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高效液相色谱法测量强力感冒片中绿原酸和对乙酰氨基酚

2017-12-15高华荣孙相民

中国当代医药 2017年33期
关键词:绿原酸对乙酰氨基酚含量测定

高华荣++++++孙相民

[摘要]目的 建立测定强力感冒片中绿原酸和对乙酰氨基酚的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱-紫外光谱法(HPLC-UC法)测定绿原酸和对乙酰氨基酚含量,色谱柱为Inertsil ODS-SP(5 μm,4.6×250 mm),流动相为甲醇与乙腈的混合溶液(体积比为1:2)-0.1%磷酸=20:80,柱温:35.0℃,流速:1.0 ml/min,检测波长分别为329 nm和243 nm。结果 对乙酰氨基酚测定的线性范围为0.7~112 μg/ml(r=0.9999),含量为195.8 mg/片;绿原酸测定的线性范围为0.51~102 μg/ml(r=0.9995),含量为2.23 mg/片。结论 该方法用于强力感冒片中绿原酸和对乙酰氨基酚含量的测定较为简便准确。

[关键词]高效液相色谱法;绿原酸;对乙酰氨基酚;含量测定

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2017)11(c)-0013-04

Determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets by HPLC-UV

GAO Hua-rong SUN Xiang-min

Department of Pharmacy,Peking University Medical Luzhong Hospital,Shandong Province,Zibo 255400,China

[Abstract]Objective To establish a method for determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets.Methods By high performance liquid chromatography with ultraviolet spectrometry (HPLC-UC) method,the content of Chlorogenic Acid and Paracetamol were determined.The column was Inertsil ODS-SP (5 μm,4.6×250 mm),the mobile phase was the mixture of methanol-acetonitrile (the volume ratio was 1:2)-0.1% phosphoric acid (20:80).The column temperature was 35.0℃,the flow velocity was 1.0 ml/min,the wavelength was 329 nm and 243 nm respectively.Results The linear range of Paracetamol and Chlorogenic Acid were at 0.7-112 μg/ml (r=0.9999) and 0.51-102 μg/ml (r=0.9995) respectively.The content of Paracetamol and Chlorogenic Acid was 195.8 mg and 2.23 mg respectively.Conclusion The method used for the simultaneous determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets is simple and accurate.

[Key words]HPLC;Paracetamol;Chlorogenic Acid;Determination

强力感冒片中含有对乙酰氨基酚和金银花、牛蒡子、连翘等9味中药,具有辛凉解表、清热解毒、解热镇痛的功效。临床上用于治疗伤风感冒、发热头痛、口干咳嗽、咽喉疼痛等症状。由于强力感冒片是中西药复方制剂,成分复杂,近年来,对乙酰氨基酚在使用过程中导致的不良反应时常有报道。强力感冒片的现行质量标准WS3-B-4017-98中[1],在含量测定项下,仅采用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚的含量,该方法在使用过程中复杂繁琐,干扰因素较多,存在较大的偏差[2],对主要成分金银花中绿原酸的含量未有含量要求。本文通过建立高效液相色谱法,同时测定强力感冒片中对乙酰氨基酚和金银花中绿原酸的含量,以便更好地对该药进行质量监控,同时也为提高该药的质量标准打下基础,现报道如下。

1儀器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪(日本岛津公司,包括LC-20AT泵,DGU-20A3在线脱气机,CTO-10AS VP柱温箱,SPD-20A紫外检测器),AL-104电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司],KH-400KDV型高功率数控超声波清洗器(上海星尧科学仪器有限公司)。

1.2试药

对乙酰氨基酚对照品(批号71302229,中国药品生物制品检定所);绿原酸对照品(批号141215,含量≥99%,中国药品生物制品检定所);强力感冒片(批号150960,武汉中联药业集团股份有限公司);甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品和供试品溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备 准确称取对乙酰氨基酚对照品0.0140 g于100 ml容量瓶中,加50%的甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为140 μg/ml的对乙酰氨基酚对照品贮备液。同时准确称取绿原酸对照品0.0102 g于100 ml容量瓶中,加50%的甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为102 μg/ml的绿原酸对照品贮备液。endprint

2.1.2供试品溶液的制备 取强力感冒片20片,除去包衣,精密称定,研细。准确称取80 mg,置100 ml容量瓶中,加50%甲醇超声溶解并定容至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤,即得测定绿原酸含量的供试品溶液。准确移取该供试品溶液1 ml置10 ml容量瓶中,加50%甲醇溶液稀释至刻度即得测定对乙酰氨基酚含量的供试品溶液。

2.2色谱条件及系统适应性试验

色谱柱:Inertsil ODS-SP(5 μm,4.6×250 mm);流动相:甲醇与乙腈的混合溶液(体积比为1:2)-0.1%磷酸=20:80;柱温:35.0℃;流速:1.0 ml/min;检测波长分别为:对乙酰氨基酚243 nm和绿原酸329 nm[3-4];进样体积:20 μl。分别取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪,色谱图见图1~4,对照品与供试品具有相同的保留时间,对乙酰氨基酚、绿原酸理论塔板数均不低于4000,分离度>1.5。

2.3线性关系的考察

分别取对照品贮备液0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1、2、4、6、8 ml于10 ml容量瓶中,加50%甲醇定容至刻度,摇匀,得系列浓度的标准溶液。分别进样,测定峰面积。以对照品溶液浓度(X,μg/ml)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线。结果,对乙酰氨基酚的回归方程为:Y=98288X+9139.9,相关系数r=0.9999,在浓度0.7~112.0 μg/ml的范围内呈良好线性关系;绿原酸的回归方程为:Y=75266X-42939,相关系数r =0.9995,在浓度0.51~102.00 μg/ml的范围内呈良好线性关系。

2.4精密度试验

分别取“2.1.1”项下的对乙酰氨基酚标准溶液和绿原酸对照品溶液连续进样6次,结果对乙酰氨基酚峰面积的RSD为1.1%(表1),绿原酸峰面积的RSD为1.4%(表2),精密度均良好。

表1 对乙酰氨基酚精密度实验结果(n=6)

表2 绿原酸精密度实验结果(n=6)

2.5稳定性试验

按“2.1.2”制备对乙酰氨基酚和绿原酸的供试品溶液,室温下,分别于0、2、4、6、12、12 h进样,结果对乙酰氨基酚在12 h内的峰面积的RSD为0.5%,绿原酸在6 h内的峰面积的RSD为1.8%,对乙酰氨基酚和绿原酸供试品溶液分别室温放置12 h和6 h稳定。

2.6重复性试验

取同一批研细的样品粉末5份,按“2.1.2”分别平行制备对乙酰氨基酚和绿原酸的供试品溶液,并分别进样,根据峰面积计算样品含量,结果样品中对乙酰氨基酚的含量为402.53 mg/g,RSD为1.2%(n=5);绿原酸的含量为4.75 mg/g,RSD为1.4%(n=5),重复性均良好。

2.7样品含量测定

取强力感冒片,按“2.1.2”制备供试品溶液,按“2.2”色谱条件进样,按外标法由峰面积计算绿原酸和对乙酰氨基酚的含量。结果绿原酸含量为2.23 mg/片,对乙酰氨基酚含量为195.8 mg/片。

2.8回收率试验

根据样品测定结果,取同一批研细的样品粉末80 mg(共10份)分别至100 ml容量瓶中,其中9份分别按绿原酸含量的80%、100%、120%加入绿原酸对照品溶液(各平行3份),加50%甲醇溶液超声溶解并稀释至刻度,摇匀,进样,根据峰面积计算绿原酸的回收率。同时,在另外1份中,加50%甲醇超声溶解并稀释至刻度,然后准确移取该溶液1 ml至10 ml容量瓶中,按对乙酰氨基酚含量的80%、100%、120%分别加入对乙酰氨基酚对照品溶液(各平行3份),并加50%甲醇溶液至刻度,摇匀,进样,根据峰面积计算对乙酰氨基酚的回收率。结果绿原酸的平均回收率为97.8%,RSD为1.5%(表3),对乙酰氨基酚的平均回收率为99.5%,RSD为0.7%(表4)。

表3 绿原酸回收率试验结果(n=9)

表4 对乙酰氨基酚的回收率试验结果(n=9)

3讨论

在色谱流动相条件摸索中,参考相关文献[5-15]分别以甲醇-NaH2PO4(pH 2.7),甲醇-0.4%磷酸,甲醇-0.1%磷酸,乙腈-0.4%磷酸,乙腈-0.3%磷酸,乙腈-0.2%磷酸,乙腈-0.1%磷酸等为流动相比较不同比例下的色谱图,考虑出峰时间、分离度和拖尾因子,最终确定甲醇与乙腈的混合溶液(体积比为1:2)-0.1%磷酸=20:80为流动相。

由于样品中含有对乙酰氨基酚和绿原酸的量相差大约100倍,供试品溶液不经过稀释直接同时测定二者的含量时,会导致样品中对乙酰氨基酚的浓度超出线性范围,遂采取先测定绿原酸的含量然后再对样品稀释以测定对乙酰氨基酚含量的测定方法。

高效液相色谱法测定强力感冒片中绿原酸和对乙酰氨基酚的含量,方法应用简单、可靠、专属性强[8-9],测定结果准确,精密度、重复性及稳定性均良好,可用于药品质量检测,提高了药品使用的安全性。

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(收稿日期:2017-09-23 本文编辑:孟庆卿)endprint

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