薄层色谱法检查藏药二十味沉香丸中士的宁的限量方法研究

格 央 贡 布

(西藏自治区藏医药研究院，西藏 拉萨 850000)

薄层色谱法检查藏药二十味沉香丸中士的宁的限量方法研究

格 央 贡 布

(西藏自治区藏医药研究院，西藏 拉萨 850000)

目的：建立二十味沉香丸中士的宁的限量检查方法。方法用薄层色谱法对该处方中的士的宁做了限量检查。结果薄层斑点清晰，重现性好，空白对照无干扰。结论该方法简单易行，可以有效控制本处方中的士的宁限量。

藏药；马钱子；士的宁；薄层色谱法；限量检查

二十味沉香丸是由沉香、丁香、肉豆蔻、藏木香、马钱子(制)等20味药材加工制成的复方制剂，为藏族经典验方，已有300多年的历史。具有调和气血，安神镇静之功效。用于偏瘫，高血压，神志紊乱，口眼歪斜，肢体麻木，失眠。原方收载于《中华人民共和国藏药标准》(1995年)中，标准中无对士的宁的限量检查，为了保证用药安全性，故对本方中的士的宁限量检查方法，做了如下研究。

1 仪器与试药

士的宁对照品(中国食品药品检定研究院，11075-200306)；二十味沉香丸、空白对照(由西藏自治区藏医院制剂室提供)；浓氨试液、三氯甲烷、硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂)。试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取细粉10g，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷50mL，浓氨试液4mL，密塞，轻轻振摇，称定重量。放置24h，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，充分振摇，滤过，全部滤液置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)振摇提取5次，每次20mL，合并硫酸提取液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，放冷，残渣加三氯甲烷2.5mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2 空白对照液的制备：取空白对照药10g，按上述方法制成空白对照液、空白加对照品溶液。

2.3 对照品溶液的制备：取士的宁对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4 方法： 照薄层色谱法(中国药典，2010年，一部附录VI B) 试验，精密吸取上述供试品溶液、空白对照液各3μL和对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)(浓氨水饱和层析缸)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点小于对照品的斑点，且颜色浅于对照品斑点。空白对照未见干扰。结果见图1。

3 方法学考察

3.1 重现性试验：取6批本品，依法检查。结果薄层色谱斑点清晰，且供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点小于对照品的斑点，且斑点颜色浅于对照品斑点。表明方法重现性良好。见图2。

3.2 专属性试验：照薄层色谱法(中国药典，2010年，一部附录VI B ) 试验。精密吸取供试品溶液、空白对照液各3μL和对照品溶液5μL，按2.4项下方法操作，检视斑点大小及颜色。结果在空白对照液色谱中，与对照品溶液色谱斑点相同位置上不出现斑点，其他斑点则与供试品溶液色谱相同，说明空白无干扰，方法专属性好。见图3。

3.3 回收试验：取空白样品10g，加入对照品溶液1mL(2.5mg/mL)，照供试品溶液制备方法制备溶液，分别精密吸取该溶液1、2、3、4、5μL以及对照品溶液5μL，依法检查。溶液色谱中，在与对照品色谱斑点相应位置上显相同颜色的斑点，且斑点颜色随点样量增加而加深。见图4。

4 讨论

4.1 马钱子为常用药材，具通络止痛，散结消肿之功效。其主要成分亦即主要毒性成分士的宁(番木鳖碱)，成人用5～10mg即可发生中毒现象，30mg可致死。本品排泄缓慢，有蓄积作用，故使用不宜过长。药典中，对其含量有限度要求，本文采用薄层色谱法对其限度进行控制，方法简单易行，对本方质量控制有较好的效果。

4.2 提取方法的选择：用碱性三氯甲烷超声提取的方法，虽操作简便，但薄层色谱图中供试品色谱斑点不清晰，受其他组分干扰明显，且不易点样。因此，参照《中国药典》中仁青芒觉[含量测定]项下的提取方法提取供试品，供试品色谱斑点清晰，未见其他成分干扰，故确定采用该提取方法。

4.3 展开系统的选择：根据文献报道，试验了5种展开系统。Ⅰ甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4:5:0.6:04)；Ⅱ乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(16.5:2.5:1)；Ⅲ 乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)，浓氨水饱和层析缸；Ⅳ乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(17:2:1)、Ⅴ环己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5:4:1)等展开系统。因乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)，浓氨水饱和层析缸展开效果最佳，选Ⅲ系统。其他展开系统分离效果尚可，但受温度影响较大，致Rf值略小。

4.4 点样量限度的确定：参考《中药大辞典》：成人用盐酸士的宁5-10mg即可发生中毒现象，确定士的宁对照品的点样量为5μL(1mg/mL)，供试品溶液的点样量3μL(4g/mL)，即相当于2日服用量与对照品斑点对比。实验结果表明，3μL供试液斑点与5μL对照品斑点比较，供试液斑点比对照品斑点小，所示本品士的宁用量在安全范围以内。

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1986:293.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部,北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]田薇，陈朝晖，等，薄层色谱法检查仁青芒觉胶囊中乌头碱、士的宁的限量[J].甘肃省化学会成立六十周年学术报告会暨二十三届年会论文集.

[4]孙桂明,史丁一,张晓燕,等.对2005年版《中国药典》一部马钱子及其制剂质量标准的几点修订建议[J].中国药品标准，2006,7(5).

格央，女，36岁，主管药师，现供职于西藏自治区藏医药研究院，主要从事藏药研究。

R291.4

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1006-6810(2017)05-0040-03

2017年1月13日收稿