五种常用消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭效果评价

董 霞, 李培群, 罗 东, 刘 涛, 万腊根, 陈开森

(1 南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330006； 2 南昌大学公共卫生学院，江西 南昌 330006)

·论著·

五种常用消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭效果评价

董 霞1, 2, 李培群2, 罗 东1, 刘 涛1, 万腊根1, 陈开森1

(1 南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330006； 2 南昌大学公共卫生学院，江西 南昌 330006)

目的研究医院常用消毒剂乙醇、三氯片、碘伏、戊二醛、爱护佳免洗手消毒剂对医院不同来源金黄色葡萄球菌的杀灭效果，为有效控制医院感染提供科学依据。方法收集南昌大学第一附属医院临床送检标本和医护人员手及医院内周边环境物体表面采集的标本分离的金黄色葡萄球菌共48株。通过消毒剂与细菌直接接触作用，研究消毒剂在不同稀释浓度、不同作用时间、体外杀灭不同来源的金色葡萄球菌的效果。结果常规使用消毒剂如5 g/L碘伏、20 g/L戊二醛和爱护佳免洗手消毒剂(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)常温下作用5 min对不同来源金黄色葡萄球菌的杀灭率为100%；70%乙醇和1 g/L三氯片常温下作用5 min对不同来源金黄色葡萄球菌的杀灭率为96.5%～99.8%；但碘伏、戊二醛和免洗手消毒剂被高度稀释后即使提高作用时间但仍不能完全杀灭金黄色葡萄球菌。结论该院常规使用消毒剂能满足临床杀菌效果，但需要不断地监测消毒剂的有效浓度，防止杀菌能力降低。

金黄色葡萄球菌; 消毒剂; 杀菌作用

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SAU) 是临床上重要的病原菌，常可导致创面伤口、皮肤软组织及血流感染[1-2]。该菌适应能力强，常可存在于人体体表及各类环境中，例如医院内的水、空气及物体表面等。由于消毒剂在手部、医疗器械、物体表面及空气清洁中的频繁使用，环境分离菌可对多种消毒剂产生抗性，表现为现有的消毒剂及消毒方法可能不能完全杀灭该类菌[3-4]，而SAU由于强的抵抗力及环境适应性，常和芽孢用于评价消毒剂的杀灭效果[5]。消毒剂的使用已有相当长的历史，正如细菌对抗菌药物的耐药性一样，长时间接触同一种(类)消毒剂的细菌会对该类消毒剂产生抵抗力，即产生抗性。随着人类社会的发展以及人们健康意识的不断增强，消毒用品的使用越来越广泛，细菌对消毒剂的抗性问题也就越加严重，这已引起人们的广泛关注与重视[6]。南昌大学第一附属医院根据不同的需要，常使用5种消毒剂，包括乙醇、碘伏、戊二醛、三氯片及爱护佳免洗手消毒剂。这些消毒剂能否很好地对医院环境内分离的SAU具有杀灭作用，目前并未见评价。为了观测常用消毒剂对医院环境内分离的SAU，本研究通过收集环境及临床分离的SAU，随后进行体外悬液定量杀菌试验，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验菌株 均来源于南昌大学第一附属医院，包括住院患者分离的SAU 20株，环境分离的SAU 28株。质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC 25923来源于中国菌种保藏中心。

1.1.2 试验用消毒剂 乙醇(主要为70%乙醇)、碘伏(主要成分为聚乙烯吡咯烷酮，碘浓度5.0 g/L)、三氯片(主要成分为三氯异氰尿酸，有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒剂及爱护佳免洗手消毒剂(0.5%葡萄糖酸氯己定+70.0%乙醇)。

1.2 试验方法

1.2.1 SAU的鉴定 将临床或环境常规分离菌进行涂片，革兰染色为阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶阳性。采用法国生物梅里埃公司VITEK 2 Compact 全自动细菌分析仪及对应鉴定卡对菌种鉴定。

1.2.2 菌悬液的制备 取分离的SAU接种到LB肉汤中，35℃震荡培养至对数生长期，制备浓度为1×106CFU/mL的菌悬液[7]。

1.2.3 中和剂鉴定试验 用金黄色葡萄球菌标准株ATCC 25923为试验菌，设计6组试验，按悬液定量杀菌试验程序进行中和剂鉴定试验。试验结果以第1组无菌生长或仅有极少数生长；第2组远较第1组为多，但较第3、4、5组生长菌数少，其组间差不超过两组回收菌数平均值的10%；第6组无菌生长，表明所用中和剂及其浓度适宜。

1.2.4 悬液定量杀菌试验 将试验菌悬液(100 μL/孔)和每种不同浓度(2倍稀释、5倍稀释、10倍稀释)消毒剂(100 μL/孔)置于96孔微孔板中，于35℃作用不同时间(1、5、10 min)。取出混合液(20 μL/孔)随后加入对应中和剂(180 μL/孔)，作用10 min后，取0.2 mL倾注90 mm平板上，L棒划开进行活菌计数培养48 h后观察结果，阳性对照为加菌悬液的生理盐水组，重复3次取平均值，计算杀菌率[7]。

1.3 统计分析 不同消毒剂对不同来源SAU的杀灭率采用χ2检验，P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 中和剂鉴定试验结果 经中和剂鉴定试验确定，乙醇的中和剂为10 g/L吐温80的磷酸盐缓冲液，碘伏的中和剂为10 g/L 硫代硫酸钠+10 g/L吐温80的磷酸盐缓冲液，戊二醛的中和剂为10 g/L甘氨酸+ 5.0 g /L吐温80的磷酸盐缓冲液，三氯片的中和剂为5.0 g/L硫代硫酸钠+5.0 g/L吐温80的营养肉汤，爱护佳免洗手消毒剂的中和剂为20 g/L卵磷脂+20 g/L吐温80的磷酸盐缓冲液[8]。

2.2 杀菌试验结果

2.2.1 5种消毒剂不同作用时间对SAU的杀灭效果 以70%乙醇、碘伏(5.0 g/L)、三氯片(有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒剂及爱护佳免洗手消毒剂(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)作用1 min，对金黄色葡萄球菌标准株杀灭率均为100%。在上述相同浓度和作用时间条件下，各消毒剂对28株环境分离的SAU和20株临床分离的SAU的杀灭率均达到90%以上。常规剂量作用1 min以上，该院常用的3种消毒剂(碘伏、戊二醛和爱护佳免洗手消毒剂)可完全杀灭不同来源的48株SAU，但70%乙醇及三氯片不能完全杀灭该菌，其中作用5 min时SAU的杀灭率达到90%以上。70%～75%乙醇对除芽孢外的革兰阳性菌与阴性菌杀菌效果最好，所以临床及实验室长期将其作为皮肤等消毒剂的首选，但有结果表明SAU对70%乙醇具有抗药性[9]，这与本次研究结果相符。即使乙醇及三氯片作用5 min，仍有部分SAU未被杀灭；从标本的不同来源看，环境分离的28株SAU抗乙醇及三氯片杀灭能力较强，而临床分离的20株SAU低于前者。见表1。

表15种消毒剂不同作用时间对SAU的杀灭效果

Table1Killing efficacy of 5 kinds of disinfectant onS.aureusat different contact time

消毒剂作用时间(min)标准菌杀灭率(%)环境分离菌杀灭率(%)临床分离菌杀灭率(%)70%乙醇1100．092．094．35100．096．698．610100．0100．0100．0三氯片(1g/L)1100．093．494．75100．096．599．810100．0100．0100．0碘伏(5g/L)1100．098．099．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0戊二醛(20g/L)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0爱护佳免洗手消毒剂(0．5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0

2.2.2 3种常用消毒剂稀释后对SAU的杀灭效果 当常用的碘伏、戊二醛及爱护佳免洗手消毒剂被不同程度稀释后，其杀菌能力逐渐下降，在对不同来源的SAU杀灭中表现为爱护佳免洗手消毒剂杀灭SAU能力强于戊二醛，而戊二醛杀灭SAU能力强于碘伏。见表2。

3 讨论

SAU为医院最为常见的病原菌之一，长期处于革兰阳性菌感染的首位[10-11]。SAU感染的来源包括患者局部定植菌的移位及SAU的传播。细菌在病区间的传播包括通过医务人员手、医疗器械、空气、物体表面等媒介。阻断细菌间传播除了正确的医疗操作外，各种易存储细菌的环境的消毒也非常必要，临床上根据需要常选择消毒能力不同的各类消毒剂进行处理。本研究发现环境分离SAU对低效消毒剂的抗性略大于临床菌株，可能的原因是医院环境中常存在这些低浓度的消毒剂，无形中促使环境SAU对消毒剂的抗性增大[12]；细菌对抗生素耐药可能与消毒剂耐药有关，因为细菌基因的改变可获得抗性，因而可能使细菌获得耐消毒剂基因从而抗性增加[13]，研究证明，SAU含有多种抗生素和消毒剂抗药性质粒，并发现他们之间存在一定联系[14-15]；选择压力在细菌对消毒剂抗性中的作用不容忽视，因为只要有消毒剂的存在，细菌就会受到选择压力的作用，此作用可产生抗性突变株。但整体而言，常规剂量在有效的作用时间内足够杀灭环境来源SAU及临床分离SAU，提示目前该院常规使用浓度的消毒剂对医院感染的SAU能够有效杀灭。然而，由于消毒剂产品的质量不过关或认为常规使用的消毒剂浓度降低时则杀菌能力降低，杀菌能力受到影响，故有必要固定时间内对常规使用的消毒剂或新购消毒剂进行随机抽查，严格把控使用消毒剂产品的质量，为有效地发挥消毒剂在控制病原体医院感染中的作用。目前认为，消毒剂的滥用、处理方法不当及用量不足是消毒剂抗性产生的主要原因。因此，在应用消毒剂时，提倡科学、合理和有效使用是避免消毒剂抗性菌株形成的最重要途径。此外，细菌在长时间脱离接触某消毒剂后，对该药的抗性可能不会立刻消失，故对低效消毒剂最好几种交替使用[16]。

表2 3种常用消毒剂稀释后对SAU的杀灭效果

综上所述，可通过进一步加强医院环境内的消毒从而控制医院感染减少其发生率，因而消毒剂的合理使用以及管理对控制医院感染显得尤为重要。

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BactericidalefficacyoffivekindsofdisinfectantonStaphylococcusaureus

DONGXia1,2,LIPei-qun2,LUODong1,LIUTao1,WANLa-gen1,CHENKai-sen1

(1TheFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006; 2SchoolofPublicHealth，NanchangUniversity,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo study the bactericidal efficacy of hospital commonly used disinfectants such as ethanol, 3" chlorine tablets, iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic onStaphylococcusaureus(S.aureus) from different sources of hospital, and provide scientific basis for effective control of healthcare-associated infection(HAI).MethodsA total of 48 strains ofS.aureusfrom inpatients, hands of health care workers, and environment surface in the First Affiliated Hospital of Nanchang University were collected. Disinfectant was directly contacted with bacteria, in vitro killing efficacy of disinfectant onS.aureusfrom different sources at different diluted concentrations, and different contact time were studied.ResultsThe killing rate of 5g/L iodophor, 20g/L glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic(0.5% chlorhexidine+70% ethanol) toS.aureuswith a 5-minute contact time was 100%; killing rates of 70% ethanol and 1g/L 3" chlorine tablets toS.aureuswith a 5-minute contact time were 96.5%-99.8%；but highly diluted iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic still could not completely killS.aureuseven the contact time was extended.ConclusionThe routine use of disinfectants in the hospital can meet the clinical bactericidal efficacy, it is necessary to monitor concentration routinely, avoid decreasing sterilization ability.

Staphylococcusaureus; disinfectant; bactericidal efficacy

[Chin J Infect Control，2017，16(12)：1116-1119]

2017-04-08

国家自然科学基金资助项目(81660555)；南昌大学大学生科技创新基金(2016213)

董霞(1993-)，女(汉族)，甘肃省白银市人，医学生，主要从事公共卫生管理研究。

陈开森 E-mail:chenks100@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.12.003

R187+.2

A

1671-9638(2017)12-1116-04

陈玉华)