不同灭菌方法对蒙药让·阿嘎日-8灭菌效果及目标成分的影响

杨乌日娜 萨日盖 乌仁图雅 贺喜格达来

(内蒙古自治区鄂尔多斯市蒙医研究所,内蒙古 鄂尔多斯 017000)

不同灭菌方法对蒙药让·阿嘎日-8灭菌效果及目标成分的影响

杨乌日娜 萨日盖 乌仁图雅 贺喜格达来

(内蒙古自治区鄂尔多斯市蒙医研究所,内蒙古 鄂尔多斯 017000)

目的：考察4种灭菌方法对于让·阿嘎日-8药粉灭菌的效果以及灭菌过程中对目标成分没食子酸含量的影响。方法分别用钴60-γ射线、高压、紫外、微波4种灭菌方法对让·阿嘎日-8药粉进行灭菌处理，检测灭菌前后药粉的微生物限度指标；用高效液相法测定灭菌后广枣中没食子酸含量。结果微生物检测结果表明钴60-γ射线、高压灭菌效果较好，紫外、微波灭菌效果不太稳定。目标成分检测结果表明钴60-γ射线、高压灭菌和紫外对没食子酸影响较小，微波灭菌对没食子酸影响较大。结论综合灭菌效果和对目标成分的影响，让·阿嘎日-8药粉灭菌方法可选用钴60-γ射线或高压灭菌。

没食子酸;高效液相;微生物

当前，蒙药制剂生产质量控制已成为实现蒙药现代化的瓶颈问题，而微生物限度指标的控制又是确保蒙药制剂质量的关键之一。蒙药让·阿嘎日-8是由沉香，广枣，肉豆蔻，北沙参等八味药组成的制剂。气香，味苦，微酸。具有清肺心之“赫伊”，止咳等作用。用于胸肋闷痛，心悸气短，咳嗽，前胸后背刺痛[1-2]。

本文选用蒙药让·阿嘎日-8为研究对象，对其进行钴60-γ射线、高压、紫外、微波4种不同方法的灭菌处理，考察不同灭菌方法对细菌和霉菌的灭菌效果；选择广枣中的没食子酸为目标成分，测定其在灭菌后制剂中的含量。现将研究结果报道如下。

1 材料

1.1 仪器：L6-P6高效液相色谱仪，DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥，HPX-9082MBEX型数显电热培养箱，LDZX-75KBS型立式高压灭菌锅，紫外线消毒器，HY-2A型振荡器，JJ-CJ-IFD型洁净工作台，SPX-150B-Z型生化培养箱，Galanz微波炉。

1.2 试药：没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110831-201204)，让·阿嘎日-8散剂(鄂尔多斯蒙医研究所蒙药实验室配制)，玫瑰红钠琼脂培养基(02-087)，营养琼脂培养基(20150701)，乳糖胆盐发酵培养基(02-007)，蛋白胨(01-001)，氯化钠、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，甲醇，三乙胺，磷酸等均为分析纯。

2.2 微生物检查：取灭菌后的让·阿嘎日-8药粉参照《中华人民共和国药典》2010年版附录XIII C微生物检查法[3]。即环境洁净度万级以下的局部洁净度百级的单向流空气区域内进行。检查过程严格遵守了无菌操作，防止了二次污染。

本实验检查法中细菌及控制菌培养温度为35℃；霉菌培养温度为27℃。检验量即供试品的检验量为10g。

2 方法与结果

2.1 灭菌处理：分别称取8味药材，粉碎后过100目筛，按表1所列灭菌设备及主要工艺参数进行处理，得灭菌药粉。

表1 灭菌设备及主要参数

供试品检查：本法使用平皿法按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌数的测定。按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1:10稀释剂的供试液。

平皿法：根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1mL，置直径90mn的无菌平皿中，注入15～20mL湿度不超过45℃的熔化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

阴性对照试验：取试验用的稀释液1mL，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌长。

培养和计数：细菌培养3d、霉菌培养5d，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级2个平板的菌数平均数不小于15，则2个平板的菌落数不能相差1倍或以上。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌计数。

菌数报告规则：细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告(取2位有效数字)的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1mL或10cm2供试品中所含的菌数。

从图1、2可以看出，对于细菌的灭菌效果强弱依次是钴60-γ射线(Go-60)>高压>微波>紫外。对于霉菌的灭菌效果强弱依次是钴60-γ射线(Go-60)>高压>微波>紫外。

2.3 实验结果：见图1，图2。

表2 4种灭菌法的细菌和霉菌限度检查结果

方剂名称灭菌法微生物限度合格与否Go-60灭菌--紫外灭菌++让·阿嘎日-8高压灭菌--微波灭菌++未灭菌++

注：-表示检查项合格项； +表示检查不合格项。

2.4 对目标成分的影响

2.4.1 色谱条件： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长:273 nm；流动相:乙腈-0.1%三乙胺 0.3%磷酸溶液(1：99)；流速:1mL/min；柱温:25 ℃。进样量：20μL。外标法。

2.4.2 溶液的配制：对照品溶液的制备：精密称取一定量的没食子酸，用50%的甲醇配制成30μg/mL没食子酸对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取让·阿嘎日-8药粉5g置广口瓶，加50%的甲醇25mL，称其重量，超声30min，再称重量，将减少的部分用50%的甲醇补足，摇匀，抽滤，取继滤液即可。

阴性对照品溶液的制备：精密称取没有加广枣的让·阿嘎日-8药粉5g置广口瓶，按供试品溶液的制备方法制备。

2.4.3 专属性实验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液注入色谱仪，按2.4.1 项下色谱条件进样，结果见图3，4，5。

由图可见供试品溶液在对照品溶液出特征峰的相应时间段里出峰而阴性对照溶液不出峰，表明其专属性良好。

3 样品含量测定

取不同方法灭菌后的让·阿嘎日-8药粉，按照2.4.1项下色谱条件进行测定，色谱图见图6～9。结果，钴60-γ射线、高压、紫外、微波4种方法灭菌后的让·阿嘎日-8目标成分含量分别为0.0053%，0.0055%，0.0043%，0.0002%。由此可见，各灭菌方法对于目标成分的影响大小依次为高压>钴60-γ射线>紫外>微波。

4 讨论

钴60-γ射线(一定剂量)辐射蒙药，灭菌效果好、效率高。但其费用高，增加了成品药的成本。我院制剂室每年药物灭菌达15吨，每年就灭菌一项要用去约10多万的费用。从经济效益上看是不够理想的。除此用钴60-γ射线灭菌能否对药品产生放射性物质的污染，目前尚不清楚。本次实验初步探索效果好、成本低、毒性残留物少的灭菌方法，实验结果表明，高压灭菌法是较为理想的灭菌方法。但在实际应用中多少存在着局限性，因此有待进一步深入研究。

[1]巴嘎那等.蒙药方剂学[M].赤峰：内蒙古科学技术出版社,1984, 81-82

[2]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准[S].赤峰：内蒙古科学技术出版社,1987,279

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).[S].北京：中国医药科技出版社,2010,附录79-85.

R291.2

B

1006-6810(2017)06-0037-03

2017年3月10日收稿