广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎脑脊液培养的病原菌分析

方 霞 郑守鑫 柳明波 熊 彪

钦州市第一人民医院，广西 钦州 535000

·论著临床诊治·

广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎脑脊液培养的病原菌分析

方 霞 郑守鑫 柳明波 熊 彪

钦州市第一人民医院，广西 钦州 535000

目的探讨广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎脑脊液培养的病原菌分布及其对抗菌药物的敏感性。方法回顾分析2015-01-2017-06钦州市第一人民医院收治的51例化脓性脑膜炎患者的脑脊液涂片及培养结果，并分析病原菌的药物敏感性。结果51株病原菌，以真菌感染的新型隐球菌为主，共28株，革兰阴性杆菌6株，脑膜炎奈瑟菌1株。革兰阳性球菌12株，革兰阳性球菌中以链球菌为主。在培养出的真菌中，均对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶敏感。结论广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎病原菌以新型隐球菌为主。

化脓性脑膜炎；细菌性脑膜炎；广西北部湾地区；病原菌；药敏试验；成人

成人化脓性脑膜炎也称细菌性脑膜炎(简称化脑，APM)，起病急、病情严重，发展迅速，致残率高、病死率高[1-2]。在全球范围内，每年新发病的化脓性脑膜炎感染患者可达120万，在发展中国家化脑的病死率高达20%[3]。其最主要的致病菌是脑膜炎奈瑟球菌和肺炎链球菌，在发达国家的化脑患者中其致死率分别为7%和30%。在发展中国家APM致死率更高，可达50%[4]。所以，快速确诊化脓性脑膜炎，并进行早期治疗，能够明显减轻其致残率和减少病死率。

为研究广西北部湾地区化脓性脑膜炎的病原菌分布以及耐药性，现对2015-01—2017-06钦州市第一人民医院收治的51例化脑患者的脑脊液涂片及培养阳性结果进行分析。

1 资料与方法

1．1一般资料选取钦州市第一人民医院2015-01—2017-06收治的诊断为化脓性脑膜炎患者送检的脑脊液标本，剔除同一患者分离培养出来的重复菌株。

1．2方法对怀疑为颅内感染的患者，严格采用无菌操作技术采集脑脊液标本1～2 mL，消毒瓶口后注入儿童专用培养瓶(美国BD公司)上机培养，取出报警阳性的培养瓶分区划线接种于含5%羊血的哥伦比亚琼脂平皿和嗜血杆菌巧克力平皿(广州迪景公司)，血平皿放35 ℃培养箱过夜培养；嗜血杆菌巧克力平皿放含5% CO2的培养箱35 ℃培养过夜。所分离菌株采用法国生物梅里埃VITEK2 Compact系统进行鉴定和药敏。实验卡片采用VITEK系统的鉴定卡和药敏卡；少量无相应药敏卡片的细菌采用梅里埃ATB药敏板条进行药敏实验。同时采集2～3 mL脑脊液送检涂片，3 500 r/min离心10 min，取出沉淀做片，进行墨汁染色、革兰染色并镜检。

1．3结果判读按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)的指南进行。

1．4标准菌株铜绿假单胞菌ATCC27853、金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠埃希菌ATCC25922。

2 结果

51例脑脊液培养阳性患者中每例均只分离到1种菌株，其中真菌32株(62.7%)，革兰阳性球菌12株(23.5%)，革兰阴性杆菌6株(11.7%)，革兰阴性球菌1株(2.0%)。在32株真菌中新型隐球菌28株(87.5%)，白假丝酵母菌2株(6.2%)，近平滑假丝酵母菌1株(3.1%)，罗伦特隐球菌1株(3.1%)；在12株革兰阳性球菌中猪链球菌Ⅱ型4株(36.4%)，表皮葡萄球菌3株(27.3%)，金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌各2株(占18.2%)，人葡萄球菌1株(9%)；在6株革兰阴性杆菌中铜绿假单胞菌2株(33.3%)，莫拉菌群、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌各1株(16.7%)。见图1～2。

图1 脑脊液细菌分布 图2 真菌分类

在培养出的真菌中，均对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶敏感；4株猪链球菌Ⅱ型均对万古霉素、青霉素、奎奴普丁/达福普丁敏感，2株肺炎链球菌均对万古霉素、氯霉素、阿莫西林、厄他培南、利奈唑胺、泰利霉素敏感，对红霉素和四环素均耐药；5株葡萄球菌属均对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普丁、替加环素敏感。6株革兰阴性菌中，1株多重耐药的鲍曼不动杆菌，1株多重耐药的铜绿假单胞菌和1株产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌。

3 讨论

化脓性脑膜炎是严重威胁人类健康的一种中枢神经系统感染性疾病，起病急、病情严重，发展迅速，致残率、病死率高，预后效果与是否能早期确诊并积极给予有效的治疗措施有密切的关系。脑脊液的相关检查是化脓性脑膜炎诊断和疗效评估的重要指标，特别是脑脊液涂片和培养的检查[5]，准确性极其重要。所以，通过采集分析患者脑脊液培养以及涂片检查的结果，对明确化脓性脑膜炎诊断有重要的临床指导意义。

化脓性脑膜炎的确诊主要依靠脑脊液相关检查、涂片以及细菌培养结果。本文分析51例患者细菌的构成，真菌居多，其中以新型隐球菌感染者最多，其次为猪链球菌Ⅱ型、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及白假丝酵母。在我国宁夏地区化脓性脑膜炎脑脊液培养以革兰阳性球菌为主，其中以葡萄球菌属感染者最多见，其次分别为单核细胞增生李斯特菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌以及草绿色链球菌[6]。在我国山东济南地区化脓性脑膜炎脑脊液培养以脑膜炎双球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌属感染为主[7]。在我国河南地区化脓性脑膜炎脑脊液培养以鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主[8]。研究显示，由于广西北部湾地区流行病学的不同，特别是广西HIV感染患者较多[9]，由HIV感染引起的中枢神经系统感染主要为隐球菌[10]，以及当地人们喜欢养鸽、养猪等生活习惯和各地区卫生条件不同、抗菌药物的广泛使用等，导致当地化脓性脑膜炎的病原菌分布发生了较大变化，主要以新型隐球菌感染为主，其次为猪链球菌Ⅱ型。猪链球菌感染很多情况是由于接触死猪、病猪和其排泄物等造成的[11]。猪链球菌有30多种血清型，感染人类常见血清型为Ⅱ型[12]。本研究分离的猪链球菌血清型和文献报道一致，肺炎链球菌是引起儿童脑膜炎最常见病原菌[13]，本研究中分离2株，其在山东、宁夏、河南[14]等地区成人化脓性脑膜炎病原菌分离均有报道，可见肺炎链球菌是引起成人脑膜炎又一重要病原菌，值得重视。

本研究药敏结果显示，在培养出的真菌中，均未发现对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶耐药株，与熊志刚等[15]研究的关于隐球菌和念珠菌对这5类药物敏感性>95%无差异。在培养出的革兰阳性球菌药敏中，不同细菌耐药性各不相同，但无论是链球菌还是葡萄球菌均未发现对万古霉素和利奈唑胺耐药株；链球菌对红霉素和四环素耐药情况严重，考虑到这两种抗菌药物不易通过血脑屏障[16]，故在选择用药时应避开。临床分离的革兰阴性杆菌的耐药情况十分严重[17]，本研究分离的6株革兰阴性杆菌中均有多重耐药的鲍曼不动杆菌、多重耐药的铜绿假单胞菌和产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌。这种细菌的分离让临床对化脓性脑膜炎的抗感染治疗面临着严峻的挑战。

脑脊液细菌培养结果受标本采集时间和是否使用抗菌药物等因素的影响；脑脊液涂片受菌量多少的影响，菌量太少不易检出。当培养和涂片是阴性结果时也不完全排除细菌、真菌感染的可能，特别是病毒、结核分枝杆菌、厌氧菌以及原虫等病原菌的感染时用普通细菌培养、革兰染色和墨汁染色方法很难检测到病原菌。所以，必须综合运用免疫、生化、PCR和荧光等方法进行检测。

广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎病原菌以新型隐球菌为主，该地区医生在怀疑脑脊液细菌感染时，不应盲目参照其他地区细菌感染特点使用抗菌药物，应根据本地区感染特点立即送检脑脊液培养、脑脊液墨汁染色、革兰染色等相关检查。当染色发现有真菌，特别是隐球菌属时可以经验性使用氟胞嘧啶进行治疗[18]。培养出革兰阳性球菌时可以经验性使用万古霉素或利奈唑胺，待实验室检查的药敏结果回报后再根据敏感药物调整用药方案。这样可以早期快速诊断化脓性脑膜炎，从而达到早期治疗，并提高成人化脑的治疗效果，减轻致残率和病死率的目的。

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PathogenanalysisofadultpurulentmeningitisinBeibuGulfofGuangxi

FANGXia，ZHENGShouxin，LIUMingbo，XIONGBiao

TheFirstPeople’sHospitalofQinzhou，Qinzhou535000，China

ObjectiveTo investigate the distribution of pathogens in cerebrospinal fluid culture of adult purulent meningitis in Beibu Gulf of Guangxi and its sensitivity to antimicrobial agents．MethodsThe results of cerebrospinal fluid smear and culture in 51 patients with purulent meningitis in our hospital from January 2015 to June 2017 were retrospectively analyzed，and the drug sensitivity of pathogens was analyzed．ResultsAmong the 51 strains of pathogenic bacteria，there were mainly 28 strains of Cryptococcus neoformans with fungal infection，6 strains of Gram-negative bacilli，1 Strain of Neisseria gonorrhoeae．12 strains of Gram-positive cocci were mainly streptococcus．In cultured fungi，fluconazole，Aripiprazole，itraconazole，anphotericin B，and fluorouracil were all sensitive．ConclusionThe pathogen of adult purulent meningitis in Beibu Gulf area of Guangxi is mainly Cryptococcus neoformans．

Purulent meningitis；Bacterial meningitis；Guangxi Beibu Gulf area；Pathogens；Drug sensitivity test；Adult

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.23.021

广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2013746)

方霞(1986-)，女，本科，主管检验技师。研究方向：临床微生物。Email：17883126@qq．com

R512.3

A

1673-5110(2017)23-0084-03

(收稿 2017-08-04)

夏保军

信息：方霞，郑守鑫，柳明波，等．广西北部湾地区成人化脓性脑膜炎脑脊液培养的病原菌分析[J]．中国实用神经疾病杂志，2017，20(23)：84-86．