HPLC—ELSD法测定罗红霉素胶囊的含量

钱婉霞

摘 要：本文用高效液相法对罗红霉素胶囊中的罗红霉素的进行了含量测定。固定相为：依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）为流动相，漂移管温度为80摄氏度；载气流速为1.5ml/min；罗红霉素在20～400μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。罗红霉素的平均回收率为99.1%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量测定。

关键词：罗红霉素胶囊；罗红霉素；测定

罗红霉素是新一代大环内酯类抗生素，主要作用于革兰氏阳性菌、厌氧菌、衣原体和支原体等。罗红霉素体外抗菌作用与红霉素相类似，体内抗菌作用比红霉素强1-4倍。罗红霉素对肺炎衣原体、肺炎支原体、溶脲脲原体的抗微生物作用与红霉素相仿或略强。罗红霉素适用于沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎；化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炎、慢性支气管炎急性发作，肺炎支原体或肺炎衣原体所致的肺炎；敏感细菌引起的皮肤软组织感染。本文用高效液相法对罗红霉素胶囊中的罗红霉素的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：10L-50L大型旋转蒸发仪（北京赛美思仪器设备有限公司）；ZAM3000ELSD蒸发光散射检测器（北京温分分析仪器技术开发公司）；JΜLABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）；HN-6AL功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司）；XSYF-D 实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；BT赛多利斯电子天平（北京五洲东方科技发展有限公司）。

1.2 试药：乙腈（杭州汇普化工仪器有限公司）、甲醇（杭州汇普化工仪器有限公司）、冰乙酸（天津市顺隆达科技有限公司）、三乙胺（杭州汇普化工仪器有限公司）、乙酸（天津市顺隆达科技有限公司）、磷酸（天津市顺隆达科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u）；以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）为流动相，漂移管温度为80摄氏度；载气流速为1.5ml/min。理论板数按罗红霉素峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取罗红霉素胶囊内容物适量，精密称定至容量瓶内，加适量流动相超声20分钟，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取罗红霉素对照品约5mg，置10毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含罗红霉素50μg）。

2.4 标准曲线的制备

制备浓度为20μg·mL-1、40μg·mL-1、80μg·mL-1、160μg·mL-1、240μg·mL-1、320μg·mL-1、400μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值的对数A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，罗红霉素对照品在20～400μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取罗红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.69%。结果表明，本实验精密度良好。

2.6 重现性试验

分别称取同批罗红霉素胶囊样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.73%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，0.5小时，1.0小时，1.5小时，2.0小时，4.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品罗红霉素峰面积积分值的RSD为0.82%。结果表明罗红霉素在4.0小时内稳定。

2.8 阴性干扰试验

按处方除罗红霉素的原辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与罗红霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与罗红霉素相同保留时间处不存在吸收峰，表明选定的条件测定罗红霉素无干扰，具有较强的专属性。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的罗红霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.1%，RSD为0.86%。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定罗红霉素胶囊三批样品中罗红霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.5%、99.3%、100.6%。

3 讨论

分别考察甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（600：400：0.2：0.1），水-甲醇-乙腈-冰醋酸（10：60：30：0.1），甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定罗红霉素胶囊含量的方法。罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量应为标示量的95-105%。

参考文献

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