子痫前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平变化及维生素D干预效果的研究

邱海凡 王荣跃 邱笑飞 王繁

子痫前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平变化及维生素D干预效果的研究

邱海凡 王荣跃 邱笑飞 王繁

目的探讨血清25-羟基维生素D（25-OH-VD）水平、胎盘绒毛膜组织中维生素D受体（VDR）蛋白表达水平与子痫前期的关系，并观察维生素D的干预效果。方法选取200例剖宫产终止妊娠的孕妇为研究对象，其中无妊娠期并发症的正常晚期孕妇80例（对照组），子痫前期孕妇120例（观察组）；观察组又随机分为观察组A（不干预）与观察组B（维生素D干预，诊断为子痫前期后即开始服用维生素D滴剂，600IU/d），各60例。观察并比较3组孕妇血清25-OH-VD水平，胎盘绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平，以及观察组A与B的子痫前期分层情况。结果3组孕妇妊娠终止时的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周时的水平（均P＜0.05）；妊娠20周时，对照组血清25-OH-VD水平高于观察组A及B（均P＜0.05），观察组A与B比较差异无统计学意义（P＞0.05）；妊娠终止时，观察组B、对照组血清25-OH-VD水平均高于观察组A（均P＜0.05），对照组与观察组B比较差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组B、对照组绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平均高于观察组A（均P＜0.05），对照组与观察组B比较差异无统计学意义（P＞0.05）。在妊娠终止时，观察组B进展为重度子痫前期的发生率明显低于观察组A（P＜0.05）。结论补充维生素D有助于提高子痫前期孕妇血清25-OH-VD水平，上调绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平，从而减少子痫的发生。

25-羟基维生素D维生素D受体子痫前期

子痫前期是妊娠期特有的疾病，发病率较高，国外报道发病率为7%～12%，我国报道为9.4%。子痫前期是导致母婴死亡的主要原因[1]，目前尚未完全阐明其病因及发病机制，亦无明确有效的治疗方法。维生素D在钙磷代谢、骨的矿物化、免疫功能、细胞增殖和疾病预防中具有重要作用。Hyppnen等[2]研究发现在妊娠早期，适当补充维生素D的孕妇发生子痫前期的概率较低，而具体机制需要进一步研究证实。那么，维生素D是否可作为一种便宜、安全、有效的药物来预防子痫前期呢？笔者收集120例子痫前期孕产妇的临床资料，探究其血清中25-羟基维生素D（25-OH-VD）水平、胎盘绒毛膜组织中维生素D受体（VDR）蛋白表达水平与子痫前期的关系，并观察维生素D的干预效果。

1 对象和方法

1.1 对象选择2015年1月至2017年6月在本院产科行剖宫产终止妊娠的200例孕产妇为研究对象，其中子痫前期孕产妇120例（观察组），无妊娠期并发症的正常晚期孕产妇80例（对照组）。观察组随机分为观察组A（不干预）与观察组B[干预，即诊断为子痫前期开始服用维生素D滴剂（600IU/滴，100滴/瓶，加拿大Ddrops公司生产），600IU/d]，各60例。观察组A、观察组B与对照组的年龄、妊娠周数、妊娠次数、分娩次数、BMI等方面比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。所有孕产妇签署知情同意书，且本研究经医院伦理委员会批准。子痫前期的诊断标准：孕20周后出现血压≥140/90mmHg，尿蛋白（+～++++），轻～重度水肿[参照丰有吉主编的8年制《妇产科学》（第2版）]。排除双胎妊娠，有慢性高血压、心血管疾病、肾病、糖尿病及甲状腺疾病等内分泌异常，自身免疫性疾病，孕期内患过感染性疾病的孕产妇。临床试验过程中，若孕产妇不能坚持本次研究，或出现严重不良反应、病情不稳定，或治疗过程中同时采取其他治疗方法，则退出试验。

表1 3组的临床资料比较

1.2 方法

1.2.1 标本采集在妊娠20周、妊娠终止时采集孕产妇晨起肘静脉血5ml（空腹10～12h）；离心，取上清液，存放于-20℃冰箱待测。收集孕产妇2cm×2cm×2cm的胎盘组织，用灭菌0.9%氯化钠溶液冲洗干净，固定于4%的多聚甲醛溶液中24h，石蜡包埋后用于免疫组化检测。

1.2.2 血清25-OH-VD水平检测采用电化学发光免疫分析法测定血清25-OH-VD水平，严格按照瑞士罗氏CSE170分析仪及配套试剂盒说明书进行操作。

1.2.3 胎盘绒毛膜组织中VDR蛋白检测采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法检测绒毛膜组织中VDR蛋白，严格按照SP免疫组化试剂盒50preps（中国上海研卉生物科技有限公司，批号：95-9641）说明书进行操作。结果判断：细胞质内棕黄色颗粒即VDR蛋白表达。每例随机选取10个高倍视野（×400），使用Image-Pro-Plus系统测定表达VDR蛋白细胞的面积积分吸光度（IA）值，计算其平均数；再根据阳性染色细胞占细胞的百分比来计算阳性指数，即VDR蛋白表达水平。阳性指数=IA平均数×阳性细胞百分比×100。

1.2.4 观察子痫前期进展在妊娠终止时，统计观察组A及B孕产妇进展为重度子痫前期的例数。依据人民卫生出版社《妇产科学》第8版重度子痫前期的诊断标准，即子痫前期患者出现下述任一不良情况可诊断为重度子痫前期：（1）血压持续升高：收缩压≥160mmHg和（或）舒张压≥110mmHg；（2）24h蛋白尿≥5.0g或随机蛋白尿（+++）及以上；（3）持续头痛、视觉障碍或其他脑神经症状；（4）持续上腹部疼痛；（5）肝功能异常，如血清ALT或AST升高、微血管病性溶血-乳酸脱氢酶升高；（6）肾功能异常，即少尿或血清肌酐＞106μmol/L；（7）低蛋白血症伴胸腔积液或腹腔积液；（8）PLT呈持续性下降且＜100×109/L；（9）心力衰竭、肺水肿；（10）胎儿生长受限或羊水过少；（11）早发型子痫前期。

1.3 统计学处理应用SPSS 15.0统计软件。计量资料表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；不同妊娠期比较采用配对样本t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组孕产妇血清25-OH-VD水平比较3组孕产妇妊娠终止时的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。妊娠20周和妊娠终止时，3组孕产妇血清25-OH-VD水平比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；妊娠20周时，对照组高于观察组A及B（均P＜0.05），观察组A与B比较差异无统计学意义（P＞0.05）；妊娠终止时，观察组B、对照组均高于观察组A（均P＜0.05），对照组与观察组B比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 3组孕产妇不同妊娠期的血清25-OH-VD水平比较（ng/ml）

2.2 3组孕产妇胎盘绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平比较3组孕产妇胎盘绒毛膜组织中均有VDR蛋白表达；在绒毛滋养层细胞质中，呈棕黄色染色，见图1。对照组、观察组A、观察组B孕产妇绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平分别为0.37±0.14、0.20±0.09、0.34±0.15，3组比较差异有统计学意义（F=2.88，P＜0.05）；其中观察组B、对照组均高于观察组A（均P＜0.05），对照组与观察组B比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 VDR在3组孕产妇绒毛滋养层细胞中的表达（SP免疫组化法，×400）

2.3 观察组A与B进展为重度子痫前期的发生率比较在妊娠终止时，观察组B进展为重度子痫前期的发生率为15.0%（9/60），明显低于观察组A的36.7%（22/60），差异有统计学意义（χ2=7.350，P＜0.05）。

3 讨论

维生素D是一类具有生物活性的脂溶性维生素，属固醇类衍生物，其主要的生理功能是调节体内钙、磷代谢并维持血浆钙、磷水平稳定，参与牙齿和骨骼的正常生长发育。人体血液循环中维生素D的主要存在形式为血清25-OH-VD，常被作为评价体内维生素D营养状况的指标。25-OH-VD在肾内1α-羟化酶的作用下转化成维生素D的活性形式1，25-二羟基维生素D，与类固醇激素相似，与细胞核内的VDR结合后，对靶基因的转录和翻译进行调控，进而实现其生物学功能[3]。研究表明维生素D参与了母婴葡萄糖代谢、中枢神经系统新陈代谢、胎儿心脏形成及生殖系统发育；因此，维生素D不足可能导致母体糖代谢异常、妊娠期糖尿病、子痫前期及细菌性阴道病等[4]。

本研究发现子痫前期孕产妇在妊娠20周、妊娠终止时，血清25-OH-VD水平均较正常孕妇低，与周俐等[5]研究结果一致。而补充维生素D后，子痫前期孕产妇在妊娠终止时的血清25-OH-VD水平可恢复至正常水平，此时胎盘绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平也与对照组接近；故推测维生素D对VDR呈一种向上的调节作用。以往研究同样表明1，25-二羟基维生素D3对VDR的调节作用主要呈一种向上的调节作用[6]。此外，给予维生素D干预治疗后，子痫前期分层明显改善。以上结果提示维生素D可以阻止子痫前期的进展，该作用机制考虑如下：（1）Tregs免疫缺陷导致滋养细胞侵袭功能障碍，使胎盘衍生血管收缩因子释放，从而导致孕妇出现高血压、蛋白尿[7]；（2）血管和心脏上VDR对心脏具有保护作用，骨化三醇通过调节肾素-血管紧张素-醛固酮系统影响内皮细胞和血管平滑肌细胞功能、控制炎症反应，从而影响血压调节[8]；（3）骨化三醇在免疫耐受及恢复、维持免疫稳态中具有重要作用。免疫细胞上VDR表达调节雌激素活化及分解代谢的关键酶，因此其有效性和可用性受到免疫细胞的调节。另外，骨化三醇能够上调Tregs的免疫应答并下调促炎症反应，影响母亲的免疫耐受，从而降低子痫前期的发生风险[9]；（4）维生素D能增加毛细血管形成，促进补体嗜酸细胞趋化，从而减少子痫前期相关因素的负面效应[10]；（5）维生素D通过拮抗胎儿内皮集落形成细胞的数量与功能，在子痫前期病程中起到一定保护作用[11]。

综上所述，补充维生素D有助于提高子痫前期孕产妇血清25-OH-VD水平，上调绒毛膜组织中VDR蛋白表达水平，从而减少子痫的发生，降低发生胎盘早剥及产后出血的风险，降低了母婴死亡率。本研究为早期应用维生素D预防子痫前期提供了理论依据。

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Relationship of serum 25-hydroxy-vitamin D level and vitamin D receptor expression in placenta with preeclampsi a and intervention effect of vitamin D

QIU Haifan,WANG Rongyue,QIU Xiaofei,et al.
Department of Obstetrics and Gynecology,the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027,China

Objective To investigate serum levels of 25-hydroxy-vitamin D(25-OH-VD)and expression of vitamin D receptor(VDR)protein in placenta chorion tissue of patients with preeclampsia,and the intervention effect of vitamin D.Methods Two hundred puerperants with cesarean section were enrolled in the study,including 80 cases of normal pregnancy(group C)and 120 cases with preeclampsia(the study group).The study group was further divided into two groups with 60 cases in each,group A had no vitamin D intervention and group B

vitamin D drops 600IU/d after the diagnosis of preeclampsia.Serum 25-OH-VD levels and the expression of VDR protein in placental chorion tissue were determined and compared among 3 groups.ResultsSerum 25-OH-VD levels at the termination of pregnancy were higher than those at the 20 week of gestation in all three groups(P＜0.05).At 20 weeks after pregnancy,the serum 25-OH-VD level of group C was higher than that of groups A and B(all P＜0.05),there was no significant difference between groups A and B(P＞0.05).At the termination of pregnancy,the serum 25-OH-VD levels of groups B and C were higher than those of group A(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The expression level of VDR protein in the chorion tissue of groups B and C was higher than that of group A at the termination of pregnancy(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The incidence of severe preeclampsia in group B was significantly lower than that in group A(P＜0.05).ConclusionVitamin D supplementation may improve serum 25-OH-VD levels in preeclampsia women,up-regulate VDR protein expression in chorion tissue,and reduce the occurrence of eclampsia.

25-hydroxy vitamin DVitamin Dreceptor Preeclampsia

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.23.2017-1916

温州市科技局计划项目（Y20160345）

325027温州医科大学附属第二医院妇产科

王繁，E-mail：wangfan75@hotmail.com

2017-08-09）

（本文编辑：陈丹）