固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中的TBHQ含量

熊巍林，包李林，邹燕娣，金 瑚，李敏利，张谦益，万 聪(道道全粮油股份有限公司 国家油菜籽加工技术研发分中心，湖南 岳阳 414000)

固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中的TBHQ含量

熊巍林，包李林，邹燕娣，金 瑚，李敏利，张谦益，万 聪
(道道全粮油股份有限公司 国家油菜籽加工技术研发分中心，湖南 岳阳 414000)

建立了植物油中TBHQ的中性氧化铝固相萃取-高效液相色谱分析法。分别用TBHQ标准溶液10、25 μg/mL和50 μg/mL进行加标回收率和精密度试验。结果表明：加标回收率在100.0%～103.0%之间，RSD为2.0%～6.0%，说明该方法具有良好的可靠性和重现性。研究表明，该方法操作简便，油脂净化完全，结果准确可靠。

植物油；TBHQ；中性氧化铝；HPLC

油脂的氧化和酸败直接影响油脂的质量，尤其是含不饱和脂肪酸较多的植物油更容易发生氧化变质，危害人体健康[1-5]。为了防止油脂氧化变质，一般会向其加入抗氧化剂。目前常用的抗氧化剂主要有丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸(PG)等，其中TBHQ的抗氧化性能是BHA、BHT、PG的2～5 倍，且因其热稳定性好、低毒、具有抑制细菌和霉菌作用、遇金属离子不着色等诸多优点而被广泛应用在食用植物油中[6-7]。但是摄入过多TBHQ会危害人体健康。我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760—2007)规定TBHQ使用最大量为200 mg/kg[8]，因而植物油中的TBHQ含量成为了食品安全检测的重要指标之一。目前高效液相色谱因灵敏度高、重现性好、结果准确可靠等优点成为测定TBHQ含量的首选方法[9-15]。

高效液相色谱的前处理主要采用溶剂萃取法，但是溶剂会将油脂带入萃取的样品中，污染色谱柱，缩短色谱柱的使用寿命，甚至会污染仪器的流路系统。本文采用中性氧化铝固相萃取法，将油脂净化完全，再通过高效液相色谱测定植物油中的TBHQ含量，旨在建立一种更为科学和准确地测定植物油中TBHQ含量的方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 原料与试剂

中性氧化铝(100～200目)；TBHQ标准品(纯度≥99%)；甲醇，色谱纯；无水硫酸钠、乙酸、正己烷，分析纯；超纯水；一级葵花籽油(TBHQ含量120 mg/kg)；不含TBHQ的四级菜籽油。

1.1.2 仪器与设备

安捷伦1260型高效液相色谱仪(配紫外检测器)；RE-201型旋转蒸发仪；HGC-12A型氮吹仪；玻璃层析柱(d=1.2 cm，l=47 cm，带砂芯配旋塞)。

1.2 试验方法

1.2.1 HPLC分析条件

Nova-pakC18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相甲醇-水(体积比98∶2)；流速0.8 mL/min；柱温30℃；紫外检测波长280 nm；进样量10 μL。

1.2.2 标准曲线绘制和仪器检出限

称取100 mg TBHQ标准品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制1 mg/mL标样储备液。取一定量的标样储备液用甲醇分别稀释配制10、50、100、150、200、250 μg/mL标准使用液，进行高效液相色谱分析。以标准使用液的质量浓度(C)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线。其线性关系为Y=20.214 5C+13.96，R2=0.997 9。以仪器的S/N=3计算，测得仪器最低检出限为1 mg/kg。

1.2.3 样品的处理

V级氧化铝的制备：90 g中性氧化铝置于马弗炉中450℃煅烧12 h，冷却至室温，加入15 mL超纯水，充分摇匀，黑暗处放置12 h以上备用。

样品处理：向层析柱中装入适量的正己烷，快速装入1.0 g V级氧化铝，加入适量无水硫酸钠，装填过程中避免产生气泡。当正己烷流出至无水硫酸钠顶端1 mm处时，关闭旋塞。称取0.5 g(精确至0.000 1 g)的油样，上样，用两次共20 mL正己烷清洗烧杯使转移彻底，加入20～30 mL甲醇将油脂完全洗脱下来，再加入10 mL甲醇-冰醋酸-水混合液(体积比5∶3∶2)，流速10滴/10 s，开始收集洗脱液，旋蒸浓缩至剩余0.5～1.0 mL，弱氮气流吹干，加甲醇定容至3 mL，过0.45 μm有机滤膜，待HPLC测定。

2 结果与分析

2.1 样品前处理

试验表明：氧化铝的用量和级别直接影响目标物的吸附和洗脱。当采用吸附性能最弱的V级氧化铝1 g作为吸附剂时，甲醇淋洗油脂更容易更完全；使用甲醇-冰醋酸-水混合液洗脱目标物时，当固定混合液10 mL，冰醋酸3 mL时，加水量直接影响目标物能否洗脱下来。试验证明，当加入大于等于2 mL水时，目标物能被完全洗脱出来，但加水量较大，不但影响滴速，更多杂质也被洗脱下来。因此，加入2 mL水为宜。

2.2 样品分离(见图1)

图1 样品中TBHQ的HPLC谱图

从图1可以看出，样品中的TBHQ与杂质能较好地分开，杂质峰不干扰测定。TBHQ的保留时间为8.054 min。将同一样品在同一天内重复测定6次并取平均值计算仪器的精密度，测得变异系数为3.2%，说明仪器精密度良好。

2.3 方法的回收率和精密度

以不含TBHQ的四级菜籽油为本底，分别加入低(10 μg/mL)、中(25 μg/mL)、高(50 μg/mL)3个水平的TBHQ标准溶液各1.0 mL，每个加标样水平进行3次平行测定，计算3个水平的回收率和RSD。结果见表1。

表1 方法的回收率和精密度试验结果

由表1可知，方法的回收率在100.0%～103.0%之间，RSD为2.0%～6.0%，说明该方法具有良好的可靠性和重现性。

3 结 论

采用固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中TBHQ含量，方法的回收率在100.0%～103.0%之间，RSD为2.0%～6.0%。该方法操作简便，灵敏度高，耗时短，准确度和重现性好，对油脂净化完全，避免了油脂污染仪器系统，是测定植物油中TBHQ含量的有效方法，适用于实验室的日常检测。

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DeterminationofTBHQcontentinvegetableoilbysolidphaseextraction-highperformanceliquidchromatography

XIONG Weilin，BAO Lilin，ZOU Yandi，JIN Hu，LI Minli，ZHANG Qianyi，WAN Cong
(National R amp; D Center for Rapeseed Processing, Daodaoquan Grain amp; Oil Shares Co., Ltd., Yueyang 414000，Hunan，China)

A neutral alumina solid phase extraction-high performance liquid chromatography method was established for the analysis of TBHQ in vegetable oil. The standard recovery experiment and precision experiment were conducted using 10, 25 μg/mL and 50 μg/mL TBHQ standard solutions. The results showed that the recovery rate of standard andRSDwere 100.0%-103.0% and 2.0%-6.0%，respectively, which showed that the method had good reliability and repeatability. The study indicated that the method had the items of simpleness, complete oil purification, and accurate and reliable result.

vegetable oil； TBHQ； neutral alumina； HPLC

2017-02-09

“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0401401)

熊巍林(1968)，男，高级工程师，主要从事植物油脂工艺研究和质量管理方面的工作(E-mail)2621127917@qq.com。

邹燕娣，助理工程师，硕士(E-mail)527488691@qq.com。

检测分析

TS227;O657.7+2

A

1003-7969(2017)10-0143-03