须癣毛癣菌对3种外用抗真菌药物敏感性的研究

魏天征 张晋巧 甄 莉*

（1 山西医科大学第一临床医学院，山西 太原 030001；2 山西医科大学第一附属医院，山西 太原 030001）

须癣毛癣菌对3种外用抗真菌药物敏感性的研究

魏天征1张晋巧1甄 莉2*

（1 山西医科大学第一临床医学院，山西 太原 030001；2 山西医科大学第一附属医院，山西 太原 030001）

目的通过对3种外用抗真菌药物（2%酮康唑乳膏，盐酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏）体外抗真菌活性和药物敏感性进行比较，为临床的合理用药提供参考。方法选用临床分离须癣毛癣菌15株及其标准株1株，用琼脂扩散法作药敏试验，在琼脂的含菌平板打孔后分别加入上述3种药物，培养7 d后测定各含药孔周围的抑菌圈直径。结果3种外用药物对须癣毛癣菌其均形成抑菌圈，2%酮康唑乳抑菌圈直径均数15.94 mm，盐酸布替萘芬乳膏抑菌圈直径均数为68.39 mm，曲安奈德益康唑乳膏抑菌圈直径均数为62.32 mm。而任意2组的抑菌圈均数比较，其差异均有统计学意义（Plt;0.001），2%酮康唑乳膏和盐酸布替萘芬乳膏临床菌株与标准菌株抑菌圈均数比较，其差异均有统计学意义（Plt;0.001）。结论对于须癣毛癣菌抗真菌活性而言，盐酸布替萘芬乳膏优于曲安奈德益康唑乳膏，曲安奈德益康唑乳膏优于酮康唑乳膏，须癣毛癣菌临床菌株对于酮康唑乳膏与盐酸布替萘芬乳膏不排除耐药情况的产生。

抗真菌活性；酮康唑乳膏；盐酸布替萘芬乳膏；曲安奈德益康唑乳膏；体外培养

皮肤的浅部真菌感染主要由皮肤癣菌和念珠菌属所致[1]，而常见的皮肤癣菌病有体癣、股癣、头癣、手癣、足癣及甲癣等。其中体股癣主要由红色毛癣菌、须癣毛癣菌、疣状毛癣菌等感染引起，手足癣主要由红色毛癣菌、须癣毛癣菌、石膏样毛癣菌等感染引起。虽然外用抗真菌药物应用于临床取得一定疗效，但由于浅部真菌病复发率较高，患者依从性差，耐药菌的出现等特点，患者生活质量受到严重影响。本次实验研究须癣毛癣菌对3种常见外用抗真菌药物（2%酮康唑乳膏，盐酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏）的体外抗真菌活性和药物敏感性。通过3种外用抗真菌药物抑菌环大小比较其体外抗真菌活性。通过临床分离菌株菌株与标准菌株抑菌环大小比较3种外用抗真菌药物敏感性，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株：本研究临床分离菌株须癣毛癣菌15株，标准菌株ATCC4439，均购于中国医学科学院皮肤病研究所。

1.1.2 培养基：根据实验菌株采取适合其生长的沙堡弱培养基（SDA），成分为蛋白胨10 g、葡萄糖40 g、琼脂20 g。

1.1.3 试验用药：药品购于太原国营药房，且均在有效期内。酮康唑乳膏，每克含主要成分酮康唑20 mg，（批号：160428522）西安杨森制药有限公司；盐酸布替萘芬乳膏，每克含盐酸布替萘芬每克含10 mg，（批号：55151101）西安杨森制药有限公司；曲安奈德益康唑乳膏，每克含曲安奈德1 mg，硝酸益康唑10 mg（批号：160127274）鲁南贝特制药有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验方法：①活化菌株：须癣毛癣菌用斜面沙堡琼脂培养基，培养温度为28 ℃，培养7 d。②取直径9 cm沙堡琼脂培养基，制作菌悬液，将芝麻大小菌团溶于1 mL生理盐水中，用振荡器充分震荡均匀，调节菌悬液浊度至0.5～1麦氏浊度。③制作含菌平板：用无菌棉签蘸取菌悬液后，将其均匀涂布于实验用培养基平板表面。④打孔加药：在涂菌的培养基上用直径4 mm的打孔器打孔，用1 mL无菌注射器将盐酸布替萘芬乳膏、2%酮康唑乳膏、曲安奈德益康唑乳膏打入孔中，使药膏与孔边缘平齐并充分接触，勿使药膏沾染孔外琼脂平面。⑤培养条件菌株置28 ℃，培养7 d。⑥结果观察。观察各药膏孔周围抑菌圈大小并记录其直径。抑菌圈直径取最大径和最小径的均数（也 =quot;29quot; 纸书=quot;22quot;/gt;可用最大和最小半径的均数乘2代表直径）。

图1 3种药膏对须癣毛癣菌以及标准菌的抑药效果比较（其中，（a）、（b）、（c）分别为2%酮康唑乳膏，盐酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏临床菌株的抑菌圈，（d）、（e）、（f）分别为2%酮康唑乳膏，盐酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏标准菌株的抑菌圈）

1.2.2 统计方法：采用SPSS17.0统计软件进行数据分析，数据表示为均数±标准差。采用随机区组设计单因素方差对不同药物组间数据分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。不同药物组中，临床菌株与标准菌株比较采用单样本t检验，检验水准为0.05，Plt;0.05表明差异有显著性，Plt;0.01表明差异非常显著。

2 结 果

3种药膏对须癣毛癣菌以及标准菌的抑药效果比较见图1，3种药膏在SDA培养基中对须癣毛癣菌抑菌圈半径的比较见表1。

表1 3种药膏在SDA培养基中对须癣毛癣菌抑菌圈半径的比较（±s，mm）

表1 3种药膏在SDA培养基中对须癣毛癣菌抑菌圈半径的比较（±s，mm）

注：A为2%酮康唑乳膏，B为盐酸布替萘芬乳膏，C为曲安奈德益康唑乳膏

菌种 A B C须癣毛癣菌1 15.04±0.62 68.71±0.01 62.09±0.65须癣毛癣菌2 16.41±0.13 65.36±0.06 59.11±0.31须癣毛癣菌3 17.57±0.22 69.25±0.50 65.43±1.10须癣毛癣菌4 18.99±0.66 67.10±0.59 62.16±0.71须癣毛癣菌5 16.94±0.68 65.22±1.73 61.71±0.55须癣毛癣菌6 15.57±0.34 66.77±0.19 64.99±0.53须癣毛癣菌7 14.08±0.78 67.12±0.33 65.82±0.64须癣毛癣菌8 15.54±0.26 65.42±0.30 61.64±0.56须癣毛癣菌9 16.38±0.05 70.65±0.50 58.77±0.50须癣毛癣菌10 16.07±0.62 71.75±0.46 62.53±0.53须癣毛癣菌11 13.98±0.74 72.29±0.11 60.62±0.57须癣毛癣菌12 14.95±0.39 69.17±1.24 61.37±0.14须癣毛癣菌13 15.20±0.36 65.39±0.16 61.91±0.33须癣毛癣菌14 14.35±1.00 67.29±0.25 61.64±0.60须癣毛癣菌15 14.39±0.19 70.89±0.61 64.79±0.56标准菌株 19.61±0.44 71.88±0.50 62.63±0.41

根据表1，采用随机区组设计的方差分析对须癣毛癣菌在3种药膏周围的抑菌圈直径进行分析，得F值为2976.60（Plt;0.001），说明3种药膏形成的抑菌圈的大小差异均有统计学意义。

进一步用LSD法对3种药膏的抑菌圈的大小进行两两之间比较，得出3种药膏中任意2种间的抑菌圈大小差异均有统计学意义（Plt;0.001）。故可认为3种药膏的抑菌圈大小均不同，盐酸布替萘芬组大于曲安奈德益康唑组。曲安奈德益康唑组大于酮康唑组。

采用单样本t检验，将各药物组中的临床菌株与标准菌进行比较，发现曲安奈德益康唑组中两种菌株间抑菌圈大小不具有统计学差异（P＞0.05），曲安奈德益康唑组的临床菌株与标准菌抑菌圈相差不大，而酮康唑组与盐酸布替萘芬组中其差异具有统计学意义（Plt;0.001），酮康唑组与盐酸布替萘芬组中临床菌株抑菌圈均数小于标准菌株。

3 讨 论

酮康唑为咪唑类抗真菌药物，其抗菌谱广，尤其对皮肤癣菌、念珠菌和马拉色菌具有明显的抑制作用及较高的抗菌活性[2]，作用机制为通过抑制14-α-脱甲基酶，从而抑制了羊毛甾醇转化为麦角固醇，gt;来干预细胞膜的合成。盐酸布替萘芬为苄胺类抗真菌药物，特异性地gt;抑制角鲨烯环氧化酶，从而抑制了鲨烯转化为羊毛甾醇，破坏了真菌gt;细胞膜的功能。硝酸益康唑属咪唑衍生物，对真菌的作用机制是抑制gt;真菌细胞膜上麦角固醇和磷脂的生物合成，进一步破坏真菌细胞膜，gt;导致细胞破坏死亡[3-4]。

实验中3种药物均有抑菌圈形成，说明须癣毛癣菌对其都具有敏gt;感性，并且盐酸布替萘芬乳膏抑菌效果优于曲安奈德益康唑乳膏，gt;曲安奈德益康唑乳膏抑菌效果优于酮康唑乳膏。咪唑类药物虽然抗gt;菌谱广，但对皮肤癣菌的活性相对较弱，这一实验结果与临床文献gt;一致[5-7]，另有体外研究显示，盐酸布替萘芬对皮肤癣菌疗效优于咪唑gt;类外用抗真菌药[8]，而苄胺类和咪唑类药物分别作用于真菌细胞膜合gt;成代谢中的不同位置，也造成布替萘芬对须癣毛癣菌抑菌活性强。从gt;药品成分分析，酮康唑乳膏每克含主要成分酮康唑20 mg。曲安奈德gt;益康唑乳膏，每克含硝酸益康唑10 mg，从性价比而言，曲安奈德益gt;康唑乳膏抑菌效果较好。以上3种药物都有一定的抗炎作用，酮康唑gt;的抗炎作用于氢化可的松相当，而曲安奈德为中效糖皮质激素，具有gt;抗炎和收缩血管等作用，二者需要进一步在实际临床应用观察疗效。gt;同时，与标准菌株对照，酮康唑组和盐酸布替萘芬组临床菌株抑菌效gt;果均较标准菌株差，不排除耐药情况的产生。随着抗真菌药物的广泛gt;应用，真菌的耐药出现不可避免，会影响治疗效果。目前，丙烯胺类gt;的耐药性机制已在一些酵母菌中发现[9]，而盐酸布替萘芬对抗念珠菌gt;的与唑类抗真菌外用药相比作用较弱。应用琼脂扩散法对在同样培养gt;条件下的药物成品实验，其客观性强，可以作为临床上浅部真菌病药gt;物的选择提供参考价值。

在实际用药过程中，受多重因素的影响，比如患者的一般状况，gt;免疫能力，以及药物的吸收面积等等，即便同种药物对于不同患者的gt;疗效也不尽相同。需要进一步临床的疗效与应用相结合，对于抑菌活gt;性进一步探究。

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T.mentagrophytes to Three Topical Antifungal Drug Sensitivity Study

WEI TIAN-zheng1, ZHANG JIN-qiao1, ZHEN Li2

(1 First Clinical Medical College, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China;2 First Af filiated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

ObjectiveThis study on three kinds of topical antifungal drugs (2% ketoconazole cream, butenafine hydrochloride cream, triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream) the comparison of in vitro antifungal activity and drug sensitivity, provide reference for clinical rational drug use.MethodsThe agar diffusion method was used to judge drug sensitivity. Select 15 strains of clinical isolates t.mentagrophytes 1 strain and standard strain,punching AGAR plate containing bacteria, respectively, to join the three drugs, drug cultivation, 7 days to determine the bacteriostatic circle diameter.ResultsThree kinds of drugs is the formation of bacteriostatic ring for t.mentagrophytes.2% ketoconazole cream bacteriostatic circle diameter of 15.94 mm on average, butena fine hydrochloride cream round cloth paste the average diameter of 68.39 mm. triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream average bacteriostatic circle diameter of 62.32 mm. Any bacteriostatic annulus compared two groups of drug, the difference statistically signi ficant (Plt;0.001).Compared with the standard strains, 2% ketoconazole cream and butena fine hydrochloride cream group signi ficant difference (Plt;0.001).ConclusionThe antifungal activity of t. mentagrophytes, cloth butena fine hydrochloride cream is better than that of triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream,triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream is better than that of 2% ketoconazole cream compared with the corresponding standard bacteria, 2%ketoconazole cream and butena fine hydrochloride cream was statistically signi ficant, does not exclude the resistance.

Antifungal activity; 2% ketoconazole cream; Butena fine Hydrochloride cream; Triamcinlone Acetonide and Econazoie Nitrate cream; In vitro

R978.1

B

1671-8194（2017）33-0021-03

*通讯作者：E-mail:zhenli0351.163.com