培哚普利对维甲酸致骨质疏松大鼠骨组织结构的影响

钟 奕 薛 青 陈亮华 (中山大学附属第五医院老年病科，广东 珠海 59000)

培哚普利对维甲酸致骨质疏松大鼠骨组织结构的影响

钟 奕 薛 青 陈亮华1(中山大学附属第五医院老年病科，广东 珠海 519000)

目的探讨血管紧张素酶转化抑制剂(ACEI)培哚普利对骨质疏松大鼠骨组织的作用。方法将大鼠随机分为A、B、C、D、E五组，A、B、C、D 4组用80 mg·kg-1·d-1的维甲酸(RA)造模，E组为对照组，造模成功后A、B、C 3组再用8、4、2 mg·kg-1·d-1培哚普利给药，D、E两组灌予等量蒸馏水。实验过程中记录体重变化，2个月后行病理切片苏木精-伊红(HE)染色观察骨组织显微结构。结果培哚普利干预后骨组织与干预前比较：A组骨小梁中断较少，连接尚可，间距较前减小；B组骨小梁数量较前增多，仍有稀疏、变细，仍可见中断，间距无明显变化；C、D组表现类似，可见骨小梁疏松、中断，小梁间的网孔增大，小梁间连接减少；E组较前无明显变化；A、B、C 3组以A组作用较明显。结论培哚普利可促进骨形成，有效地拮抗RA造模大鼠骨质疏松的进展，且促进骨形成的作用呈剂量依赖性。

培哚普利；骨质疏松；骨组织

血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类药物是治疗高血压常用药物，有研究证实ACEI类药物之一的卡托普利有改善骨质疏松的效果〔1〕，一项高血压大鼠的研究也探讨了ACEI类药物可通过阻断肾素-血管紧张素系统(RAS)途径起到预防骨质疏松的作用〔2〕。本研究旨在探讨培哚普利对维甲酸(RA)致骨质疏松大鼠骨组织结构的影响。

1 材料与方法

1.1主要实验材料及仪器 10周龄SPF级SD雌性大鼠50只，体重200～250 g，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)2008-0002。RA(广州博新精细化工公司生产，130725)，培哚普利〔雅施达，4 mg/粒，施维雅(天津)制药有限公司生产，H20034053〕，电子天秤(德国SARTORIUS公司生产，BP110S型)，恒温箱式切片机(中国天津航空机电公司生产，HQP-101型)，烘片机(德国徕卡公司，HI1220)，倒置显微镜配套照相装置(日本CANON公司生产，A95型)。

1.2动物分组及模型制作 适应性喂养饲料1 w后，精确称重，随机分为A、B、C、D 4个模型组和对照(E)组，每组10只。模型组用去离子纯净水加入RA调配成适当浓度，于每天上午9时按照80 mg·kg-1·d-1连续灌胃14 d，每天一次，而对照组给予等容积去离子纯净水。14 d后，各组随机处死5只大鼠，取其一侧股骨，行病理切片苏木素-伊红(HE)染色观察骨组织显微结构，余下的大鼠继续进行下一步实验。

1.3药物干预及检测指标 A组：高剂量培哚普利组(8 mg·kg-1·d-1)；B组：中剂量培哚普利组(4 mg·kg-1·d-1)；C组：低剂量培哚普利组(2 mg·kg-1·d-1)；D、E组分别灌等量蒸馏水，连续2个月。实验过程中观察大鼠进食量、行动及对外界反应，每周称体重1次，在药物干预结束时处死实验大鼠，取一侧股骨，行病理切片HE染色观察骨组织显微结构。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0软件进行ANOVA分析、LSD检验。

2 结 果

2.1RA造模结束后各组存活情况及体重变化 连续14 d RA造模过程中，大鼠开始出现不同程度少食、活动减少，E组逐渐恢复正常，食欲及活动尚可，A、B、C、D组食欲亦逐渐好转，但活动仍较前减少，大鼠体重总体呈上升趋势，但A、B、C、D组体重上升均不如E组显著，除D组与E组有统计学差异(P<0.05)，其余无统计学差异(P>0.05)，A、B、C、D组间无统计学差异(P>0.05)。造模结束时，未见大鼠出现RA中毒症状。见表1。

表1 造模过程中各组体重对比

1)差值=第14天体重-第1天体重；与E组比较：2)P<0.05

2.2RA对骨组织显微结构的影响 A、B、C、D组可见骨组织显微结构受损的表现，如骨松质小梁明显稀疏、变细，小梁间连接减少，间距加大，皮质骨变薄，骨髓腔相对扩大，部分区域骨小梁中断、消失，说明RA组骨量减少，微结构受损，从骨组织显微结构看已达到骨质疏松模型标准〔3,4〕。E组股骨干骺端骨小梁丰富，连续性较好，皮质骨致密(见图1)。

2.3培哚普利干预后各组存活情况及体重变化 连续2个月给予培哚普利灌胃过程中，大鼠食欲下降，体重波动，活动未见明显异常。培哚普利干预前后，大鼠体重均增长，A、B组上升不如C、D、E组明显，但差异均不显著(P>0.05)。见表2。

2.4培哚普利对骨组织显微结构的影响 培哚普利干预后骨切片结果显示：A组可见骨小梁中断较少，连接尚可，间距较前减小；B组骨小梁数量较前增多，仍有稀疏、变细，仍可见中断，间距无明显变化；C、D组表现类似，可见骨小梁疏松、中断，小梁间的网孔增大，小梁间连接减少；E组较前无明显变化(见图2)。

表2 培哚普利干预后各组体重对比

图1 造模结束后各组股骨组织切片(HE，×100)

图2 培哚普利干预后大鼠股骨组织切片(HE，×100)

3 讨 论

大鼠生长至2个月龄时已达到性成熟，但骨骼仍可发育，骨量呈现增加趋势。本实验采取10周龄的大鼠，经适应性喂养及造模后，至药物干预时大鼠已达3个月龄，骨量变化已基本稳定，与成年人代谢水平相似。

ACEI作为治疗高血压的一线药物普遍应用于临床，多个流行病学研究发现，ACEI类药物可增加骨量，降低骨折风险〔5～7〕，也有动物实验证实了依那普利可增加子宫萎缩小鼠的骨密度〔8〕。这些研究表明ACEI不只对治疗高血压有利，对治疗老年人的骨质疏松也有一定作用，本实验结果说明培哚普利能够在一定程度上改善骨质疏松，本实验可推断8 mg·kg-1·d-1剂量的效果最好。由于实验条件的限制，无法实现通过双能X线或显微CT测量大鼠的骨密度，本研究发现培哚普利可促进骨形成，有效拮抗RA造模大鼠骨质疏松的进展，考虑其机制可能是骨组织中的血管紧张素(Ang)Ⅱ通过诱导负责骨吸收的破骨细胞活化、分化，导致骨吸收和骨形成失衡，最终骨量下降，骨微结构损坏〔9〕，而作为ACEI药物之一的培哚普利通过抑制AngⅡ而抑制破骨细胞活化、分化，从而改善骨质疏松；培哚普利促进骨形成的作用呈剂量依赖性。

1陈 方,吴 铁,崔 燎,等.卡托普利抗小鼠维甲酸性骨质疏松的作用探讨〔J〕.中国药理学通报,2002;18(5):572-5.

2Shimizu H,Nakagami H,Osako MK,etal.Angiotensin Ⅱ accelerates osteoporosis by activating osteoclasts〔J〕.FASEB J,2008;22(7):2465-75.

3宋 敏，李 晶.大鼠骨质疏松模型的复制方法及意义〔J〕.当代医学，2010;15(206):16-8.

4朱虎虎,孙 炜,孙建新，等.维甲酸诱导雌性大鼠骨质疏松模型建立的效果观察〔J〕.当代医学,2013;(14):24-5.

5Asaba Y,Ito M,Fumoto T,etal.Activation of renin-angiotensin system induces osteoporosis independently of hypertension〔J〕.J Bone Miner Res,2009;24(2):241-50.

6Rejnmark L,Vestergaard P,Mosekilde L.Treatment with beta-blockers,ACE inhibitors and calcium-channel blockers is associated with a reduced fracture risk:a nationwide case-control study〔J〕.J Hypertens,2006;24(3):581-9.

7Goemans N,Buyse G.Current treatment and management of dystrophinopathies〔J〕.Curr Treatment Option Neurol,2014;16(5):1-13.

8Kang KY,Kang Y,Kim M,etal.The effects of antihypertensive drugs on bone mineral density in ovariectomized mice〔J〕.J Korean Med Sci,2013;28(8):1139-44.

9Nakagami H,Osako MK,Morishita R.Potential effect of angiotensin Ⅱ receptor blockade in adipose tissue and bone〔J〕.Curr Pharmaceutical Design,2013;19:3049-53.

R592

A

1005-9202(2017)24-6052-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.020

1 珠海市人民医院干部保健老年病科

薛 青(1970-)，女，教授，硕士生导师，主要从事老年内分泌疾病研究。

钟 奕(1989-)，女，在读硕士，主要从事老年内分泌疾病研究。

〔2016-12-05修回〕

(编辑 苑云杰/杜 娟)