双氯芬酸钠注射液对奶牛安全性的试验研究

李世宏，孔晓军，秦哲，刘希望，杨亚军，焦增华，李剑勇

（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室，兰州 730050）

双氯芬酸钠注射液对奶牛安全性的试验研究

李世宏，孔晓军，秦哲，刘希望，杨亚军，焦增华，李剑勇

（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室，兰州 730050）

为了评价双氯芬酸钠注射液对奶牛的安全性，本试验选择24头健康奶牛并随机分成3个试验组（1倍剂量组、3倍剂量组、5倍剂量组）和1个空白对照组，每组6头奶牛。试验组颈部肌内注射给药，对照组不用药，连续观察，分析其对奶牛体征、血常规和血液生化指标的影响。结果表明，试验组的临床指标及血常规指标均无明显差异，血液生化指标虽然在试验初期试验组的个别指标与对照组出现差异，但在7d后均恢复正常。说明双氯芬酸钠注射液在奶牛临床上按推荐剂量（2.2mg/kg体重）使用是安全的。

双氯芬酸钠注射液；奶牛；安全性试验

双氯芬酸钠（Diclofenac sodium，DS）是苯乙酸类衍生物，属于第三代非甾体抗炎药物。双氯芬酸钠注射液的药理效应与其抑制前列腺素合成有关，是环氧化酶的强抑制剂，可减少前列腺素、血栓素的合成，从而起到抗炎、镇痛、解热作用[1]。双氯芬酸钠注射液是郑州百瑞动物药业有限公司和中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所等单位联合研制开发的用于治疗奶牛临床型乳房炎的新制剂。本试验观察了不同剂量双氯芬酸钠注射液作用于奶牛后，其从有效作用到毒性作用，甚至到致死作用的动态变化过程，考察了双氯芬酸钠注射液的安全性及安全剂量范围，旨在为进一步临床试验制定给药方案提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试药品

双氯芬酸钠注射液：10mL/瓶（10mL∶0.5g），透明液体制剂，批号：20150826，郑州百瑞动物药业有限公司生产。

1.2 试验动物

2015年10月10～31日，在郑州市中牟县富源牧业有限公司选取24头健康荷斯坦牛为试验动物，每头体重约450kg。饲料为奶牛全价混合日粮（TMR）。

1.3 仪器与试剂

全自动动物血细胞分析仪（迈瑞BC2800V）、血液生化分析仪（XL-640, Alfra, Germany）、血细胞分析仪和血液生化分析仪配套试剂、离心机、真空采血管等。

1.4 试验设计

1.4.1 试验动物分组与给药

将试验奶牛随机分为3个试验组，即1倍剂量组（2.2mg/kg）、3倍剂量组（6.6mg/kg）、5倍剂量组（11.0mg/kg）和1个空白对照组，每组6头奶牛，采用耳号进行标记识别，其中，1倍剂量组为推荐剂量。用药前先预饲1周以适应环境。各组按拟定的给药剂量，经颈部肌肉注射给药，每天用药1次，连用3d，分别于末次给药后24h、末次给药后第7天尾静脉采集血样并进行血常规和血生化检测[2]。分组和给药剂量见表1。

表1 试验动物分组及给药剂量

1.4.2 临床观察

试验期间每天定时观察记录各组试验牛的精神、呼吸、心率、反刍、饮食、粪便等临床症状。

1.4.3 血常规检测

在末次给药后24h和末次给药后第7天，用1%肝素钠抗凝真空采血管对所有试验奶牛进行尾静脉采血，用迈瑞BC-2800V血液分析仪检测血常规。

1.4.4 血液生化学检测

在末次给药后24h和末次给药后第7天，对所有试验奶牛进行尾静脉采血，4 000r/min离心10min后分离血清，采用XL-640全自动生化分析仪进行血液生化学检测。

1.4.5 数据统计分析

用SPSS 19.0应用软件进行数据显著性检验，采用t检验比较试验组与对照组间血常规和血液生化学等各项指标的显著性差异。

2 结果与分析

2.1 临床观察结果

整个试验期间，与空白对照组奶牛相比，各试验组奶牛的精神、饮水、采食、步态、呼吸、心率及反刍等均无明显差异。接取少量尿液静置后，颜色、澄清度无明显变化，粪便色泽、黏稠度无明显变化。在试验期间，各组试验牛均无死亡记录。试验组奶牛临床观察主要结果见表2。

表2 临床观察结果

2.2 血常规检测结果

血常规检测结果见表3、表4。经统计学分析表明，各试验组与空白对照组奶牛相比，血液常规指标无显著性差异（P＞0.05）。

2.3 血液生化检测结果

血液生化检测结果见表5、6。经统计学分析表明，给药24h后，与空白对照组相比，试验组血液生化指标中的总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷氨酰氨基转移酶肌酸激酶、乳酸脱氢酶有极显著（P＜0.01）或显著性差异（P＜0.05）。但给药后第7天，与对照组相比，各试验组奶牛血液生化指标均无显著性差异（P＞0.05）。

3 讨论

本研究中，在末次给药后24h后3倍剂量和5倍剂量试验组奶牛的总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、肌酸激酶、谷氨酰氨基转移酶、乳酸脱氢酶等血液生化指标与空白对照组比较差异显著或极显著，但1倍剂量组无明显差异。分析其原因，是因为过多双氯芬酸钠注射液肌肉注射后随着吸收、分布至全身后，肝脏作为药物浓集、转化和代谢的主要器官，多会引起急性损伤，其机制可能与氧化应激、线粒体损伤以及一氧化氮生成

等有关。线粒体通透性改变可导致活性物质生成和线粒体肿胀并引起肝细胞坏死[3]。由于双氯芬酸钠注射液对肝脏的上述可能存在的影响，从而导致一些血液生化指标发生变化。但是随着药物在体内的分解、代谢，上述指标均可恢复正常，说明双氯芬酸钠注射液在体内引起部分血液生化指标的波动是暂时的、轻微的，不会对机体产生严重危害[4]。在双氯芬酸钠注射液靶动物安全性试验过程中，由于各受试组奶牛未出现明显的临床症状或中毒现象，故未进行组织病理学检查。

表3 末次给药24h后各试验组和对照组奶牛的血常规指标 （n=6）

表4 末次给药第7天各试验组和对照组奶牛的血常规指标（n=6）

表5 末次给药24h后各试验组和对照组奶牛的血液生化指标（n=6）

表6 末次给药第7天试验组和对照组奶牛的血液生化指标（n=6）

在双氯芬酸钠注射液靶动物奶牛安全性试验中，通过观测分析临床指标、血常规、血液生化学等指标，结果表明，受试药物双氯芬酸钠注射液在奶牛临床上按推荐剂量使用是安全的，具有良好的应用前景。

[1] 农业部兽药评审中心.兽药研究技术指导原则汇编(2006-2011年)[S]. 北京:化学工业出版社,2012,3.

[2] 张宇.血常规检测的临床意义[J].中国医药指南,2012,10(17):390-391.

[3] 唐光武.双氯芬酸钠注射液对家禽的毒性作用研究[D].郑州:河南农业大学, 2010.

[4] 刘磊,周绪正,李冰,等.伊维菌素纳米乳对牛的安全性研究[J].广东农业科学,2014,2:125-127.

Study on the Safety Test of Diclofenac Sodium Injection in Cows

LI Shi-hong, KONG Xiao-jun, QIN Zhe, LIU Xi-wang, YANG Ya-jun, JIAO Zeng-hua LI Jian-yong
(Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS / Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development, Ministry of Agriculture / Key Laboratory of New Animal Drug Project, Lanzhou 730050)

To evaluate the safety of Diclofenac Sodium Injection in cows, totally 24 healthy cows were randomly divided into high, medium and low doses of 3 different experimental groups and 1 control group, each group with 6 cows. The experimental group cows were given cervical intramuscular injection, control group without medication,with continuous observating and detecting the signs, to analyse the effects on the blood and blood biochemical index of cows.The results showed that: 2.2 mg/kg weight in the middle dose group and the control group had no difference,and no other obvious toxic reaction; 11 mg/kg high dose group had no significant toxic effect. This test shows that the clinical use of the drug is safe when Diclofenac Sodium Injection is not more than 2.2mg/kg body weight.

Diclofenac Sodium Injection; Cow; Safety test

S858.23

A

1004-4264（2017）12-0041-05

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.12.011

2017-03-30

中国农业科学院农业科技创新工程（CAAS-ASTIP-2016-LIHPS），兽用化学药物创新团队。

李世宏（1974-），男，甘肃白银人，本科，副研究员，研究方向为奶牛临床疾病防治。