桑叶黄酮对衰老模型小鼠抗氧化能力影响的探究

2017-12-26何东与

山西农经 2017年22期

关键词：半乳糖桑叶灌胃

□何东与

（成都七中万达中学四川成都 610036）

桑叶黄酮对衰老模型小鼠抗氧化能力影响的探究

□何东与

（成都七中万达中学四川成都 610036）

研究桑叶中黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影响。采用连续30天腹腔注射D-半乳糖（200mg/kg）建立小鼠亚急性衰老模型。建模之后，分别灌胃低、高剂量桑叶黄酮（0.3g、0.6g/kg），同时衰老模型组和药物治疗组灌胃同等体积生理盐水与抗坏血酸（0.5g/kg）。21天后检测小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果表明：与正常对照组相比，衰老模型组中SOD水平极显著降低，MDA含量升高；与衰老模型组比，桑叶黄酮高剂量组可以明显提高小鼠机体SOD活性，降低MDA含量。因此，桑叶黄酮能抑制体内过氧化物的生成，有效清除体内的自由基，提高衰老小鼠的抗氧化能力，为桑叶的开发与应用提供一定依据。

桑叶；黄酮；衰老；抗氧化

机体的衰老是由多种因素累积而成，随着分子生物学和医学的迅速发展，人们对机体内大量存在的自由基及其产生的危害有了越来越多的认识[1;2]。研究表明，过量的自由基是导致机体衰老和死亡的重要因素之一。因此，如何清除生物体内过量的自由基已经成为抗衰老研究的核心问题[3]。

桑叶中富含的多糖、黄酮、蛋白质、氨基酸等活性成分具有降血脂、降血糖、抗凝血等作用[4;5]。黄酮类化合物是桑叶的主要功能成分之一，包括槲皮素、异槲皮素、二氢山柰素等[6-8]。目前，对于桑叶黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影响尚未见报道。本实验通过其对D-半乳糖致衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影响，观察其抗衰老作用，为桑叶的开发与应用提供一定科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

桑叶，购自于当地农贸市场，经四川师范大学生命科学学院植物学教研室鉴定。总蛋白测定试剂盒（BCA法）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，均购自于北京天根生化科技有限公司；其它石油醚、无水乙醇、抗坏血酸、D-半乳糖、芦丁标准品、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH等均为国产分析纯。电子天平（赛多利斯）、烧杯、玻璃棒、超声清洗仪（宁波新芝）、温度计、旋转蒸发仪（Buchi）、100mL容量瓶、分光光度计（AJ耶拿）。

1.2 试验方法

1.2.1 桑叶黄酮的提取。按照文献方法提取桑叶黄酮：利用建立芦丁标准液建立标准曲线的方法检测黄酮含量并配置成生药浓度1g/mL溶液备用[4;6;9]。

1.2.2 动物衰老模型建立。25只ICR小鼠，雄性，22-26克，购自四川省成都达硕实验动物有限公司。小鼠自由进食、饮水。随机分为正常对照组（5只）与D-半乳糖组（20只），D-半乳糖组连续腹腔注射（200mg/kg）溶液30天，建立小鼠衰老模型，正常对照组腹腔注射同等体积的生理盐水。

1.2.3 桑叶黄酮灌胃治疗。将注射D-半乳糖的20只小鼠再随机分为4组：衰老模型组、药物治疗组、桑叶黄酮低、高剂量组。桑叶黄酮低、高剂量组按体重每天分别灌胃0.3g、0.6g/kg；药物治疗组灌胃按体重灌胃0.5g/kg抗坏血酸；衰老模型组与正常对照组给予等体积的生理盐水灌胃。连续给药21天。灌胃结束后禁食1天，眼球采血，分离血清，按试剂盒说明书检测血清中SOD和MDA含量。

1.2.4 进行数据统计与分析。采用Excel的方差分析与多重比较，数据用±s表示。

2 结果与分析

2.1 桑叶黄酮对小鼠血清中的SOD和MDA含量的影响

与正常对照组相比，衰老模型组小鼠在持续D-半乳糖的作用下，血清的SOD活性显著降低（P＜0. 01），MDA含量升高（P＜0.01），表明小鼠衰老模型建立成功。在灌胃桑叶黄酮后，与衰老模型组相比，桑叶黄酮高剂量组在SOD活性显著升高（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05）；低剂量组小鼠无明显差异（P＞0. 05）。药物治疗组小鼠血清中SOD活性较衰老模型组小鼠升高显著（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05），见表1。

表1 桑叶黄酮对小鼠血清中的SOD和MDA含量的影响（±s n=5）

注：与正常对照组相比，** P＜0.01;与衰老模型组相比，△P＜0.05,△△P＜0.01

3 讨论

机体抗氧化能力的强弱与健康程度存在密切的关系。抗氧化酶能够清除和分解体内过量的O2-和H2O2等自由基，作为重要的抗氧化酶之一，SOD活性可以反应机体的抗氧化能力[2;10]。而MDA是一种脂质过氧化物，可反映出机体内脂质的过氧化程度，MDA含量的高低间接反映了机体受到自由基攻击的严重程度。大量研究表明，当机体受到自由基攻击而被氧化时，抗氧化剂的注射和使用，使得MDA含量下降，机体抗氧化能力得到明显增强[11]。

根据衰老的代谢紊乱学说，D-半乳糖的持续注射导致细胞代谢紊乱，自由基氧化与抗氧化作用动态平衡失调，使个体细胞易受自由基的伤害，最终导致机体衰老[12]。本研究中，小鼠在注射D-半乳糖后，SOD活性显著降低，MDA含量升高，说明衰老模型建立成功。在衰老组小鼠灌胃桑叶黄酮后，与衰老模型组比较，高剂量组SOD活性显著升高，MDA含量显著降低，表明桑叶黄酮可显著提高衰老小鼠机体的抗氧化能力，降低衰老小鼠脂质过氧化物MDA含量，有效清除体内产生的过量自由基，具有明显的抗氧化作用，但其抗氧化机理仍然需要进一步的研究。

[1]武清芳,张秋霞.黄芪穴位注射对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤抗氧化酶和羟脯氨酸的影响[J].中国美容医学,2012,(12):28-29.

[2]石娜,苏洁,杨正标,等.白术多糖对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用[J].中国新药杂志,2014,(05):577-581 +584.

[3]高璐,王滢,饶胜其,等.葡萄籽原花青素提取物对衰老模型小鼠抗氧化作用[J].食品科学,2014,(23):253-256.

[4]陈玲玲,刘炜,陈建国,等.桑叶黄酮对糖尿病小鼠调节血糖的作用机制研究[J].中国临床药理学杂志,2010, (11):835-838.

[5]孟庆海,殷秋忆,郭静,等.4种不同桑叶提取物降血糖作用的筛选[J].中成药,2014,(06):1288-1291.

[6]朱玉霞,邹德平,刘学鹏,等.桑叶黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗影响的研究[J].四川医学,2008,(09):1114-1116.

[7]吴雯,梁凯伦,陈波,等.桑叶提取物对食源性肥胖大鼠的减肥作用及机制研究[J].中国中药杂志,2017,(09): 1757-1761.

[8]吕欢,罗明琍,方飞,等.桑叶提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性体系的优化及动力学研究[J].中药新药与临床药理,2012,(01):42-44.

[9]王珂,王瑞坡,李姣,等.桑叶黄酮对腺嘌呤诱导大鼠高尿酸血症肾损伤的防治作用[J].天然产物研究与开发,2012,(02):172-175+202.

[10]王君巧,聂少平,余强,等.黑灵芝多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节和抗氧化作用[J].食品科学,2012,(23):274-277.

[11]唐静.不同剂量川牛膝多糖对小鼠抗氧化活性的影响[D].四川农业大学,2013.

[12]刘功成.重楼多糖对衰老模型小鼠免疫功能和抗氧化能力的影响[D].四川农业大学,2015.