杜仲茶对便秘模型小鼠的通便功能研究
2017-12-18,,
,,
(1.中南林业科技大学材料科学与工程学院,湖南长沙 410004;2.吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;3.南方林业生态应用技术国家工程实验室,湖南长沙 410004)
杜仲茶对便秘模型小鼠的通便功能研究
赵东亮1,2,李湘洲1,3,*,张胜1,3
(1.中南林业科技大学材料科学与工程学院,湖南长沙 410004;2.吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;
3.南方林业生态应用技术国家工程实验室,湖南长沙 410004)
研究杜仲茶对便秘模型小鼠的通便效果。将昆明种小鼠随机分为溶剂对照组、模型组、阳性对照组和三个剂量的给药组,雌雄各半。溶剂对照组和模型组给予20 mL/kg BW的蒸馏水;阳性对照组给予1.0 g/kg BW的麻仁丸;给药组分别经口给予低、中、高剂量(0.4、0.8、1.6 g/kg BW)的杜仲茶提取液。连续灌胃8 d后,记录各组小鼠的体重,首次排黑便时间、5 h内排便粒数,测定粪便重量、含水量和小肠墨汁推进率,并采用SPSS软件对数据进行显著性分析。结果表明,实验剂量杜仲茶提取液对小鼠生长无明显影响(p>0.05),低、中、高剂量杜仲茶提取液对首次排黑便时间、5 h内排便粒数、粪便重量、含水量和小肠墨汁推进率的影响依次为不显著(p>0.05)、显著(p<0.05)及极显著(p<0.01)。杜仲茶对小鼠具有通便的作用。
杜仲茶,便秘小鼠,润肠通便
杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)作为传统的具有显著疗效的滋补类中药在我国使用历史悠久,《本草纲目》将其列为上品。杜仲活性主要表现在降血压、抗氧化、抗疲劳、增强免疫作用、抗骨质疏松、抗肿瘤、保肝护肝、降血糖和抗衰老等方面[1]。近年来,杜仲因其显著的生理功能得到了众多学者的广泛关注,其使用及研究从传统的杜仲皮扩展到杜仲叶、杜仲雄花、杜仲翅果等,研究表明,杜仲叶和杜仲皮具有相似的化学成分,可作为杜仲皮的替代品,《中国药典》2005、2010、2015版均将其作为饮片类药材收录[2]。通过加工将杜仲叶制成杜仲茶,经作者及多例轻度便秘患者使用发现,杜仲茶还具有通便的效果,该功能尚未见文献报道。
本论文拟探讨杜仲茶提取液对小鼠的通便作用,以复方地酚诺酯作为小鼠便秘造模药剂,麻仁丸作为阳性对照,对比研究杜仲茶提取液对便秘模型小鼠的通便作用,为开拓杜仲资源利用新途径提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
昆明种小鼠 动物合格证号:SCXK(湘)2014-0011,体重(20±2) g 中南大学湘雅医学院实验动物中心;杜仲茶提取液 采摘时间为当年七月,由吉首大学陈功锡教授鉴定;复方地酚诺酯片(批号:国药准字H45020028) 广西河丰药业,每片含复方地酚诺酯 2.5 mg;麻仁丸(批号:国药准字Z50020517) 桐君阁。
表1 杜仲茶提取液对小鼠体重的影响Table 1 Effects of Eucommia leaves extract on body weight of mice(±s)
RE52-99旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂;SHB-III循环水式多用真空泵 郑州长城科贸有限公司;FA2004电子天平 上海精科天平厂。
1.2 实验方法
1.2.1 溶液的配制 将杜仲叶通过萎凋、揉茶、发酵、烘干等工艺制成杜仲茶。称取干燥的杜仲茶,加10倍蒸馏水,沸水提取30 min,提取两次,浓缩至每mL相当于0.8 g杜仲茶叶,4 ℃下冷藏保存备用;粪便指示液墨汁:取约10 g阿拉伯树胶,加入70 mL水,煮沸溶解阿拉伯树胶,加入活性碳粉末5 g,煮沸搅拌数分钟,加水定容至100 mL,4 ℃保存备用;复方地酚诺酯混悬液:取复方地酚诺酯片20片,用研钵研碎呈粉末后加水至100 mL,配制成浓度为0.5 mg/mL的混悬液;麻仁丸混悬液:麻仁丸(批号:国药准字Z50020517,生产厂家:桐君阁),称取研碎后的麻仁丸5 g,加水定容至100 mL,配制成浓度为5%的混悬液。
1.2.2 动物的分组与饲养 选昆明种小鼠60只,随机分成6组,每组10只,雌雄各半,分别为溶剂对照组、模型组、阳性对照组和三个剂量的给药组。溶剂对照组和模型组给予蒸馏水,阳性对照组给予麻仁丸(1.0 g/kg BW),低、中、高三个剂量的给药组按照约相当于人体推荐口服剂量2.5、5、10倍的量(0.4、0.8、1.6 g/kg BW)分别给予杜仲茶提取液(以原杜仲茶折算);灌胃量为20 mL/kg BW每天,连续8 d,期间自由饮食,每天记录各小鼠体重变化情况[3]。
1.2.3 小鼠排便实验 各组小鼠最后一次灌胃后,取走食物,仅提供饮水,禁食16 h。模型组、阳性对照组和三个剂量的给药组小鼠给予复方地芬诺酯混悬液,溶剂对照小鼠给予蒸馏水,剂量为20 mL/kg BW。灌胃30 min后,各组小鼠给予墨汁,其中阳性对照组墨汁含5%的麻仁丸,三个剂量的给药组墨汁含相应剂量的杜仲茶提取物(0.4、0.8、1.6 g/20 mL,以原杜仲茶折算),溶剂对照组和模型组的墨汁为对照墨汁,不含药物。每只小鼠灌胃结束时分别计时,单独饲养。记录各小鼠开始排黑便时间、5 h排便粒数和重量,计算粪便含水量[4]。
1.2.4 小肠运动实验 选昆明种小鼠60只,雌雄各半,参照1.2.2项饲喂。各组小鼠最后一次灌胃后,取走食物,仅提供饮水,禁食16 h。模型组、阳性对照组和三个剂量的给药组小鼠给予复方地芬诺酯混悬液,溶剂对照组小鼠给予蒸馏水,灌胃剂量为20 mL/kg BW。每只小鼠灌胃结束时分别计时,30 min后,各组小鼠给予墨汁,其中阳性对照组墨汁含5%的麻仁丸,三个剂量的给药组墨汁含相应剂量的杜仲茶提取物(0.4、0.8、1.6 g/20 mL,以原杜仲茶折算),溶剂对照组和模型组的墨汁为对照墨汁,不含药物。给予墨汁30 min后,处死小鼠,分离出肠系膜,剪取幽门至回盲部的肠管,将小肠轻轻拉成直线测量长度,即为“小肠长度”,从幽门至墨汁前沿距离为“墨汁推进长度”,按下列公式计算墨汁推进率[4]。
1.3 数据处理
采用SPSS软件进行小鼠首次排黑时间、5 h内排便数、粪便含水率和墨汁推进率的显著性分析,包括给药组与阳性对照组进行t检验,阳性对照组、给药组与模型组间的t检验。
2 结果与分析
2.1 杜仲茶提取液对小鼠体重的影响
各组小鼠初始体重及饲喂8 d后的体重如表1所示。各组小鼠的初始体重与溶剂对照组相比较,均无显著性差异(p>0.05),分组均衡。经口服给予杜仲茶提取液8 d后各组小鼠体重与溶剂对照组比较,均无显著性差异(p>0.05),显示杜仲茶提取液对小鼠生长无明显影响,实验结束时,各组小鼠活动情况、毛发状况均无可见差异。
表2 杜仲茶提取液对小鼠各排便指标的影响Table 2 Indexes of Eucommia leaves extract on defecation of constipated mice(±s)
注:与模型组比,*p<0.05,**p<0.01;模型组与溶剂对照组比,#p<0.05,##p<0.01;表3同。
表3 杜仲叶提取物对墨汁推进率的影响Table 3 Effects of Eucommia leaves extract on ink propelling ratios(±s)
2.2 杜仲茶提取液对便秘小鼠排便指标的影响
由表2可知,模型组与溶剂对照组的首次排黑便时间、5 h内排便粒数、粪便重量和粪便含水率,其结果都具有极显著性差异(p<0.01),说明小鼠便秘模型成立。与模型组相比,杜仲茶提取液中、高剂量组小鼠的首次排黑便所需时间、5 h内排便粒数、粪便重量和粪便含水量有显著性差异(p<0.05、p<0.01),低剂量组亦具有一定效果,随剂量的增加,杜仲茶促进实验小鼠的排便效应相应增加。
2.3 杜仲茶提取液对便秘小鼠小肠蠕动功能的影响
由表3可知,模型组与溶剂对照组相比,墨汁推进率具有非常显著的差异(p<0.01),说明该便秘模型成立。杜仲茶提取液低、中、高剂量组与模型组相比,其墨汁推进率均高于模型组,经SPSS统计分析,低剂量组效果不具显著性,中、高剂量组均有显著性或极显著性差异(p<0.05和p<0.01),显示实验剂量的中、高剂量杜仲茶提取液具有良好的促进小鼠肠道蠕动的功能。
3 讨论
便秘是消化系统常见症状之一,在老年人及久坐少动的白领中常见,便秘往往可致患者产生明显的躯体不适,并引发一系列的疾病[5]。导致便秘的因素比较多,不良的饮食及生活习惯、血糖升高、肠道菌群改变、炎症、神经系统和肠道功能的改变等均可导致便秘[6-7],改善这些指标在一定程度上均可缓解便秘症状。
研究表明,京尼平苷酸具有较好的泻下作用[8],而杜仲叶中的京尼平苷酸含量较为丰富,最高可达1.5%[9]。除京尼平甘酸之外,杜仲茶中的其他成分对便秘的缓解也具有理论上的可能。如杜仲叶中含有丰富的绿原酸、桃叶珊瑚苷等,具有良好的抑菌抗炎作用[10-11],杜仲叶提取物长期治疗能够改善周围神经功能[12],通过实验发现,绿原酸对润肠通便具有一定效果;Lee等[13]确认杜仲叶能够改善高血糖症状;汪长东等[14]认为血浆中一氧化氮的浓度增加抑制肠道平滑肌的收缩,降低其一氧化氮浓度可促进排便,Li-fang Luo等[15]研究发现,杜仲木脂素可以显著降低血浆一氧化氮水平;吕武兴等[16]认为杜仲叶提取物可以明显降低盲肠中大肠杆菌的数量,且有利于盲、回肠中乳酸杆菌和双歧杆菌的增殖。综上所述,除文献已经确证的京尼平苷酸具有泻下作用之外,杜仲叶提取物具有的其他药理作用,如抑菌抗炎、改善高血糖、降低血浆中一氧化氮浓度、促进盲、回肠中乳酸杆菌和双歧杆菌的增殖等,对通肠润便功能也可能具有潜在的作用。
对于便秘的防治除注重饮食的调配、保持良好的生活习惯、药物治疗外,服用润肠通便类天然保健食品亦是一个不错的选择。杜仲作为我国传统的名贵中药材,具有优良的降血压、降血糖、调血脂等功能,且对人体无毒副作用,可长期服用[17]。
杜仲叶在加工制成杜仲茶的过程中,极大降低了生叶所含有的青草味,克服了难以作为茶饮料服用的缺点,但其有效成分含量会有所改变,如何尽可能降低青草味又保留其中的有效成分是制茶工艺需要考虑的问题。
4 结论
连续8 d通过灌胃给药的方式分别给予小鼠0.4、0.8、1.6 g/kg BW 剂量的杜仲茶提取液,各组小鼠体重无明显差异,低、中、高剂量杜仲茶提取液分别使便秘小鼠首便时间缩短4.7%、10.0%、21.4%,排便粒数分别增加7.6%、11.4%、30.9%,粪便重量分别增加2.1%、14.0%、28.2%,粪便的含水量分别提高2.1%、7.2%、10.6%,墨汁推进率分别增加15.5%、66.4%、104.2%,说明杜仲茶提取液对便秘小鼠的肠道蠕动能具有良好的促进作用;通过统计分析,其结果显著(p<0.05)。本实验表明杜仲茶对小鼠具有润肠通便的作用。我国杜仲资源丰富,且宜栽面积广,充分利用杜仲资源,开发出具有通便功能的杜仲保健品,有望实现一物多用,在达到降血压、调血脂血糖的同时,还可以通润肠道。杜仲茶提取液对便秘模型小鼠的通便作用的验证,为杜仲资源利用提供了新思路新途径。
[1]冯晗,周宏灏,欧阳冬生.杜仲的化学成分及药理作用研究进展[J].中国临床药理学与治疗学,2015,20(6):713-720.
[2]袁天翊,方莲花,吕扬,等.杜仲叶的药理作用研究进展[J].中国中药杂志,2013,38(6):781-785.
[3]王鑫,朱婧,刘静,等.低聚木糖润肠通便及调节肠道菌群功能的研究[J].食品工业科技,2015,14(36):359-361.
[4]闵翅驹,黄晓星,王生,等.润肠通便药物筛选小鼠模型的选择及药效评价研究[J].世界临床药物,2015,36(6):405-413.
[5]孙园园,许翠萍,张娜,等.不同年龄段慢性便秘患者病因特点分析[J].肠胃病学,2014,19(6):360-362.
[6]蔡露璐,李媛媛,程凯,等.老年便秘的原因分析、护理和药物治疗[J].中外医学研究,2015,13(35):100-101.
[7]刘海宁,陈玉琢,吴昊,等.肠道菌群与功能性便秘的研究进展[J].复旦学报(医学版),2015,42(4):564-568.
[8]苏印泉,马希汉,杨宗英.日本的杜仲研究开发评述[J].西北林学院学报,1996,11(2):94-100.
[9]孙彦超,李钦,杜红岩等.RP-HPLC测定杜仲叶中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的含量[J].中成药,2009,31(10):
1608-1609.
[10]Jeong HJ,Koo HN,Na HJ,et al. Inhibition of TNF-αand IL-6 production by aucubin through blockade of NF-κB activation in RBL-2H3 mast cells[J].Cytokine,2002,18(5):252-259.
[11]Lou Z X,Wang H X,Zhu S,et al. Antibacterial activity and mechanism of action of chlorogenic acid[J]. Food Sci,2011,76(6):398-403.
[12]Xin Jin,Keisuke Amitani,Yoshito Zamami.et al.Ameliorative effect ofEucommiaulmoidesOliv.leaves extract(ELE)on insulin resistance and abnormal perivascular innervation in fructose-drinking rats[J].Journal of Ethnopharmacology,2010,12(8):672-678.
[13]Lee M K,Kim M J,Cho S Y,et al. Hypoglycemic effect of Du-zhong(Eucommia ulmoides Oliv.)leaves in streptozotocin-induced diabetic rats[J]. Diabetes Res Clin Pract,2005,67(1):22-28.
[14]汪长东,胡还忠,刘子龙,等.一氧化氮抑制大鼠空肠平滑肌收缩[J].肠病学和肝病杂志,2004,13(6):588-591.
[15]Li-fang Luo,Wei-hua Wu,Yin-jun Zhou,et al. Antihypertensive effect of Eucommia ulmoides Oliv. extracts in spontaneously hypertensive rats[J].Journal of Fthnopharmacology,2010,129(2):238-243.
[16]吕武兴,贺建华,王建辉.杜仲提取物对三黄鸡生产性能和肠道微生物的影晌[J].动物营养学报,2007,19(1):61-65.
[17]张京京,杜红岩,李钦,等.杜仲药理与毒理研究进展[J].河南大学学报(医学版),2014,33(3):217-222.
CatharticeffectofEucommiateaextractonconstipatedmice
ZHAODong-liang1,2,LIXiang-zhou1,3,*,ZHANGSheng1,3
(1.College of Materials Science and Engineering,Central South University ofForestry and Technology,Changsha 410004,China;2.College of Biology and Environment Sciences,Jishou University,Jishou 416000,China;3.State Key Laboratory of Ecological Applied Technology in Forest Area of South China,Changsha 410004,China)
Objective:To study the effect ofEucommiatea on defecating function in constipated mice. Methods:Kunming mice were randomized into 6 groups:solvent group,model group,positive group and 3 dosages groups. Mice of solvent group and model group were given by gavage with distilled water of 20 mL/kg BW once a day for 8 days,mice of positive group were given by gavage with Maren Wan of 1.0 g/kg BW once a day for 8 days,mice of 3 dosages group were given by gavage with different dosages ofEucommiatea(0.4,0.8,1.6 g/kg BW)once a day for 8 days.Then the weight of each group of mice was recorded,the time of the first black feces to be excreted and the number of feces within 5 hours were observed,water content of mice feces and ink propelling rates were mensurated,statistical analysis was performed using the SPSS software. Results:There was no obvious effect about experimental dosages ofEucommiatea extrat on Body weight of mice,and the effects of lower,medium and higher dosages ofEucommiatea extrat on the time of the first black feces to be excreted,the number of feces within 5 hours,water content of mice feces and ink propelling rates respectively were no significant(p>0.05),significant(p<0.05)and very significant(p<0.01). Conclution:The results demonstrate thatEucommiatea has significantly cathartic effects in mice.
Eucommiatea;constipated mice;cathartic effects
2017-04-28
赵东亮(1974-),男,博士研究生,讲师,研究方向:天然产物化学利用,E-mail:zhdl-171@163.com。
*通讯作者:李湘洲(1965-),女,硕士,教授,研究方向:天然产物化学利用,E-mail:rlxz@163.com。
“十二五”国家科技支撑计划资助(2012BAD21B05)。
TS272.5
A
1002-0306(2017)23-0280-04
10.13386/j.issn1002-0306.2017.23.051