开痹方对类风湿关节炎患者免疫功能影响

苏振宇 李 琳 陈晓宇

河北省玉田县医院检验科 河北唐山 064100；①华北理工大学基础医学院；②开滦总医院林西医院检验科

开痹方对类风湿关节炎患者免疫功能影响

苏振宇 李 琳①陈晓宇②

河北省玉田县医院检验科 河北唐山 064100；①华北理工大学基础医学院；②开滦总医院林西医院检验科

①目的 探讨开痹方对类风湿关节炎免疫功能影响，为类风湿关节炎 (RA)的中医治疗提供实验依据。②方法 选择诊断明确的类风湿关节炎患者105例，随机分为开痹方组和对照组。开痹方组服用开痹方，对照组采用常规治疗(甲氨蝶呤及西乐葆)。各组患者均用药2个月。观察两组患者治疗前后的临床症状及体征，同时测定其血清中主要免疫学指标。③结果 开痹方组治疗后关节压痛数和关节肿胀数均少于对照组，RF和ESR均低于对照组，差异具有显著性(P均<0.05)；治疗后开痹方组患者血清中IgG和C3高于对照组， IL-1、IL-6和TNF-α均低于对照组，差异具有显著性(P均<0.05)。④结论 开痹方能提高类风湿关节炎患者体液和固有免疫功能，抑制致炎性细胞因子分泌。

开痹方 类风湿关节炎 免疫功能

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA) 属自身免疫性疾病，临床主要表现为小关节损伤并伴有明显的慢性滑膜炎症。患者常伴有关节滑膜不同程度的增生以及出现血管翳，极易损伤关节软骨，诱发骨、关节坏死现象，使患者致残[1]。目前西药常用于治疗RA的药物包括:非甾体抗炎药素(nonsteroidalantiinflammatorydrμgs,NSAIDs)、糖皮激素(glucocorticoid,GC)以及缓解病情抗风湿药(disease-modifying anti-rheumatic drμgs，DMARDs)等。尽管上述药物可以缓解症状，但副作用较大[2]。中草药因毒副作用小、价格低廉等原因备受关注。本研究以温阳通络组方开痹方为治疗组，常规西药治疗为对照组，探讨开痹方对类风湿关节炎的免疫功能影响，为类风湿的中药治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1材料 病例取自玉田县医院和开滦总医院林西医院2014年9月～2016年9月门诊105例类风湿性关节炎患者，病例纳入标准参照2014版(ACR/EULAR)RA诊断标准。将2个医院入选病例按照年龄、性别配比的原则交替入组开痹方组和对照组。开痹方组53例，男26例，女27例，年龄(49.6±9.2)岁。对照组52例，其中男25例，女27例，年龄(50.2±8.6)岁。

1.2干预措施 对照组：常规治疗，服用甲氨蝶呤(10mg/次，1次/周)，西乐葆(0.2mg/次，2次/日)。开痹方组：口服开痹方150mL/次，2 次/日(早、晚餐后温服)。开痹方组成为：秦艽10g，鸡血藤20g，防风6g，威灵仙10g，土鳖虫15g，羌活10g，独活10g，川芎10g，骨碎补10g，牛膝15g，乌梢蛇15g，蜈蚣1条，赤芍15g，青风藤10g，忍冬藤15g，桂枝10g，炙甘草6g，茯苓15g。将药物加凉水浸泡1小时后以砂锅煎药，先用大火煮沸后，再用文火煮，每剂煎3次，第一次煎制时间为0.5小时，第二次煎制时间为40分钟，第三次同第二次。3次各取药汁100mL，混合均匀后，每日饭后0.5小时服用。治疗时间均为2个月。

1.3观测指标

1.3.1标本采集 治疗结束后第3天采集患者血液标本，嘱患者早晨空腹，用普通采血管(促凝剂+分离胶)抽取静脉血2mL，待其完全凝固后，3000转/分，离心10分钟，分离血清。用血沉管采集静脉血至刻度处，用于红细胞沉降率(ESR)测定。血常规管采取静脉血2mL，备检。

1.3.2RF测定(免疫散射比浊法) 试剂室温下平衡0.5小时。用移液器分别吸取标准品、样品和空白液(0.9%氯化钠溶液)15μL于3个试管中，再吸取R1试剂(磷酸盐缓冲液，40mmol/L，pH7.4)250μL分别放入试管中。37℃孵育5分钟，取出在340nm波长下比色，记录吸光度A1。然后加入R2试剂(含热聚合人IgG)50μL。37℃孵育5分钟，取出在340nm波长下比色，记录下吸光度A2。依下式计算样本RF值:

ΔA校准品=(A2校准品-A1校准品)-(A2空白-A1空白)

ΔA样品=(A2样品-A1样品)-(A2空白-A1空白)

C样品=C标准品×(ΔA样品/ΔA校准品)

1.3.3ESR检测 用血沉管采取静脉血至刻度处，直立于快速血沉检测架，0.5小时后观察结果，读取红细胞下沉的高度。

1.3.4CRP、IgG、IgM、 C3及C4检测(同RF测定)。

1.3.5IL-1检测方法(双抗体夹心ELISA法) 试剂盒室温下平衡0.5小时。配制试剂与IL-1标准品，稀释待测血清。加入待测血清、不同浓度IL-1标准品、对照血清至相应微孔中，每孔100μL 。胶纸封板，37℃温浴1小时。甩尽孔内液体，用洗涤液每孔300μL洗孔4次，在吸水纸上拍干。各孔加工作浓度生物素化抗人IL-1抗体100μL，箔纸封板，37℃温浴1小时，同上法洗孔。各孔加工作浓度HRP标记链霉亲和素100μL，胶纸封板，37℃温浴0.5小时，同上法洗孔。各孔加入酶底物/色原(过氧化物酶/TMB)100μL,37℃避光反应15min，加入终止液(2mol/L H2SO4)100μL终止反应。以空白孔(含酶底物/色原液与终止液)调零。于酶联仪450nm波长测吸光度，计算样本中IL-1浓度。

1.3.6IL-6及TNF-α检测(同IL-1检测)。

2 结果

2.1开痹方组及对照组治疗前症状体征比较 本研究调查患者105例，开痹方组53例，对照组52例。经独立样本t检验，结果表明，两组间年龄、性别一致，具有可比性。开痹方组与对照组患者治疗前症状体征(晨僵持续时间、关节肿胀数和关节压痛数)等指标一致，因此，两组患者资料治疗前具有可比性，见表1。

表1 开痹方组和对照组治疗前症状体征比较

2.2开痹方组及对照组治疗后症状体征比较 治疗后开痹方组关节肿胀数和关节压痛数均少于对照组，差异具有显著性，晨僵持续时间在两组间差异不具有显著性。提示与常规治疗比较，开痹方可减少类风湿关节炎患者关节肿张数及关节压痛数，见表2。

表2 开痹方组及对照组治疗后症状体征比较

2.3开痹方组及对照组治疗后RF、ESR及CRP比较 治疗后开痹方组RF和ESR均低于对照组，差异具有显著性，而CRP在两组间差异不具有显著性。提示与常规治疗比较，开痹方可降低类风湿关节炎患者RF及ESR，见表3。

表3 开痹方组及对照组治疗后RF、ESR及CRP比较

2.4开痹方组及对照组治疗后患者血清中抗体及补体水平比较 治疗后开痹方组患者血清中IgG和C3高于对照组，而IgM和C4在两组间差异不具有显著性。提示与常规治疗比较，开痹方可提高类风湿关节炎患者体液免疫及固有免疫功能，见表4。

表4 开痹方组及对照组治疗后患者血清中IgG、IgM、C3和C4的比较

2.5开痹方组及对照组治疗后细胞因子比较比较 治疗后开痹方组患者血清中IL-1、IL-6和TNF-α均低于对照组，差异具有显著性。提示与常规治疗比较，开痹方可降低类风湿关节炎患者炎性细胞因子水平，见表5。

表5 开痹方组及对照组治疗后患者血清中IL-1、IL-6和TNF-α的比较

3 讨论

RA属于典型的免疫性疾病，患者多伴有慢性关节炎症。关节疼痛、功能障碍、并伴有轻、中度发热等是RA的主要临床表现[3]。RA患者滑膜组织和滑膜液中,可见多种免疫细胞 (如T细胞、树突状以及肥大细胞)的浸润及细胞因子(IL-1、IL-6以及TNF-α)异常分泌，这些因素均和RA的形成、演变及预后密切相关[4]。根据中医学观点，RA归为“痹证”或者是“历节风”，多是因为风、湿、寒以及热等诸多邪气在筋脉、肌肉以及关节中长时间滞留，促使经脉受阻，引发疼痛，从而导致关节组织出现明显的慢性炎症。本研究应用开痹方对RA患者进行治疗，以常规治疗方法为对照，探讨开痹方对RA患者免疫功能的影响，从而评价其对RA的免疫学干预效果，为其临床应用提供实验依据。

研究结果表明，开痹方组治疗后关节肿胀数和关节压痛数少于对照组，反映类风湿活动性指标RF及ESR低于对照组，说明开痹方对RA症状控制效果优于常规治疗方法。关节肿胀是RA的主要症状，消除关节肿胀是治疗RA的主要目标之一，也是类风湿关节炎病情得以恢复的重要评价指标[5]。开痹方组方中鸡血藤和骨碎补具有活血舒脉的功能。鸡血藤的主要活性成分包括黄酮类、苷类、萜类、蒽醌类以及内酯类等。这些成分具有抗氧化与抑制炎症等作用。骨碎补中含有大量的黄酮类，可有效减轻二甲苯引起的小鼠耳部水肿现象，骨碎补总黄酮也能够降低毛细血管自身的通透性，以缓解组织胺或者5-羟色胺诱发的炎症水肿[6]。

IgG是由B细胞活化后分泌的一种具有免疫中和作用的主要抗体类型，IgG具有亲和力强，半衰期长等特点，血清中IgG含量的高低是衡量个体的体液免疫功能状态的重要指标。在炎症反应过程中，伴随大量IgG的消耗，因此导致血清中IgG含量急剧降低，进而引起机体免疫力的降低[7]。研究结果表明：开痹方治疗后IgG含量高于对照组，说明开痹方能够改善机体体液免疫功能。C3是中人血清中含量最多的一种补体类型，补体活化的经典途径、替代途径及MBL途径均需大量C3参与。炎症反应过程中，补体C3不断消耗，导致机体固有免疫功能及裂解异物细胞的能力降低，不利于炎症的修复[8]。研究结果表明：开痹方治疗后C3含量高于对照组，说明开痹方能够提高机体固有免疫功能。

RA患者的关节液、血清中IL-1的表达高于正常水平，因此，IL-1被认为是RA的一种致炎性细胞因子，在急性和慢性炎症的致病过程发挥重要作用，与类风湿关节炎的病理过程密切相关[9]。IL-6 是由T、B淋巴细胞和肝细胞等多种细胞分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白，它能够诱导肝细胞产生急性期蛋白，并激活补体、诱导促炎性细胞因子释放和刺激中性粒细胞趋化，加强炎性反应。近年来，越来越多的证据表明TNF-α与RA的严重程度呈正相关，它在 RA滑膜炎症反应中起关键作用，具有多种炎性和免疫反应活性，几乎涉及RA炎症反应的每个环节[10]。开痹方组治疗后致炎性细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α分泌水平低于对照组，说明开痹方能够通过抑制致炎性细胞因子的表达，更好地抑制RA的炎症反应，从而控制RA发生过程中与之相关的症状。

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(2017-06-27 收稿)(王一伊 编辑)

EffectofKaiBiprescriptiononimmunityofpatientswithrheumatoidarthritis

SUZhenyu,LILin,CHENXiaoyu

(DepartmentofClinicalLaboratory,YutianHospitalofHebeiProvince,Yutian064100,China)

ObjectiveTo reveal the effect of Kai Bi prescription on the immunity of patients with Rheumatoid Arthritis, so to provide the experimental basis for the treatment of traditional Chinese medicine to rheumatoid arthritis.Methods105 patients definitely diagnosed with rheumatoid arthritis were divided into Kai Bi prescription and control group randomly. The Patient in Kai Bi prescription group was treated with the Kai Bi prescription, and the patient in the control group was treated with methotrexate and Celebrex. All patients were treated for 2 months. The clinical symptoms and objective sign of patients in the above two groups were recorded after treatment. In addition, severalimmune indexeswere determined.ResultsThe numbers of joint tenderness and swelling of Kai Bi prescription group after treatment were less than those of the control group statistically, so were the RF and ESR(P<0.05). The contents of IgG and C3in patients of Kai Bi prescription groupwere higher than those in the control group,whilethesecretions of IL-1, IL-6and TNF-αwere in a reverse result(P<0.05).ConclusionKai Bi prescription was observed to increase the humoral and innate immunitiesof patients with Rheumatoid Arthritis, togather with inhibit the secretion of inflammation cytokines.

Kai Bi prescription.Rheumatoid arthritis.Immunnity

R 593.22

A

2095-2694(2017)06-462-05

苏振宇(1974-),男，主管检验师,硕士研究生。研究方向：免疫学诊断。

李 琳。