基于紫外-可见分光光度法的黔东南不同产地太子参中总皂苷含量测定

刘光海 吴庭柱 王文春

(黔东南州中医医院，贵州 凯里 556000)

基于紫外-可见分光光度法的黔东南不同产地太子参中总皂苷含量测定

刘光海 吴庭柱 王文春

(黔东南州中医医院，贵州 凯里 556000)

目的：测定黔东南不同产地太子参药材中总皂苷的含量，为分析黔东南太子参药材质量提供参考。方法以人参皂苷Rb1为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定分析。结果黔东南不同产地9个药材样品中总皂苷含量在0.20%～0.70%，平均加样回收率为97.97%，RSD为1.35%。黔东南不同产地太子参药材中总皂苷的含量差异不太大，其中施秉县牛大场太子参中总皂苷含量最高。结论此方法准确、可行，可作为太子参药材的质量分析方法。

太子参;总皂苷;紫外-可见分光光度法

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，太子参味甘、微苦，性平。归脾、肺经，具有益气健脾，生津润肺之功效，用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗口渴等病症[1]。据文献报道，太子参中皂苷类成分具有抗疲劳、抗氧化、抗缺氧、抗衰老等作用，其应用在肝炎、糖尿病以及冠心病等疾病的临床治疗中取得了新的进展[2]，太子参具有增强免疫力的作用既有理论支撑也有实验基础[3]。黔东南地区的侗族称太子参为“门辰细”，苗族叫做“娃儿参”，苗医侗医用于治疗脾虚、纳差、体质虚弱病症的药物，在苗族侗族民间常用作滋补品与肉类食物共同炖煮食用，作为强身健体的食药，黔东南自治州亦为太子参栽种地区；但未见黔东南州太子参质量的相关对比研究报道，州不同产地的太子参皂苷的含量可能具有差异性；据文献报道，皂苷类化合物的提取一般的提取方法通常有回流提取法、索式提取法、超声提取法等，前2种提取方法较为繁琐，且超声提取提取法样品的吸收度与前2种方法差别不大，亦具有简单、快捷的特点[4]。因此，以人参皂苷Rb1为指标，采用紫外分光光度法对黔东南州太子参中总皂苷进行含量测定以确保药材的质量和初步探索其适宜栽种地区具有非常重要的现实意义，同时，为全面评价太子参药材质量提供参考材料。

1 仪器与材料

1.1 仪器:紫外分光光度计(型号：GBC Cintra 20，厂家：澳大利亚照生公司)，台式超声波清洗器(型号：科导SK8210HP，厂家：上海科导超声仪器有限公司)，十万分之一电子天平(型号：Sartorius，厂家：德国赛多利斯)，量筒，移液管，洗耳球，烧杯，玻棒等。

1.2 材料:人参皂苷Rb1对照品(批号：150312-201502，中国药品生物制品检定所)；浓硫酸(批号：20130531，厂家：国药集团化学试剂有限公司)、甲醇(批号：20130101，厂家：重庆川东化工(集团)有限公司)、乙醇(批号：20130101，厂家：重庆川东化工(集团)有限公司)、冰醋酸(批号：20120815，厂家：四川西陇化工有限公司)、无水乙醇(批号：20130316，重庆川东化工(集团)有限公司)、香草醛(批号：791081，厂家：新华香料厂)等试剂均为分析纯；太子参采自黔东南州麻江谷洞、凯里炉山、施秉县牛大场、黄平县旧州、黎平县大稼、榕江县乐里、三穗款场、从江加鸠、天柱邦洞9个地方太子参药材样品，均经鉴定为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制:精密称取人参皂苷Rb1对照品1.2mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.12mg人参皂苷Rb1的对照品溶液。

2.2 样品溶液的制备:取产自凯里炉山的太子参样品粉末约0.2 g(过药典七号筛)，精密称定，加入无水乙醇30mL，超声提取120min，滤过，取续滤液5mL于蒸发皿中，水浴挥干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液以备用。

2.3 显色方法及测定波长的选择:精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液0.5mL至具塞试管中，水浴挥干溶剂，以空白试剂作为对照，加入新配制的8%香草醛-乙醇溶液0.2 mL，摇匀，加入60%硫酸溶液5mL，混匀后于60℃水浴中保温20min，取出，冷却，于200～800 nm波长范围内进行扫描,选取最大吸收波长560 nm为测定波长，见图1。

2.4 标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6 mL，分别置于10mL具塞试管中，随行试剂做空白对照，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在560 nm处测定吸光度，以对照品含量(mg)(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标，绘制标准曲线(见图2)，并计算回归方程得：Y=0.0089X+0.0470，r=0.9992。结果表明人参皂苷Rb1对照品浓度在6-96μg·mL-1范围内，结果见表1，图2。

表1 线性关系考察表

浓度(μg·mL-1)61224487296吸光度0．0960．1590．2640．4660．7050．899

2.5 精密度实验：精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液0.5mL于具塞试管中，平行6份，参照 “2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在560nm处测定吸光度，检测吸光度结果分别为0.312，0.310，0.309，0.315，0.312，0.314，平均为0.312 ，RSD为0.73%，表明精密度较好，见表2。

表2 精密度考察表

2.6 稳定性实验:精密吸样品溶液0.5ml于具塞试管中，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，显色后不同时间测定其吸光度变化，放置15min、30min、45min、60min、90min、120min、150 min后，分别测定其吸光度，测定结果分别为0.258、0.267、 0.265、0.270、0.261 、0.269，平均0.265，RSD为1.77%，结果表明此显色反应在15～150 min内稳定，见表3。

表3 稳定性考察表

2.7 重复性实验:取同一批凯里炉山太子参样品，精密称取6份样品0.200g、0.202g、0.199g、0.201g、0.199g、0.202g，照样品溶液制备方法制备,精密吸取各样品溶液0.5mL，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在560 nm处测定吸光度，测定结果分别为0.260、 0.259、0.264、 0.270、0.269、 0.265，平均值0.266，RSD为1.70%。结果表明该方法重复性较好，见表4。

表4 重复性考察表

2.8 加样回收实验:取已知含量的凯里炉山太子参样品精密称0.099g、0.102g、0.105g、0.103g、0.109g、0.101g、0.103g、0.100g、0.108g,分别加入上诉配制的人参皂苷Rb1对照品溶液：6.25mL人参皂苷Rb1对照品，照供试品溶液制备方法制备加样回收供试品溶液，精密吸取各样品溶液适量，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在560nm处测定吸光度。加样回收率为97.97% ，RSD为1.35%，见表5。

表5 加样回收实验结果表

2.9 样品中总皂苷的含量测定:精密称取各地样品粉末0.200g左右照样品溶液的制备方法制备，平行6份，吸取各样品溶液适量于具塞磨口试管中, 参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，随行试剂做空白,在560 nm处测定样品液的吸光度值，计算不同产地太子参样品中总皂苷的含量。贵州省不同产地太子参药材总皂苷含量测定结果见表6。

表6 黔东南不同地方太子参总皂苷含量测定结果表

3 讨论

经查阅《中华人民共和国药典》和参考文献，太子参总皂苷含量测定中缺少从太子参中分离得到的对照品，所以考虑选择化学结构相近的人参皂苷Rb1为对照品,皂苷类与香草醛-硫酸反应在可见区均能获得稳定的特征吸收峰。

实验采用香草醛-硫酸显色法来测定太子参中总皂苷含量，在显色反应过程中，吸光度会随着水浴温度和加热时间的变化而变化，因此通过考察不同的显色温度(50，55，60，65，70℃)、显色时间(5，10，15，20，25，30 min)，确定水浴温度60℃，加热显色时间20 min。采用此法来测定太子参中总皂苷的含量，操作方法简单、稳定、结果可靠，可以作为太子参总皂苷的质量控制方法。

黔东南9个产地样品中太子参总皂苷含量在0.20%～0.70%，我州施秉县牛大场的太子参总皂苷含量最高0.70%，而黎平大稼太子参总皂苷含量为0.2%；施秉、黄平、凯里以及麻江一带太子参总皂苷含量总体较高。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].中国医药科技出版社,2015,68.

[2]刘训红,韩乐,王丽娟,等.太子参药材质量标准研究[J].中国药房,2010,19(21):1969.

[3]陈耀金,陈建洪,刘伟招,等.太子参胶囊增强免疫力作用实验研究[J].中医药临床杂志,2015,27(8):1172-1174.

[4]陈蔚东,刘知远,蔡小枫,等.太子参总皂苷含量测定方法的研究[J].海峡药 学,2014,26(6):78.

DeterminationoftheTotalSaponinContentinRadixPseudostellariaebyUVspectrophotometryfromQiandongnandifferentRegions

Liu Guang-hai Wu ting-zhu Wangwen-chun

Qian dong nan prefecture hospital of Chinese Medicine, Guizhou Kaili 556000

Objective To determine the content of total saponins in different areas of Qiandongnan county seat in Radix Pseudostellariae, providing the reference for the analysis of the quality of Radix pseudostellariae. Methods: with ginseng saponin Rb1 as control, the total saponins was determined by UV spectrophotometry. Results: the content of total saponins in Guizhou Province 9 samples from different habitats in 0.20% ～ 0.70%, the range of the spotting recovery rate was 97.97%,RSD was 1.35%. Differences in the content of total saponins in Radix Pseudostellariae from different habitats was small, and the content of total saponins in Qiandongnan Shibing County cattle big is supreme. Conclusion: this method is accurate and reliable, and can be used as the quality of Radix Pseudostellariae analysis method.

Radix Pseudostellariae，total saponins，UV spectrophotometry

R29

B

1006-6810(2017)06-0045-03

2017年月日收稿