普罗布考对糖尿病大鼠生育功能的影响①

刘松涛，曹会峰，郝 鹏，隋 路，逄德志，李莹玉，杨 哲

(1.佳木斯大学附属第一医院泌尿外科，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯妇幼保健院生殖学科，黑龙江 佳木斯 154003；3.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

普罗布考对糖尿病大鼠生育功能的影响①

刘松涛1，曹会峰1，郝 鹏1，隋 路2，逄德志3，李莹玉3，杨 哲3

(1.佳木斯大学附属第一医院泌尿外科，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯妇幼保健院生殖学科，黑龙江 佳木斯 154003；3.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：探讨普罗布考对糖尿病大鼠生育功能的影响。方法：将50只2月龄Wistar大鼠随机取10只设为正常对照组，余40只为糖尿病模型组。造模成功后将成模大鼠随机分为糖尿病组及普罗布考治疗组，正常喂养10周后，分别测精子质量、睾丸组织丙二醛(MDA)含量及血清睾酮、黄体生成素(LH)含量及海绵体内压。结果：同正常对照组相比，糖尿病模型组大鼠电刺激海绵体内压明显降低、精子成活率降低、睾丸组织内MDA含量明显增加，睾酮明显减低(P<0.05)，普罗布考治疗组大鼠电刺激后海绵体内压、精子成活率，睾丸组织内丙二醛含量，睾酮等各项指标均较糖尿病组有改善。结论：普罗布考可增强糖尿病大鼠勃起功能、降低睾丸组织氧化应激水平、提高精子质量及血清性激素水平，对糖尿病引起的生育功能下降有一定的改善作用。

糖尿病引起的持续性高血糖会对雄性大鼠生殖功能产生不良影响，可以导致性激素分泌紊乱、勃起功能障碍和生育功能下降[1]。虽然我们对糖尿病引起这些障碍的机制还不完全了解，但是由于高血糖造成的细胞内的活性氧(ROS)产生过剩和睾丸功能障碍之间的关系在一些文献已经有所报道[2]。体内高血糖浓度可能是雄性阴茎海绵体平滑肌数量减少的重要原因之一，同时下丘脑- 垂体- 性腺轴异常使得雄激素合成能力下降，进而影响其生精及勃起功能[3]。本研究旨在探讨普罗布考对雄性糖尿病大鼠生育功能的改善作用。

1 实验材料

1.1 药品和化学试剂

脲链佐菌素(STZ)，美国Sigma公司；普罗布考(500mg/片)，中国承德颈复康药业；MDA，南京建成生物工程研究所；主要仪器：BioTek全自动多功能酶标仪、SQA-V 全自动精子质量分析仪、罗氏eboi德国全自动电化学发光免疫分析仪器、血糖仪、电刺激仪。

1.2 实验动物

8周龄雄性Wistar大鼠50只，体重约为180～220g(购于哈尔滨医科大学实验动物中心，合格证SCKX(黑)2016-02)，笼盒系统饲养。

2 方法

2.1 造模及分组

大鼠适应性喂养一周后，随机抽取10只大鼠为正常对照组，其余40只大鼠给予STZ45mg/kg腹腔注射，72h测定空腹血糖，以血糖≥16.7mmol/L者认为造模成功。将存活且造模成功的24只大鼠随机分为糖尿病组及普罗布考治疗组，每组各12只。

2.2 给药

治疗组大鼠每天给予普罗布考灌胃早晚各一次(生理盐水配置，给药剂量500mg/kg·d)，糖尿病组与正常对照组等量生理盐水灌胃，连续10周。

2.3 标本制备及处理

2.3.1 标本采集:10周后糖尿病大鼠存活10只，治疗组大鼠存活11只。测量大鼠血糖、体重后将3组大鼠分别给予5%水合氯醛腹腔注射，麻醉满意后，采取颈总动脉插管以记录平均颈动脉压(MAP)，针头刺入阴经背侧海绵体，连接压力转换器以记录海绵体内压(ICP)，5V，25Hz，连续单刺激盆底神经节，测量并记录阴经海绵体压力数据变化[4]。实验后取双侧附睾，生理盐水漂洗2次后，分别置于M-199精子抚育液中，眼科剪剪成微小碎块，取上清，一份放置37℃水浴锅抚育5min测定精子质量，另一份滴于盖玻片后瑞式染色观察精子形态。剪开胸腔，分离组织，剥离心脏，5mL注射器心脏取血，立刻离心后取上清，置于-20℃冰箱冻存，待测。分离腹腔脏器，取出双侧睾丸，多次漂洗，并置于-80℃冰箱内保存。

2.3.2 检测数据

使用罗氏eboi德国全自动电化学发光免疫分析仪器测量血清中睾酮，黄体生成素含量。制备10%睾丸组织匀浆，用硫代巴比妥酸法测定睾丸组织中MDA含量。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 普罗布考对糖尿病大鼠血糖、体重的影响

实验前各组大鼠各指标无统计学意义，糖尿病成模并饲养10周后，糖尿病组大鼠及普罗布考干预组大鼠质量较正常对照组均减轻，而普罗布考干预组减轻较少且血糖浓度有所改善(P<0.05)，见表1。

3.2 普罗布考对糖尿病大鼠精子成活率、精子畸形率及海绵体内压的影响

与正常对照组组大鼠相比糖尿病组大鼠和普罗布考干预组大鼠的精子成活率、精子畸形率明显增加，海绵体内压明显下降，普罗布考组大鼠相对糖尿病组有一定改善(P<0.05)。见表2。

表1 普罗布考对糖尿病大鼠血糖、体重的影响

注： 体重F=355.814，P<0.05 正常组与糖尿病组相比P<0.05，糖尿病组与普罗布考干预组相比P<0.05。

血糖F=281.723，P<0.05 正常组与糖尿病组相比P<0.05，糖尿病组与普罗布考干预组相比P<0.05。

表2 普罗布考对糖尿病大鼠精子成活率、畸形率及海绵体内压的影响

精子存活率F=162.014 正常组、糖尿病组P<0.05，糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

精子畸形率F=84.102 正常组、糖尿病组P<0.05，糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

ICP/AMPF=53.008 正常组、糖尿病组P<0.05糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

3.3 普罗布考对糖尿病大鼠睾丸组织MDA含量及睾酮、黄体生成素的影响

于正常对照组组大鼠相比，糖尿病组大鼠及普罗布考干预组大鼠睾丸组织MDA含量，血清睾酮、黄体生成素、含量均明显减少，普罗布考干预组各项指标均有所改善(P<0.05)。见表3。

表3 普罗布考对糖尿病大鼠睾丸组织MDA含量及雄激素、 黄体生成素的影响

注： MDA F=90.223P<0.05 正常组、糖尿病组P<0.05，糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

睾酮F=389.167P<0.05正常组、糖尿病组P<0.05，糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

LH F=15.569P<0.05正常组、糖尿病组P<0.05，糖尿病组、普罗布考组P<0.05。

4 讨论

糖尿病导致男性性功能损伤的因素复杂，糖尿病性氧化应激可以消耗体内大量抗氧化酶且增加活性氧自由基的产生，导致活性氧产生过剩，大量的ROS堆积，使得组织损伤严重，亦可使大量细胞凋亡[5]。赵红光等人研究表明糖尿病性勃起功能障碍及生精功能损伤均与高血糖状态下的氧化应激有重要关系。此外高血糖持续存在使得睾丸周围毛细血管内皮损伤严重，导致毛细血管数目减少及细胞超微结构改变[6]， 亦造成睾丸生精细胞功能降低，影响生育功能。同时高血糖还会造成下丘脑- 垂体- 性腺轴功能减退，这些都对雄性生育功能有较大影响。

普罗布考抗氧化作用较为显著，其可以抑制LDL氧化形成ox-LDL，从而减少MDA的合成。其亦可以抑制烟酰胺辅酶氧化酶的活性，清除体内过量堆积的氧自由基[7]。本实验中普罗布考干预组大鼠睾丸组织内MDA减少明显，减轻了对睾丸组织的损伤，在一定程度上对睾丸起到了保护的作用[8]。普罗布考的另一作用是改善血管内皮功能，其可以完全阻断晚期糖基化终末产物引起的组织因子的表达，还可以增加一氧化氮含量和活性，改善内皮依赖性舒张血管作用[9]，本实验普罗布考干预组大鼠的海绵体内压增加及精子质量改善，可能与普罗布考的这一作用有关，但与其有关的因子及具体机制和有待进一步实验探究。

有研究表明ROS参与了胰岛素抵抗(IR)，大量的ROS使胰岛素信号传递受阻且且影响葡萄糖转运体的表达，普罗布考可以减少胰岛中活性氧类，增强胰岛素敏感性，因而可能对高血糖有一定的改善作用[10]。

本实验研究表明给予普罗布考干预10周后，糖尿病雄性大鼠与生育有关的各项指标均有所好转，睾丸组织MDA显著降低，血清睾酮、LH水平均有明显增加，不仅使糖尿病大鼠的勃起功能改善，且提高了性激素水平及睾丸的生精功能，使大鼠的精子治疗及精子形态有所好转。但与其有关的因子及具体机制和有待进一步实验探究。

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佳木斯大学研究生科技创新项目，编号：YM2016_039。

刘松涛(1990～)男，黑龙江齐齐哈尔人，在读硕士研究生。

曹会峰(1968～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail:13845451056@163.com。

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1008-0104(2017)06-0063-02

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