民族药水杨柳根提取物对肝硬化和CHF大鼠的利尿作用研究△

肖 明 赵小超 陈柏承* 银江林 周 静

(1．广西中医药大学制药厂，广西 南宁 530022；2．广西中医药大学，广西 南宁 530200；3．广西医科大学，广西 南宁 530023)

民族药水杨柳根提取物对肝硬化和CHF大鼠的利尿作用研究△

肖 明1赵小超2陈柏承2*银江林2周 静3

(1．广西中医药大学制药厂，广西 南宁 530022；2．广西中医药大学，广西 南宁 530200；3．广西医科大学，广西 南宁 530023)

目的：探讨水杨柳根D101树脂提取物对肝硬化大鼠和充血性心衰(CHF)大鼠的利尿作用。方法水杨柳根水提液经D101大孔树脂吸附，50%乙醇洗脱，得水杨柳根D101树脂提取物(HRE)。给药和分组：随机分组，每组10只，正常对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、HRE高中低剂量组(2.7g·kg-1，1.8g·kg-1，0.9g·kg-1)。雄性SD大鼠，前7d饮用含苯巴比妥的饮用水，第8d 背部i.h 40% CCl4橄榄油溶液，剂量4 mL·kg-1，以后每4d i.h1次，剂量减半；第59d始改为每4d i.h1次,直到第107d，制得肝硬化模型大鼠；用药4周后，测定6h尿量及血清ALT、AST水平。雄性SD大鼠，i.p 3%戊巴比妥钠麻醉，剑突正下方腹部切口，打开腹腔，游离腹主动脉，用9#注射针头平行置于主动脉上，用4#手术线捆扎，然后抽走注射针头，使主动脉直径减少50%，关腹，抗感染，养至术后8w，制得CHF模型大鼠；用药4周后，测定6h尿量，以及尿中K+、Na+浓度。结果：肝硬化腹水大鼠中，与无药物干预的对照组比较，阳性药组和HRE高中剂量组能明显降低肝硬化大鼠的体重(P<0.001)，增加其6h排尿量(P<0.01或P<0.001)；HRE高中剂量组能明显降低肝硬化大鼠的ALT水平和AST水平(P<0.05或P<0.01)。CHF大鼠中，假性手术组和HRE高中剂量组的6h排尿量、尿中Na+和Cl-浓度都有显著增加(P<0.05，P<0.01或P<0.001)，但排出K+减弱(P<0.05或P<0.001)。结论水杨柳根的D101树脂提取物，其主要成分为水溶性黄酮、多糖和皂苷，对肝硬化腹水大鼠和充血性心衰大鼠有显著的利尿作用。

水杨柳；黄酮；多糖；皂苷；利尿作用

水杨柳是我国西南地区少数民族聚集的广西、云南、贵州的民间习用药材，多以根入药。水杨柳根在壮、傣、苗等民族药中，具有清热解毒、利尿的功效，用于肝炎、关节肿痛、腹痛、烫伤的治疗[1,2]。目前对杨柳根的化学成分和药理作用研究不多。化学成分研究发现，水杨柳根含有水柳皂苷、油酮酸、羽扇豆醇等物质，其中油酮酸对AGZY 83α细胞有一定的抑制作用[3]。为揭示水杨柳根利尿的物质基础，作者用D101大孔树脂制备水杨柳根提取物，并采用动物模型研究其利尿作用，结果报道如下。

1 实验材料

1.1 药物及试剂：速尿片(呋塞米片)，天津力生制药股份有限公司产品。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒均为四川迈克生物科技股份有限公司产品。AR级四氯化碳(CCl4)，广东汕头市西陇化工厂产品。

1.2 水杨柳根：2015年5月采集于广西南宁市高峰林场，经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为homonoia riparia lour的干燥根。

1.3 实验动物：SD大鼠，体重145～170 g，雄性，由广西医科大学实验动物中心提供， 实验动物生产许可证号：SCXK桂2009-0002。动物饲养于动物房，全天保持温度24±2℃，相对湿度60±5%。分笼饲养，自由摄食和饮水。动物投入实验前，经过3d的适应性饲养。

2 方法与结果

2.1 统计学方法：数据以±s 表示，应用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析，P<0.05为显著差异，P<0.01为非常显著差异。

2.2 HRE的制备：水杨柳根，晒干，打成粗粉。用水煮沸提取2次(15倍量×2h，10倍量×1h)，合并水提液，凉至室温，单层普通滤纸滤过，取滤液上D101大孔树脂柱，料液上完后用水洗柱，继用50%乙醇水溶液洗脱，将洗脱液浓缩成稠膏，90℃烘干，得水杨柳根D101树脂提取物(简称HRE)，得率2.86%，每g提取物相当于34.96g水杨柳根药材。实验时在研钵中定量加入蒸馏水研磨，配制成所需药物浓度。化学显色试验结果表明，HRE含有黄酮、多糖和皂苷类化合物。

2.3 剂量：据文献[2]，中医用水杨柳根，内服9～15g/d。因此取15g为高剂量，高剂量的1/3(5g)为低剂量，高低剂量的中值(10g)为中剂量；换算为大鼠的HRE高中低剂量分别为：2.7 g·kg-1，1.8 g·kg-1，0.9 g·kg-1。

2.4 收集大鼠尿量方法：据文献[4]，将大鼠分只饲养于代谢笼，禁食不禁水24h后，每鼠轻压下腹部使排尽尿液，i.g生理盐水，容积为30mL·kg-1，收集其一定时间段内的所有尿量；时间结束时用手轻压大鼠的下腹部使排尽尿液，一并收集，量取总体积。

2.5 对肝硬化大鼠的保肝利尿作用：按文献[5]方法：雄性SD大鼠96只,前7d为诱导期，饮用含35mg·L-1苯巴比妥的饮用水，第8d 背部i.h 40% CCl4橄榄油溶液，剂量4 mL·kg-1,以后每4d i.h1次，剂量减半；第59d始改为每4d i.h1次。i.h过程中，如鼠体重较上一次体重减少25%以上，则少i.h1次。第108d，将有明显腹水的大鼠50只，随机分为5组：对照组(等体积0.5% CMC-Na)、阳性药对照组(速尿，0.25 g·kg-1)、HRE高中低剂量组(2.7g·kg-1，1.8g·kg-1，0.9g·kg-1)。每鼠分养于代谢笼。第一次用药前，用手轻压每只大鼠的下腹部使排尽尿液，测定体重，记作W1。连续i.g用药14d。末次给药后24h，收集每鼠的6h尿量，同时再次测定体重，记作W2，计算用药前后的体重减少率%=(W1-W2)/W1×100%，同时从眼眶取血，3000RPM离心10min，取血清测定ALT、AST水平，结果见表1。

对照组是肝硬化造模成功后，没有药物干预的、用于对照的试验组。表1显示，与对照组比较，阳性药组和HRE高中剂量组能显著减少肝硬化大鼠的体重(P<0.01或P<0.001)，增加6h尿量(P<0.01或P<0.001)。HRE高中剂量组能明显降低肝硬化大鼠的血清ALT和AST水平(P<0.05或P<0.01)，但阳性药(速尿)组不能(P>0.05)。对照组和HRE小剂量组的体重呈无规律变化，有些鼠只的腹水不减反增，造成体重的增加；而有些则因消瘦而体重减少。试验过程中，因长期处于肝硬化腹水状态，鼠只有出现死亡现象。

表1 HRE对肝硬化大鼠体重、尿量及ALT、AST水平的影响

注：经方差分析，与对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

2.6 对CIF大鼠的利尿作用：参考文献方法[6]。雄性SD大鼠96只，收集2h尿量，选取尿量超过给水量40%的大鼠为尿量合格动物。取65只尿量合格动物，i.p 3%戊巴比妥钠麻醉,于剑突正下方的腹部切口，打开腹腔，钝性游离腹主动脉，用9#注射针头平行压置于主动脉上，用4#手术线捆扎，然后抽走注射针头，使主动脉直径减少约50%。关腹，缝合，用青霉素抗感染1w(10万u·d-1/只)，养至术后8w，测定并选取左心室舒张末压超过15mmHg者，为造模成功动物。取造模成功动物40只，随机分为模型对照组(等体积生理盐水)，HRE高中低剂量组(2.7g·kg-1，1.8g·kg-1，0.9g·kg-1)，每组10只。另取10只尿量合格动物组成假性手术组(等体积生理盐水)，该组只开腹游离腹主动脉，也做动脉捆扎处理，但不缩窄。各组动物连续i.g给药28d，给药容量为20 mL·kg-1。末次给药后24h，收集6h尿量，同时测定尿中K+、Na+、Cl-的浓度。结果见表2。

模型对照组是CHF造模成功，但无药物干预、用于对照的试验组。表2显示，与模型对照组比较，假性手术组和HRE高中剂量组在6h尿量、排出Na+离子和Cl-离子方面都有显著增加(P<0.05，P<0.01或P<0.001)，但排出K+离子减弱(P<0.05或P<0.001)。提示HRE可保钾排钠，促进动物水潴留状态的缓解。

表2 HRE对CHF大鼠尿量及离子浓度影响

注：经方差分析，与对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

3 讨论

肝硬化系肝细胞长期处于炎症状态并坏死，从而使肝脏中形成结缔组织，使肝脏质地变硬。肝硬化会伴随着肝功能失常，以及蛋白质、脂肪、电解质的代谢紊乱，从而导致水潴留，形成腹水。因腹水中含有大量蛋白质和电解质，因此肝硬化腹水的治疗不能简单地将腹水抽走，而是让机体对腹水进行吸收，将水以尿液的形式排放，同时回收其中的营养物质[7]。本文的动物试验结果表明，水杨柳根提取物能保护肝细胞，减少肝细胞坏死，降低ALT和AST水平；另外还能促进肝腹水的吸收，形成大量尿液排出。

CHF模型大鼠因动脉被缩窄，心排出量减少，流向肾脏的动脉血相应减少，引起肾小球滤过分数增加，进而导致Na+、Cl-潴留，K+流失[8]。本文的动物试验结果表明，水杨柳根可通过利尿促进CHF大鼠的Na+、Cl-排出，同时降低K+离子的排出量，以达到保钾排钠，缓解水潴留的作用。

水杨柳根在云南和广西少数民族中，以水煎煮，取汤口服，具有清热解毒、利尿的功效，用于肝炎、烫伤等的治疗[1,2]。D101树脂提取物在提取过程中有针对性地富集水溶性黄酮、皂苷和多糖等成分，扬弃无机盐、水溶性淀粉、单糖等无活性成分，因此显示出良好的药理活性。但具有保肝利尿的化学成分仍有待进一步研究和明确。

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StudyondiureticeffectofD101-resinextractfromtherootofHomonoiariparia

Xiao Ming1, Zhao Xiao-chao2, Chen Bocheng2**, Yin Jianglin2, Zhou Jing3

1.Pharmaceutical factory of University of Guangxi Traditional Chinese Medicine, Guangxi Nanning 530022; 2.University of Guangxi Traditional Chinese Medicine, Guangxi Nanning 530200;
3.Guangxi Medical University, Guangxi Nanning 530023)

Objective: To study the diuretic effect of HRE (short for “D101-resin extract from the root of Homonoia riparia”) on cirrhosis and CHF rats. Methods: i.h CCl4on the rat’s back for 107d to make cirrhosis model. On the other hand, opened the rat’s abdomen and strapped the abdominal aorta with 4# thread to make CHF model. The modeled rats were i.g HRE for 4 weeks, and then their 6-hour urine volume, ALT, AST and the concentration of Na+, Cl-, K+ were determinated. Results: For cirrhosis model rats, the Hi- and Mid-dose of HRE groups (2.7 g·kg-1，1.8 g·kg-1) could significantly decrease the rat’s weight, ALT and AST (P<0.05,P<0.01orP<0.001), contrarily, significantly increased the 6-hour urine volume (P<0.01 orP<0.001). For CHF model rats, the Hi- and Mid-dose of HRE groups (2.7 g·kg-1, 1.8 g·kg-1) could significantly increase the 6-hour urine volume and the concentration of Na+,Cl- (P<0.05,P<0.01orP<0.001); contrarily, significantly decrease the concentration of K+ (P<0.05 orP<0.001). Conclusion: The main components of HRE are flavonoids, polysaccharides and saponins. HRE has significant diuretic effect, and shows obviously dose-effect relationship.

Homonoia riparia(水杨柳); D101; diuretic effect

广西中药质量标准研究重点实验室开放课题(桂中重开201507)

肖明(1971-)，女，汉族，广西南宁人，主管药师，从事中药制药及检验分析工作，E-mail:2590994285@qq.com

*通讯作者：陈柏承(1989-)，男，汉族，广西北流人，助理工程师，从事中药药效筛选工作，E-mail:1002693645@qq.com

RR29

B

1006-6810(2017)06-0056-03

2017年3月29日收稿