辣椒油中罗丹明B的测定能力验证

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(1.重庆出入境检验检疫局技术中心,重庆 600020;2.重庆市市政环卫监测中心,重庆 401121;3.四川省食品药品检验检测院,四川成都 611731)

辣椒油中罗丹明B的测定能力验证

郑小玲1,邹芸2,杨昌林3,唐柏彬1,张舸1,李建平1

(1.重庆出入境检验检疫局技术中心,重庆 600020;2.重庆市市政环卫监测中心,重庆 401121;3.四川省食品药品检验检测院,四川成都 611731)

为了解我国食品检测实验室对罗丹明B检测的整体水平,同时验证和加强相关实验室的检测能力,国家认证认可监督管理委员会(CNCA)组织,重庆出入境检验检疫局技术中心具体协调与实施辣椒油中罗丹明B测定能力验证工作。遵循GB/T 27043-2012(等同ISO/IEC导则17043:2010)、GB/T 28043-2011、CNAS-GL02:2014、CNAS-GL03:2006等相关规定,实施和评价此次能力验证。采用F检验方法进行样品的均匀性检验,采用t检验方法进行稳定性检验,采用Z比分数评价参与实验室的测试结果。134家实验室参加能力验证测试,其中124家实验室结果为满意,满意率为92.5%,8家实验结果为不满意,1家实验室由于设备故障中途退出本次能力验证。参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测罗丹明B,我国相关检测实验室具有较高水平。

罗丹明B，辣椒油，食品安全，测定

罗丹明B,也称玫瑰红B,是一种碱性荧光染料,具有色泽红艳、稳定性强等特点,主要用于造纸、织物、皮革、瓷器染色[1-3]。在我国,因为罗丹明B颜色鲜亮,价格便宜,不法商贩违法在调味品中使用罗丹明B以达到增加食品外观鲜艳度的效果。有关资料研究[4-12]表明,罗丹明B会引致老鼠皮下组织生肉瘤,半数致死量(大鼠,经口)500 mg/kg。国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)化学品致癌风险评价表明:摄取、吸入以及皮肤接触罗丹明B,均会造成急性或者慢性中毒伤害。2008年,罗丹明B已被我国列入第一批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》,欧美、日本等国家和地区都不允许在食品中使用。2012年至2016年,国内多个省市在调料品中检出罗丹明B约百余批次。国内已有的检测食品中罗丹明B的标准方法,最常用的方法为《进出口食品中罗丹明B的检测方法》(SN/T 2430-2010)。

为了保障人民的食品安全,提高食品安全监管部门的检测能力,更好地进行食品监管,由国家认证认可监督管理委员会(CNCA)组织,重庆出入境检验检疫局技术中心具体协调与实施。遵循GB/T 27043-2012、GB/T 28043-2011(等同ISO/IEC导则17043:2010)、CNAS-GL02:2014、CNAS-GL03:2006等相关规定,实施和评价此次能力验证。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

参加验证的实验室 取得国家认监委颁发的检验检测机构资质认定证书,且相关检验检测项目(参数或者方法标准)已经取得资质认定的检验检测机构必须参加。鼓励由各省级质量技术监督局(市场监督管理部门)颁发资质认定证书的检验检测机构,以及企业、高校等其他检验检测机构自愿参加。

本次能力验证计划参加实验室共134家,来自30个省、自治区、直辖市,分布范围广泛。广东有13家实验室参加,黑龙江有10家实验室参加,江苏、上海、河南、北京、山东、四川、福建、河北和浙江等均有5家及以上实验室参加此次能力验证。检验检疫系统实验室占45.8%,质监系统实验室占27.8%,疾控、农业及食药系统实验室各占5.3%,社会和企业实验室占10.5%。

Sartorius BS224S电子天平 德国Sartorius公司;MX-F多功能旋涡混匀器 美国SCILOGEX公司;Agilent 1260高效液相色谱仪 美国Agilent公司;Auto Clean A凝胶色谱仪 美国莱伯泰科公司;甲醇(色谱纯)、甲酸(色谱纯)、乙酸乙酯(色谱纯)、环己烷(色谱纯) 美国Fisher公司;罗丹明B标准品(Rhodamine B,CAS号81-88-9,C28H31ClN2O3,纯度99.8%) 德国Dr. Ehrenstorfer公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品制备 按照CNAS-GL03:2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》[13]的规定,采用单因子方差分析法进行样品均匀性检验。检测筛选不含罗丹明B的辣椒油作为空白样品基质。然后用乙酸乙酯配制1000 mg/L的罗丹明B 标准溶液,用空白样品基质逐级稀释罗丹明B标准溶液,经均质、振摇、搅拌混匀制备成罗丹明B浓度为0.05～0.70 mg/kg的A(0.0899 mg/kg)、B(0.184 mg/kg)、C(0.288 mg/kg)、D(0.618 mg/kg)、E(0.221 mg/kg)五组样品(其中E为与B、C样罗丹明B浓度接近的干扰样,但是不参加结果统计),每组样品制备10 kg,放置于样品室。测试样品采用双样加干扰样设计发样。第一组获得A+C+E样品,第二组获得B+D+E样品,补测单位采取交叉发样的形式发样。干扰样浓度与实验室获得的一组样品的浓度水平接近,实验室无法从样品浓度识别自己实验室的组别。称取制备好的样品约10 g分装于玻璃样品瓶中,随机编号CNCA-A10-XXX,每个实验室分发3个不同浓度的样品。样品分装于防裂保护纸箱封装。

1.2.2 均匀性检测 采用SN/T 2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》[14]中液相色谱法进行均匀性检验测定。从制备好的A、B、C、D、E五个浓度水平样品中随机抽取10份样品用于均匀性检验,每个样品重复测定2次。样品均匀性实验采用单因子方差统计分析进行评定,当样品中罗丹明B含量的F值小于F临界值(F0.05(9,10)=3.02)时,表明制备的样品均匀性符合要求。

1.2.3 稳定性检测 本次能力验证计划在2016年8～10月完成检测,参加实验室分布在全国,不同地方气温差异最高将达到20 ℃左右,模拟样品传递过程中的条件,在实验期间的不同时间间隔,每组样品抽取10个样本、每个样本重复测定2次,在能力验证组织方重庆出入境检验检疫局技术中心实验室开展检测,验证样品稳定性。检验方法、检测人员、仪器、实验室条件与均匀性检验相同。稳定性实验持续时间为83 d,测定时间间隔按先密后疏的原则设计,共分为6个间隔。样品分别于制样后第1、7、14、35、47、83 d进行检测。第47 d为发放样品日期,第83 d为发放补测样品日期。

1.2.4 样品包装与发放 通过快递邮寄,3～5 d内可送达各参加实验室,样品放在加厚纸箱中运输,常温保存。

1.2.5 检测方法 不限定方法,推荐采用SN/T 2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》规定的方法,也可采用实验室日常检测的方法。

1.2.6 统计分析 本次能力验证依据CNAS-GL02:2014《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》[15]、GB/T 27043-2012《合格评定 能力验证的通用要求》[16](等同ISO/IEC导则17043:2010《合格评定 能力验证的通用要求》)、GB/T 28043-2011《利用实验室间比对进行能力验证的统计方法》[17]对结果进行统计评价。采用稳健(Robust)统计技术确定指定值和能力评定标准差,即采用稳健统计的中位值作为指定值,标准化四分位距(NIQR)作为能力评定标准差。本次能力验证以各参加实验室的检测结果的Z比分数(实验室间Z值ZB、实验室内Z值ZW)作为评价其结果满意度的依据。ZB反映结果的系统误差,ZW反映结果的随机误差。|ZB|和|ZW|均≤2为满意结果;2<|ZB|或|ZW|<3为可疑结果;|ZB|或|ZW|≥3为不满意结果。

2 结果与分析

2.1 均匀性测试结果

采用F检验,若F

2.2 稳定性测试结果

表1 均匀性测试分析结果Table 1 Homogeneity testing results

以均匀性实验所得结果为参比数据,采用t检验方法进行稳定性检验。当t值小于tα(n1+n2-2)时则表明两个平均值之间无显著性差异,即制备的样品稳定。样品稳定性检测数据见表2,样品A、B、C、D、E的t值均

表2 稳定性测试分析结果Table 2 Stability testing results

注:t值均

2.3 罗丹明B检测能力验证结果

2.3.1 初测结果 本次能力验证第一次发样134家,收到有效测试报告133份(有1家实验室退出了本次能力验证),计算结果总数(N)、中位值(Median)、标准四分位距(NormIQR)、稳健变异系数(Robust CV)、极大值(max)、极小值(min)、极差(Range)、实验室间Z值(ZB)和实验室内Z值(ZW)等统计量。A+C(第一组)和B+D(第二组)两组样品的统计参数见表3。

表3 检测结果稳健统计值汇总表Table 3 Summary of statistical analysis of results

在第一次测试中获得满意的实验室有105家,占实验室总数的78.4%;获得可疑结果的实验室有6家,占实验室总数的4.3%;获得离群结果的实验室有22家,占实验室总数的16.4%。

2.3.2 补测结果 按照国家认监委的有关规定,对于第一次检测结果可疑或离群的实验室在进行有效整改后可有一次补测机会。协调实施单位向初测结果不满意的28家实验室发放了中期结果报告单和补测通知书,有27家实验室申请参加补测,收到补测测试报告27份。依据稳健统计分析,有19家实验室报送的补测结果为“满意结果”,8家实验室的补测结果为“离群结果”。

3 能力验证结果分析

3.1 地域和行业差异

本次能力验证计划参加实验室共134家,来自30个省、自治区、直辖市,分布范围广泛,参加实验室主要集中在沿海及进出口贸易发达地区。本次能力验证的结果在一定程度上可以反映目前我国食品检测实验室对罗丹明B的检测能力。

不同行业实验室实验室能力验证结果见表4,除疾控系统外,各行业实验室满意结果率较高。能力验证结果表明,我国承担的罗丹明B检测实验室具有较高水平。

表4 不同行业实验室结果比较Table 4 Comparison among determination results from different vocations of laboratories

表5 不同检测手段测定结果比较Table 5 Comparison among determination results from different determination methods

本次能力验证初测不满意实验室28家,其中有地市级以下检测机构及第三方企业实验室有13家(此类实验室共34家),不满意率38.2%,大型检测机构实验室有15家,不满意率15.2%。地市级以下及第三方企业实验室的检测水平较大型检测机构还有一定的差距,因此建议应该加强对此类实验室的监管力度。

3.2 方法差异

参加本次能力验证实验室中,采用SN/T 2430-2010的有112家实验室,占实验室总数的84.2%,第一次测定结果满意率为79.5%。采用《2016年国家食品污染和有害因素风险监测手册》、SN/T 3863-2014、SN/T 3540-2013或其他方法的有21家。由于采用这几个方法获得结果数据量太小,不具有普遍代表性,因此无法比较这几种方法的差异。但从原始记录分析,有部分实验室的检测方法与标准方法有很大的差异。这就需要实验室对方法进行确认、验证,确保方法的可行性。

从统计结果可以看出(表5),采用液相色谱法(HPLC)进行检测的实验室有85家,占63.9%,第一次测定结果满意率为78.8%;采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)进行检测的实验室有48家,占36.1%,第一次测定结果满意率为79.2%。因此可以看出两种检测方法对检测结果的影响没有较大差异。

3.3 不满意结果分析

3.3.1 标准物质的影响 有实验室的测定结果偏离中位置较远,有3家实验室在整改报告中表明标准溶液可能没有达到要求。有1家实验室标准物质纯度未达到要求,有2家没有按照标准物质纯度校正标准溶液的浓度。

3.3.2 实验人员的影响 部分实验室操作人员存在思想上不够重视,检测人员经验能力不足等问题。从反馈回的报告表明,有1家实验室检测数据计算错误,有2家实验室色谱积分不准确,积分错误,有1家实验室结果单位报错等问题。有1家实验室在检测过程中存在多人操作,出现样品泄漏却无人报告。

3.3.3 仪器的影响 样品测定要求检测设备稳定性、灵敏度能够满足相关检测项目的要求。仪器条件,如流动相比例、梯度洗脱程序、洗针溶液要选择合理。测试环境要满足要求。本次能力验证第一次测试不满意的实验室中有7家实验室出现设备不稳定或设备故障的原因;有2家实验室流动相或梯度洗脱程序设置不合理,出现色谱出峰太快或半峰宽太大的现象,导致样品干扰测定或积分不准确;1家实验室的仪器灵敏度不能满足检测要求;1家实验室的基质效应太大影响定量准确性;1家实验室选择不合理的洗针溶剂,导致样品之间交叉污染;1家实验室因仪器环境波动太大,导致结果误差不能满足要求。

3.3.4 检测方法的影响

3.3.4.1 提取方式 从反馈的实验原始记录分析,各实验室主要采用溶解样品和液液萃取两种方式对样品中罗丹明B进行提取,其中采用溶解样品的实验室有104家,占78.2%,第一次测定结果满意率为80.8%;采用液液萃取的实验室有29家,占21.8%,第一次测定结果满意率为72.4%。

液液萃取是利用物质在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度的不同,使目标物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中,通常需要多次萃取才能将绝大部分的化合物提取出来,因此提取效率会直接影响实验结果的准确性。从实验室的原始记录分析,有部分实验室仅仅萃取了一次,添加回收率很差,实验结果也不满意。

3.3.4.2 样品净化 从反馈的实验原始记录分析,采用凝胶色谱(GPC)净化的实验室有81家,占60.9%,第一次测定结果满意率为76.5%;采用固相萃取(SPE)净化的实验室有20家,占15.0%,第一次测定结果满意率为80.0%;采用液液萃取净化的实验室有3家,占2.3%,第一次测定结果满意率为100%;不对样品进行净化的实验室有29家,第一次测定结果满意率为82.8%。

GPC净化需要仪器及色谱柱具有较好的稳定性,要求仪器进样准确、柱效满足要求,同时要采用标准溶液绘制淋洗曲线,确定适当的洗脱收集时间。有三家实验室均出现GPC设备不稳定、色谱柱老化及未优化设备参数而导致实验结果不满意的情况。固相萃取净化需要考察固相萃取柱的柱回收率,同时需加强不同批次固相萃取柱的符合性检测,避免产品批与批之间的差异带来的误差。两家实验室由于使用不同批次的固相萃取柱进行检测,导致实验结果不满意。

4 建议

本次能力验证中,大部分实验室对分析方法的掌握应用较好,少数实验室出现不满意或可疑结果的原因我们仅能从得到的数据和使用方法做粗略的分析和推断。为此建议参加实验室根据相关标准和规范,结合自身实际,重点从仪器状态(如仪器的使用、调试、维护、方法是否优化符合要求等)、标准品(如标准品是否过期、标准品纯度是否折算等)、人员操作(样品的提取、数据处理等操作过程加强培训)、结果计算等环节上查找原因,找出差距和问题所在,制定纠正措施,有效整改,使参加此次能力验证达到真正目的。从不满意实验室的问题分析来看,建议在实验室评审中加强对实验室人员培训、设备符合性、关键试剂耗材验收、标准方法确认及检测经历等方面的审查。建议认监委不仅要收集满意实验室名单,同时也应该收集不满意实验室名单,特别是要加强对补测仍然不满意实验室的监管考核。

5 结论

来自30个省、自治区、直辖市的134家实验室参加了辣椒油中罗丹明B的能力验证。此次辣椒油中罗丹明B的测定能力验证的实施,有效了解目前国内实验室在罗丹明B等非食用着色剂检测领域的整体水平。结果显示大部分基础实验室具备开展食品中罗丹明B测定的能力,整体满意率较高。但是个别实验室出现可疑结果和离群结果,按要求及时分析原因,采取纠正措施。

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[17]中国国家标准化管理委员会.GB/T 28043-2011利用实验室间比对进行能力验证的统计方法[S].北京:中国标准出版社,2011.

ValidationofproficiencytestofRhodamineBinchilioil

ZHENGXiao-ling1,ZOUYun2,YANGChang-lin3,TANGBo-bin1,ZHANGGe1,LIJian-ping1

(1.Chongqing Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau Technology Center,Chongqing 600020,China；2.Chongqing Municipal & Environmental Sanitation Monitoring Department,Chongqing 401121,China；3.Sichuan Institute for Food and Drug Control,Chengdu 611731,China)

In order to find out the capability of Rhodamine B detection in China’s food inspection laboratories,meanwhile verify and strengthen the capability of Rhodamine B determination,the National Certification and Accreditation Supervision and Management Committee(CNCA)organized proficiency test(PT)of detection of Rhodamine B in Chili oil. Chongqing Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau Technology Center is responsible for specific coordination and implementation. This assessment was performed according to GB/T 27043-2012(equivalent to ISO/IEC guideline 17043:2010),GB/T 28043-2011,CNAS-GL02:2014,CNAS-GL03:2006,and the international harmonized protocol for proficiency test. The homogeneity of samples was assessed by F test,and the stability was assessed by t-test. The median was used as assigned value to calculate a z-score which was used as a numerical indicator to show participants’ performance in the program. 134 laboratories participated this proficiency test,124 laboratories were observed as satisfactory,the satisfaction rate was 92.5%,and 8 laboratories showed unsatisfactory result,1 laboratory quitted due to the equipment’s failure. In conclusion,most laboratories taking part in the PT have good competence in analyzing Rhodamine B and most of domestic related laboratories possess a high level of detection.

Rhodamine B;chili oil;food safety;detection

2017-05-08

郑小玲(1986-)，女，硕士，工程师，主要从事食品安全研究，E-mail：495499436@qq.com。

国家认监委2016年能力验证计划(A类项目)A10。

TS201.6

A

1002-0306(2017)23-0188-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.23.035