高效液相色谱法测定通降颗粒中虎杖苷含量

段昌令 ，王凤云 ，郑 蕊 ，唐旭东

（1．上海中医药大学·上海高校中医内科学E－研究院，上海 201203； 2．中国中医科学院西苑医院，北京 100091）

高效液相色谱法测定通降颗粒中虎杖苷含量

段昌令1，2，王凤云2，郑 蕊2，唐旭东2

（1．上海中医药大学·上海高校中医内科学E－研究院，上海 201203； 2．中国中医科学院西苑医院，北京 100091）

目的建立测定通降颗粒中虎杖苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为COSMOSILCholester柱（250mm×4．6mm，5 m ），流动相为乙腈－水（18 ∶82），检测波长为 306nm，流速为 1．0mL ／min。结果虎杖苷质量浓度在 2．20～140．6 g／mL 范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．9998），平均加样回收率为101．16%，RSD为1．74%（n＝6）。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于通降颗粒中虎杖苷的含量测定。

高效液相色谱法；通降颗粒；虎杖苷；质量控制

通降颗粒是中国中医科学院西苑医院院内制剂（批准文号：京药制字Z20100007），由苏梗、香附、枳壳、陈皮、黄连、虎杖等药组方，主要用于治疗非糜烂性胃食道反流病、反流性食管炎[1－2]。方中主药虎杖能利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛，用于治疗湿热黄疸、风湿痹痛[3]。虎杖中主要含有蒽醌、二苯乙烯苷类成分，活性广泛[4]。通降颗粒的质量标准仅有鉴别项而无含量测定方法项，本研究中结合2015年版《中国药典》和文献[5－11]建立了虎杖苷含量测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent1200型高效液相色谱仪（包括Hpchem色谱工作站、紫外可变波长检测器，美国安捷伦公司）；COSMOSILCholester柱（250mm ×4．6mm，5 μm，日本Nacalai公司）；Milli－QIntegral3型纯水机（美国密理博公司）；AE240型电子分析天平（梅特勒－托利多仪器＜上海＞有限公司）；KQ－300型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司，功率为300W，频率为40kHz）。

1．2 试药

通降颗粒（中国中医科学院西苑医院自制，批号分别为 20131001，20160201，20170201）；虎杖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为11575－200502）；乙腈、磷酸（美国Fisher公司)为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯；DaionHP－20型大孔吸附树脂（日本三菱化学株式会社）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：COSMOSILCholester柱（250mm ×4．6mm，5 μm）；流动相：乙腈－水（18 ∶82）；流速：1．0mL／min；检测波长：306nm。理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000。

2．2 溶液制备

对照品溶液：称取虎杖苷对照品7．03mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取虎杖苷溶液4mL，置100mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为虎杖苷对照品溶液。

供试品溶液：取通降颗粒细粉约0．2g，精密称定，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，密塞，称定质量，超声处理20min，放冷，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液：取不含虎杖的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取 2．2项下3种溶液各10μL，注入色谱仪，按2．1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。在此色谱条件下，对照品溶液与供试品溶液色谱主成分峰的保留时间基本一致，阴性对照无干扰，详见图1。理论板数按虎杖苷峰计应不低于3000。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取质量浓度为140．6μg／mL的虎杖苷对照品溶液1m L，置5m L容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为高浓度虎杖苷对照品溶液；再依次用70%乙醇等倍稀释制备得质量浓度分别为70．30，35．15，17．58，8．79，4．39，2．20 μg ／m L 的虎杖苷对照品溶液，按2．1项下色谱条件分别进样10μL，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得虎杖苷回归方程 Y＝42．07 X－24．81，r＝0．9998（n ＝7）。结果表明，虎杖苷质量浓度在 2．20 ～140．6μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10μL，按2．1项下色谱条件重复进样6次，测定，记录色谱图。结果虎杖苷峰面积的 RSD为0．36%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，按2．1项下色谱条件，分别于 0，5，11，16，22 h 时各进样 10 μL，记录峰面积。结果虎杖苷峰面积的 RSD为 1．30%（n＝5），表明供试品溶液在22 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为20131001），共6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果该批通降颗粒中虎杖苷的含量为 0．157%，RSD 为 1．44%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量（0．157%）的同批样品90mg共6份，分别置10m L容量瓶中，精密加入虎杖苷对照品溶液（140．6 μg／mL）各 1．0mL，依 2．2 项下方法制备供试品溶液各6份，按2．1项下色谱条件分别进样10μL，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。

表1 虎杖苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取通降颗粒3批，按2．2项下方法制备供试品溶液，按2．1项下色谱条件测定3批样品中虎杖苷的含量。结果批号分别为 20131001，20160201，20170201的样品中虎杖苷含量分别为 1．57，1．30，1．55mg ／g。

3 讨论

根据相关文献，本研究中比较了乙腈－水、乙腈－0．1%磷酸水系统测定虎杖苷的差异，采用乙腈－0．1%磷酸水系统进行分析时虎杖苷峰内有干扰色谱峰，而乙腈－水系统能去除干扰，明显改善虎杖苷色谱峰的分离。由于其他药味中的化学成分干扰虎杖苷的测定，故选择了多种型号的反相硅胶色谱柱进行比较，最后采用COSMOSILCholester柱取得了良好的分析效果。

在样品提取中，考察了甲醇、水、70%乙醇对通降颗粒中虎杖苷提取率的影响：70%乙醇＞甲醇＞水；又进一步比较了70%乙醇、50%乙醇对本品中虎杖苷的提取率影响，二者无差异；由于用50%乙醇提取虎杖苷时样品溶液难以滤过，最终确定70%乙醇为提取溶剂。由于虎杖苷稳定性较差，应采用避光、超声处理20min提取虎杖苷。

方法学考察结果表明，该方法操作简便、快速，重复性好，可作为该制剂的定量检测方法。由于通降颗粒由10味药组方，为提高、完善质量标准，确保产品质量稳定可控，今后还应建立其他药材的含量测定方法。

[1]李保双，张丽颖，彭珍婷，等．通降颗粒干预非糜烂性反流病肝胃不和证疗效观察[J]．中国中西医结合杂志，2013，33（7）：915－919．

[2]唐旭东，吴红梅，王志斌，等．通降颗粒对大鼠实验性反流性食管炎的疗效评价研究[J]．中国中西医结合杂志，2006，26（9）：818－821．

[3]国家药典委员会．中华人民共国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2015：194－195．

[4]贾玉梅，王君明，崔 瑛．基于二苯乙烯类为主要活性成分的虎杖药理作用研究进展[J]．中国实验方剂学杂志，2011，17（9）：263－269．

[5]马 ，王起文，徐国华，等．HPLC法同时测定降脂颗粒中5种成分[J]．中成药，2017，39（3）：532－535．

[6]刘 源，王爱明，陈晓风．高效液相色谱法同时测定降脂颗粒中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量[J]．中国药业，2016，25（13）：74－76．

[7]赵 萍，王 森，欧水平，等．HPLC法同时测定虎杖膏中4种成分的含量[J]．中国药房，2017，28（3）：405－407．

[8]姜 晖，李开智，王绍志，等．高效液相色谱法测定养阴降糖片 4 种成分的含量[J]．中国药业，2017，26（7）：32－36．

[9]罗宏丽，肖顺林，陈 昆．高效液相色谱法测定抑毒调肝合剂中虎杖苷含量[J]．中国药业，2016，25（20）：45－47．

[10]赵 颖，周芙琼，朱维娜，等．活血散的质量标准研究[J]．中国药房，2016，27（15）：2114－2117．

[11]崔 璐，包永睿，孟宪生，等．活血散的质量标准研究[J]．中国实验方剂学杂志，2016，22（5）：89－95．

Content Determination of Polydatin in Tongjiang G ranules by HPLC

Duan Changling1，2， Wang Fengyun2， Zheng Rui2， Tang Xudong2
(1．E－Institute of Chinese Traditional Internal Medicine，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai，China 201203； 2．Xiyuan Hospital of China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing， China 100091）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of polydatin in Tongjiang Granules．Methods The Cosmosil Cholester column （250 mm ×4．6 mm，5 μm） was adopted，the mobile phase was acetonitrile－water （18 ∶82），the detection wavelength was 306 nm，and the flow rate was 1．0 mL／min．Results The polydatin showed good linearity in the range of 2．20－140．6g／mL （r＝0．999 8），the average recovery of polydatin was 101．16% and the RSD was 1．74% （n ＝6）．Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，which can be used for the content determination of polydatin in Tongjiang Granules．

HPLC；Tongjiang Granules；polydatin；quality control

R284．1

A

1006－4931(2017)24－0023－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．007

北京市科委“十病十药”项目[Z141100002214012]。

段昌令（1975－），男，博士研究生，副研究员，研究方向为中药化学及分析，（电子信箱）changlingd2010＠163．com。

唐旭东（1963－），男，博士研究生，主任医师，博士生导师，中国中医科学院首席研究员，研究方向为中医消化内科学，（电子信箱）txdly＠ 126．com。

2017－07－10)