Ki-67及PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达及临床意义

王佳娜 沈建军 张艳红 王佳天 李文秀 潘军英

Ki-67及PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达及临床意义

王佳娜1沈建军1张艳红1王佳天1李文秀1潘军英2

目的研究口腔腺样囊性癌(OACC)中Ki-67和PTEN的表达情况，及其表达水平与临床病理特征的关系。方法收集佳木斯大学附属第一医院病理实验室证实的40例口腔腺样囊性癌。另选口腔腺样囊性癌患者标本癌旁正常腺体15例做对照组。免疫组化SP法检测腺样囊性癌中Ki-67蛋白及PTEN的表达。结果Ki-67蛋白在口腔腺样囊性癌中的阳性率为70%(28/40)，明显高于对照组13%(2/15)(P<0.05)。PTEN蛋白在口腔腺样囊性癌中的阳性率为63%(25/40)，明显高于对照组20%(3/15)(P<0.05)。Ki-67、PTEN的表达与TNM分期、肿瘤组织学类型、远处转移、淋巴结转移和神经节浸润均显著相关，并且Ki-67和PTEN表达存在相关性。结论Ki-67和PTEN在口腔腺样囊性癌发生和发展过程中可能起重要作用。Ki-67和PTEN蛋白可能作为口腔腺样囊性癌的诊断标志物。

口腔腺样囊性癌；Ki-67；PTEN；免疫组织化学

口腔腺样囊性癌是口腔颌面部恶性肿瘤中比较常见的肿瘤之一，恶性常多发于女性，以腭部的小涎腺最多见，其次是腮腺[1]。该肿瘤生长缓慢，但具有一定的侵袭能力，早期即可向周围组织侵袭；局部淋巴结转移不常发生，主要通过血源性途径向远处转移。对于该病的治疗，目前国内外临床上仍采用以手术为主的综合治疗，由于常发生局部复发及远处转移导致该病的术后远期生存率较低，有报道称10年的生存率为43%[2-4]。因此探讨其浸润性及远处转移能力具有一定临床意义。目前关于Ki-67和PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达，在国内外的研究中较少。因此本研究采用免疫组织化学方法检测Ki-67和PTEN在口腔腺样癌中的表达，以探讨两种蛋白与肿瘤的浸润性及远端转移能力之间的关系，从而为口腔腺样囊性癌的临床治疗和预后作出判断提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

选取佳木斯大学附属第一医院病理实验室2010年1月—2016年6月病史保存完整且病理诊断为口腔腺样囊性癌进行根治性手术石蜡标本40例，其中男性10例，女性30例，年龄30～80岁，中位年龄55岁。肿瘤发生部位包括舌下腺、口底、颌下腺、腮腺、腭部(硬腭)、口颊部。病理诊断参照世界卫生组织(2011)涎腺癌的TNM分类分期分为侵袭组20例和非侵袭组20例。对照组选取癌旁正常腺体15例。病理诊断由3名专业病理科医师诊断核实，并且符合组织学诊断标准和病理分级标准。

1.2 试剂

Ki-67及PTEN均为单克隆抗体(Ki-67鼠抗人单克隆抗体ZM-0166；PTEN鼠抗人单克隆抗体ZM-0221)，工作浓度均为1∶100，SABC免疫试剂盒和DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 检测方法

采用免疫组织化学SABC法(按试剂盒说明书进行)，DAB显色，苏木素复染，阴性对照PBS缓冲液分别代替一抗，其余步骤同实验组。显微镜下观察结果：阳性为蛋白以细胞核或者细胞浆出现显色。由两位高资历的病理医生采用双盲法对免疫组化结果进行评估。观察至少5个具有代表性的高倍视野，根据细胞阳性染色范围计数肿瘤细胞中的阳性个数百分比来判断：阳性细胞数<15%记为(-)，阳性细胞数在16%～30%记为(+)，阳性细胞数在31%～50%记为(++)，阳性细胞数>51%记为(+++)，(+)～(+++)均记为阳性。图片拍照。

1.4 统计学方法

应用SPSS 21.0软件进行统计学分析，计数资料以频数(%)表示，组间比较采用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki-67和PTEN的表达情况

Ki-67和PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达如图1～2所示，Ki-67和PTEN在癌旁正常组织中的阳性表达如图3～4所示，Ki-67和PTEN在淋巴结组织中的阳性表达如图5～6所示。Ki-67和PTEN主要分布于细胞核和细胞浆中，阳性表达率分别为70%和63%，在正常组织中阳性表达率为13%和20%，两组阳性表达率间的差异具有统计学意义(P<0.05)(表1)。

图1 Ki-67在口腔腺样囊性癌中的表达(400×)Figure 1 Expression of Ki-67 in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

图2 PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达(400×)Figure 2 Expression of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

图3 Ki-67在癌旁组织中的阳性表达(200×)Figure 3 The positive expression of Ki-67 in paracancerous tissues(200×)

图4 PTEN在癌旁组织中的阳性表达(200×)Figure 4 The positive expression of PTEN in paracancerous tissues(200×)

图5 Ki-67在淋巴结组织中的阳性表达(200×)Figure 5 The positive expression of Ki-67 in lymph node tissue(200×)

图6 PTEN在淋巴结组织中的阳性表达(200×)Figure 6 The positive expression of PTEN in lymph node tissue(200×)

表1 Ki-67和PTEN在口腔正常组织和口腔腺癌组织中的表达(n，%)Table 1 The expression of Ki-67 and PTEN in normal tissues and OACC(n，%)

2.2 Ki-67及PTEN表达与OACC临床病理特征的关系

Ki-67及PTEN的表达与口腔腺样囊性癌的TNM分期、组织学类型、淋巴结转移、神经侵犯有关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤位置无关(P>0.05)(表2)。

2.3 Ki-67与PTEN在口腔腺样囊性癌中表达的关系

口腔腺样囊性癌中Ki-67与PTEN的表达存在相关性(φ=0.394，P<0.05)(表3)。

表3Ki-67及PTEN的相关性检验
Table3The correlation of Ki-67 with PTEN expression

Ki-67PTEN+-Totalχ2P+217284．5710．033-4812Total251540

表2 Ki-67及PTEN表达与口腔腺样囊性癌临床病理特征的关系Table 2 The relationship between the expression levels of Ki-67 and PTEN in OACC and clinicopathological features

3 讨论

口腔腺样囊性癌是常见的恶性肿瘤，早期即可向周围组织侵袭并通过血源性途径向远处转移。但其侵袭转移机制不清[1-4]。Ki-67蛋白是增殖细胞标记物，在细胞周期的所有活跃阶段均表达。Ki-67的阳性肿瘤细胞的分数(Ki-67标记指数)与癌症的进展有关[5-6]。PTEN是一种近年来新识别的基因，可以抑制多种基因的活性，对肿瘤的转移、侵袭抑制基因的作用尤为明显，体现在PTEN可以有效促进肿瘤细胞的侵袭及转移[7-8]。

在本研究中Ki-67和PTEN在口腔腺样囊性癌中的表达明显高于正常腺体组织，与肿瘤的分期、转移和神经侵犯密切相关(P<0.05)。并且口腔腺样囊性癌组织各分期间表达强度随着分期越高，表达率越高；转移侵袭越远，表达越活跃。Ki-67、PTEN二者在口腔腺样囊性癌中的表达呈显著的相关性。这与近年来在胃癌、子宫内膜癌、乳腺癌等进行的研究结果相似[9-10]。

Ki-67的活化和表达与许多癌前病变和恶性疾病有关，可以促进肿瘤细胞的发生、增殖、黏附、侵袭、转移和血管生成，甚至抑制肿瘤细胞的凋亡。PTEN在调节肿瘤细胞的生长、分化、转移等各方面均具有重要作用。(1)通过对细胞信号传导的影响来阻滞细胞生长的周期；(2)PTEN能够增加细胞的凋亡率；(3)抑制细胞的聚集、分化、转移、扩散；(4)减少肿瘤血管的生成。这些结果说明口腔腺样囊性癌中Ki-67、PTEN对肿瘤的发生、发展可能起到协同作用。由于本实验的病例数有限，实验经费及研究时间限制，不能进一步探讨整个通路在口腔腺样囊性癌发生发展中起到的作用，检测的结果可能存在一些不足，希望更多的学者搜集更多的病例进一步研究相关的问题。

综上所述，Ki-67和PTEN可能在口腔腺样囊性癌的发生、发展过程中发挥着重要作用，可能是口腔腺样囊性癌的标志物。在临床工作中检测Ki-67和PTEN这两种蛋白可能对评估口腔腺样囊性癌的恶性程度、预后具有重要意义。

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ExpressionofKi-67andPTENinoraladenoidcysticcarcinomaanditsclinicalsignificance

WANGJiana1，SHENJianjun1，ZHANGYanhong1，WANGJiatian1，LIWenxiu1，PANJunying2

1.Heilongjiang University of TCM，Jiamusi 154007，China；2.The First Affiliated Hospital，Heilongjiang University of Chinese Medicine

ObjectiveThe aims of this study were to determine the expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(OACC)and its relationship with clinicopathological features，and to explore the relationship between the expression of Ki-67 and PTEN.MethodsForty cases of oral adenoid cystic carcinoma were collected from the pathological laboratory in our hospital.Another 15 cases of normal gland in patients with oral adenoid cystic carcinoma were selected as the control group.The expression of Ki-67 protein and PTEN in adenoid cystic carcinoma was detected by immunohistochemistry.ResultsThe positive rate of Ki-67 protein in oral adenoid cystic carcinoma was 70%(28/40)，which was significantly higher than that in the control group(2/15)(P<0.05).The positive rate of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma was 63%(25/40)，which was significantly higher than that in the control group 20%(3/15)(P<0.05).They were associated with histological types，metastasis，lymph node metastasis and neural invasion，and not correlated with age，gender and tumor location.The expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma may have a significant correlation.ConclusionThe expression of Ki-67 and PTEN in adenoid cystic carcinoma is high，and their occurrence and development in adenoid cystic carcinoma play an important role in the process of evolution and metastasis.Ki-67 and PTEN proteins may be markers of oral adenoid cystic carcinoma.

Adenoid cystic carcinoma of the oral cavity；Ki-67；PTEN；Immunohistochemistry

黑龙江中医药大学科研基金面上项目(201722)

1.黑龙江中医药大学(佳木斯 154007)；2.黑龙江中医药大学附属第一医院

王佳娜，女，(1973-)，本科，高级实验师，从事中医药抗肿瘤的研究。

潘军英，E-mail：pjy19810621@163.com

R739.87

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.06.002

(收稿：2017-01-14)