种以上艾美耳球虫的混合感染，引起临床的稀便、血便、体重下降、饲料利用率降低甚至死亡，对养鸡业造成巨大的经济损失[1-3]。鸡球虫病的防控，目前最有效的措施是化学药物防治法[3]，但临床使用时常会受到球虫的耐药性困扰。因此，新型抗球虫药物的研发具有重要意义。沙咪珠利是中国农业科学院上海兽医研究所前期对三嗪类抗球虫药物系统研究的基础上开发的全新结构三嗪化合物，临床前研究显示其具有良好的成药性基础，为了解沙咪珠利在临床的合理使用剂量和抗鸡球虫的有效性，进行了本试验。

1 材料与方法

1.1 试验动物与饲料 1日龄浦东黄小公鸡,购自上海汇中种鸡场，接雏前对饲养笼具和环境严格消毒，在无球虫的健康动物房饲养至14日龄，全价饲料委托上海祥兴有限公司加工，不添加任何药物。

1.2 试验药品和虫株 地克珠利，批号：2012001，含量>98%，中国农业科学院上海兽医研究所动物药学研究室合成。沙咪珠利，批号：2012005，含量>99%(归一化法)，中国农业科学院上海兽医研究所动物药学研究室合成。

鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)卵囊，巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)卵囊、堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina) 卵囊和毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)卵囊，中国农业科学院上海兽医研究所寄生虫病研究室提供。

1.3 试验分组

1.3.1 沙咪珠利预防鸡球虫病的剂量效应试验 将14日龄健康鸡，移入试验动物房，逐只称重标记，选用体重范围接近的健康鸡，随机分组，每笼10羽。沙咪珠利预防鸡球虫病的添加剂量分别设为5、7、9、10、11、13 mg/kg和15 mg/kg饲料，另设药物对照组地克珠利1 mg/kg饲料，感染对照组以及健康对照组，每组设3笼，分别为3个组内的重复。

1.3.2 沙咪珠利预防鸡球虫病常见病原的敏感性试验 将14日龄健康鸡，移入试验动物房，逐只称重标记，选用体重范围接近的健康鸡，随机分组，每笼10羽，沙咪珠利在饲料中添加剂量设定为10 mg/kg，试验选用鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)、巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)、堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina) 和毒害艾美耳球虫(E.necatrix)4个主要致病株，每个虫株3笼，分别为3个组内的重复，同时设置感染对照组和健康对照组，每组同样设3笼为组内重复。

1.4 给药方法和球虫感染

1.4.1 沙咪珠利预防鸡球虫病的量效关系试验 分组完成后，饲料药物添加组和药物对照组即开始饲喂添加指定药物的饲料，感染对照组、健康对照组照常饲喂不含药物的饲料，各组自由饮水。15日龄，除健康对照组外，各组人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，感染量为每只1 mL，8万孢子化卵囊。

1.4.2 沙咪珠利对鸡球虫病常见4种病原的有效性和敏感性(抗虫谱)试验 分组完成后，饲料药物添加组即开始饲喂添加指定药物的饲料，感染对照组、健康对照组照常饲喂不含药物的饲料。15日龄，除健康对照组外，各组人工感染指定的鸡艾美耳球虫孢子化卵囊，感染量分别为每只鸡1 mL，分别为柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊8×104个，巨型艾美耳球虫孢子化卵囊10×104个，堆型艾美耳球虫孢子化卵囊15×104个，毒害艾美耳球虫卵囊10×104个。

1.5 临床观察 试验期间，每日观察试验鸡的发病情况，记录血便和死亡数等。人工感染后第7天，收集每笼鸡的粪便进行克粪便卵囊计数；感染后第8天，每只鸡分别称重、剖杀，观察记录试验鸡的增重及盲肠病变情况。

1.6 药效评价

1.6.1 存活率 试验结束时存活鸡只数占试验鸡只数的百分比(非球虫死亡除外)。

1.6.3 粪便记分 按Morehouse和Baron的标准[4]。计算血便最严重的一天内各笼鸡的平均血便堆数。

1.6.4 肠道病变 按Johnson和Reid 0-4分标准对盲肠病变记分[5]。各肠道正常为0分；肠道黏膜稍有增厚为1分；肠道黏膜增厚，有明显的出血点或血样内容物为2分；肠道黏膜增厚，有出血或明显的血样肠芯为3分；试验鸡死亡，盲肠呈酱油色、明显肿大，肠内容物血样为4分。 病变值 = 各笼平均病变记分 × 10。

1.6.5 粪便卵囊 取各笼粪便充分混匀、称重，用改良麦氏法计数每克粪便的卵囊数(OPG)[6]。

相对卵囊产量 = 健康组或试验组卵囊数 / 感染不给药组卵囊数 × 100%。

按角田清的换算方法换算成卵囊值，相对卵囊产量小于1%，计卵囊值为0分，大于等于1%小于25%，计卵囊值为5分，大于等于25%小于50%，计卵囊值为10分，大于等于50%小于75%，计卵囊值为20分，大于等于75%，计卵囊值为40分。

1.6.6 抗球虫指数(ACI) ACI = (相对增重率+存活率) - (病变值+卵囊值)。

判断标准 ACI在120以下为无效、在120～160为低效、在160～180为中效、在180以上为高效[7]。

2 结果

2.1 沙咪珠利预防鸡球虫病的量效关系 沙咪珠利预防鸡球虫病不同剂量的有效性试验结果见表1，从表中结果可见，感染对照组、沙咪珠利添加剂量5 mg/kg饲料和 7 mg/kg饲料组有球虫病导致的鸡只死亡，其他各试验组未见有球虫病的死亡。感染对照组和健康对照组之间的增重差异有统计学意义(P<0.05)，沙咪珠利预防试验组、地克珠利药物对照组和健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。沙咪珠利预防组的盲肠病变计分明显低于感染对照组(P<0.05)，其中添加剂量大于9 mg/kg饲料组的盲肠病变计分与健康对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。沙咪珠利不同剂量处理组的卵囊产量均明显低于感染对照组(P<0.05)，说明其可以明显抑制球虫的繁殖，有效减少球虫卵囊的排出。饲料中沙咪珠利添加剂量5、7、9、10、11、13 mg/kg和15 mg/kg的平均抗球虫指数分别为163、179、189、192、181、189和181，显示良好的抗鸡球虫活性，添加剂量大于9 mg/kg的各组全部达到了高效抗球虫药物的水平，各组内重复之间的变异系数均小于15%，可以较好的反映新化合物沙咪珠利的抗球虫活性。

2.2 沙咪珠利对鸡球虫病常见4种病原的有效性和敏感性 表2、表3、表4和表5分别为沙咪珠利对鸡球虫病常见4种病原的敏感性试验结果，柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫的感染对照组出现鸡只死亡，其他各试验组均未有球虫病导致的死亡。柔嫩艾美耳球虫的感染对照组见有大量的血便，毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫的感染对照组见有明显的稀便，药物预防组未见有明显的血便和稀便。药物预防组与健康对照组的盲肠病变计分无明显差异(P>0.05)，但与感染对照组的差异有统计学意义(P<0.05)，说明沙咪珠利10 mg/kg饲料混饲给药，能够有效保护4种常见球虫感染造成的肠道黏膜损伤。药物预防组的卵囊产量相比感染对照组有明显的下降(P<0.05)，说明沙咪珠利10 mg/kg饲料混饲给药，能够有效抑制球虫在鸡体内生长和繁殖。沙咪珠利对预防鸡柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫引起的球虫病的平均抗球虫指数均值分别为197、188、194和190，均达高效抗球虫药物的水平。

表1 沙咪珠利预防鸡球虫病的剂量有效性试验结果

注：同列数据后标不同小写字母者表示差异显著(P<0.05)，下表同

表2 沙咪珠利抗鸡柔嫩艾美耳球虫的试验研究结果

表3 沙咪珠利抗鸡毒害艾美耳球虫的试验研究结果

表4 沙咪珠利抗鸡堆型艾美耳球虫的试验研究结果

表5 沙咪珠利抗鸡巨型艾美耳球虫的试验研究结果

3 讨论

鸡球虫病是由一种或多种球虫引起的急性流行性寄生虫病，病原为原虫中的艾美耳科艾美耳属的球虫，公认的有7个虫种，其中柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)、毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)、堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina)以及巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)的流行较广且致病力较强，是导致临床球虫病发生的主要原因[8]，临床主要依赖于抗球虫药物的防治。抗球虫药物的有效性评价方法较多，但国内外的临床试验指南均是采用人工感染的动物试验模型，因此，本试验参照抗球虫药物临床有效性试验指南的一般要求，在沙咪珠利预防鸡球虫病不同剂量的有效性试验中，选用了人工感染柔嫩艾美耳球虫模型。在沙咪珠利预防鸡球虫病的临床有效性和敏感性方面，选用了柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫以及巨型艾美耳球虫，可以较好的了解新化合物的抗球虫特性，有效地评价药物的临床有效性和适用性，对指导临床合理用药具有现实意义。

沙咪珠利是全新结构三嗪化合物，本试验的结果表明，沙咪珠利9 mg/kg饲料以上混饲给药，可以达到高效抗球虫药物的标准，考虑临床使用的安全性、经济性和有效性，沙咪珠利10 mg/kg饲料作为暂定的推荐剂量混饲预防鸡球虫病，是相对合理的，但具体还有待进一步的试验确认和临床试验数据的积累。从沙咪珠利对4种常见鸡球虫的敏感性试验结果可见，沙咪珠利具有预防这些常见致病虫株引发的球虫病的疗效，对预防鸡柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫病的平均抗球虫指数分别为197、188、194和190，均达到高效水平，但本试验过程对毒害艾美耳球虫的感染毒力控制有一定瑕疵，致病性未达到FDA等抗球虫药物临床药效试验的毒力要求，客观上对抗球虫指数的结果有一定影响，但是从病变值和卵囊产量的变化可以明显看出药物的疗效，说明新化合物对4种鸡球虫病的主要病原具有很好的敏感性。文献报道地克珠利、妥曲珠利具有广谱抗鸡球虫功效[9-11]，本试验结果证实了沙咪珠利同样具有广谱的抗鸡球虫活性，说明三嗪类药物的抗虫谱范围比较一致，符合普遍的药效规律。

抗球虫药物的临床应用场景广泛，药效结果受外界影响因素较多，因此，尚需重点针对推荐剂量的合理性有效性进行更大规模的临床试验，总体而言，沙咪珠利具有广谱抗鸡球虫的功效，但对其他低致病性的虫株以及临床常见的各种耐药虫株，特别是同类药物的耐药虫株是否同样有效敏感等，有待进一步的试验研究，沙咪珠利具有良好的开发应用前景。

[1] Tewari A K, Maharana B R. Control of poultry coccidiosis: changing trends[J]. J Parasit Dis, 2011,35(1):10-17.

[2] Godwin R M, Morgan J A. A molecular survey of Eimeria in chickens across Australia[J]. Vet Parasitol, 2015,214(1-2):16-21.

[3] Solomon S: STUDY ON PREVALENCE OF POULTRY COCCIDIOSIS IN AND AROUND AMBO, WEST SHEWA ZONE, OROMIA REGIONAL STATE, ETHIOPIA MSc Thesis By SOLOMON SHIFERAW DEPARTMENT OF PARASITOLOGY AND PATHOLOGY MSc PROGRAM[Z]. AAU， 2014.

[4] Morehouse N F, Baron R R. Coccidiosis: evaluation of coccidiostats by mortality, weight gains, and fecal scores[J]. Exp Parasitol, 1970,28(1):25-29.

[5] Johnson J, Reid W. Anticoccidial drugs: Leision scoring techniques in battery and floor-pan experiments with chickens[J]. Experimental parasitology， 1970, 28(1):30-36.

[6] 角田清.陈宜，明如镜，译: 鸡球虫病[M].上海：上海科技出版社，1986.