过敏性紫癜患儿尿液脂氧素A4、NF-κB的变化及其临床意义

应倩倩 沈梦娇 李蕴言 吴菱 狄亚珍 王佳佩 傅诗薇

过敏性紫癜患儿尿液脂氧素A4、NF-κB的变化及其临床意义

应倩倩 沈梦娇 李蕴言 吴菱 狄亚珍 王佳佩 傅诗薇

目的探讨脂氧素A4（LXA4）、NF-κB在过敏性紫癜（HSP）患儿尿液中的变化及在HSP发病机制中的作用。方法选取50例HSP患儿为病例组，其中紫癜性肾炎（HSPN）患儿20例；同期25例腹股沟疝术前患儿为对照组。留取晨尿，采用ELISA法检测尿液LXA4、NF-κB水平，比较病例组急性期、恢复早期与对照组LXA4、NF-κB水平，并比较HSPN患儿与非HSPN患儿急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例组急性期LXA4和NF-κB的相关性。同时收集各组临床资料及病例组24h尿蛋白定量等实验室检查结果，分析HSPN患儿急性期LXA4、NF-κB水平与24h尿蛋白定量的相关性。结果 病例组急性期、恢复早期尿液LXA4水平均显著高于对照组（均P＜0.01），且急性期显著低于恢复早期（P＜0.01）；病例组急性期、恢复早期尿液NF-κB水平亦均显著高于对照组（均P＜0.05），且急性期显著高于恢复早期（P＜0.01）。HSPN患儿急性期尿液LXA4水平显著低于非HSPN患儿，NF-κB水平显著高于非HSPN患儿，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。病例组急性期尿液LXA4水平与NF-κB水平呈负相关（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患儿急性期24h尿蛋白定量与LXA4水平呈负相关（r=0.562，P＜0.05），与NF-κB无相关性（r=0.370，P＞0.05）。 结论NF-κB可能参与HSP发病，并与病情严重程度相关，而LXA4可能为肾脏保护因子，且可能通过抑制NF-κB发挥抗炎作用。

过敏性紫癜 儿童 脂氧素A4NF-κB 24h尿蛋白

1 对象和方法

1.1 对象 选取2016年5至11月初次在宁波市妇女儿童医院住院的HSP患儿50例为病例组，均符合2006年欧洲风湿病防治委员会、欧洲儿童肾脏病防治委员会及美国风湿协会共同制定的诊断标准[10]，男29例，女21例；年龄 2.5～15（7.0±3.0）岁。其中 20 例为 HPSN，男 9例，女 11 例，年龄 2.5～13（6.8±2.8）岁，均符合 2009 年中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的《紫癜性肾炎诊治循证指南(试行)》中的诊断标准[11]。患儿均为首次发病，1周内未用过抗组胺药物、肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗，既往无过敏性疾病史，也无自身免疫性疾病史。选取同期宁波市妇女儿童医院外科住院的腹股沟疝术前患儿25例为正常对照组，男14例，女11例；年龄3～11（6.4±2.0）岁。病例组与对照组患儿性别和年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究获得医院伦理委员会批准和患儿监护人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 样本收集 病例组分别于急性期、恢复早期，对照组于体检当日留取晨尿8ml，以3 000r/min离心20min，分离上清液置-80℃冰箱冻存待检。患儿起病2周内为急性期，以非血小板减少性紫癜、关节炎、关节肿痛、腹痛或胃肠道出血为主要临床表现，治疗后，上述症状消失3d为恢复早期[12-13]。

1.2.2 尿液LXA4、NF-κB测定 采用ELISA法检测各样本LXA4、NF-κB水平，所有操作均按照试剂盒说明书严格执行。比较病例组急性期、恢复早期与对照组LXA4、NF-κB水平，并比较HSPN患儿与非HSPN患儿急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例组急性期LXA4和NF-κB的相关性。

1.2.3 收集及整理临床资料 收集并整理病例组与对照组性别、年龄、现病史、既往史等临床资料及病例组24h尿蛋白定量等实验室检查结果,分析HSPN患儿急性期LXA4、NF-κB水平与24h尿蛋白定量的相关性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件。计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；两变量间相关性分析采用Pearson相关。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患儿尿液LXA4、NF-κB水平比较 病例组急性期、恢复早期尿液LXA4水平均显著高于对照组（均P＜0.01），且急性期显著低于恢复早期（P＜0.01）；病例组急性期、恢复早期尿液NF-κB水平亦均显著高于对照组（均P＜0.05），且急性期显著高于恢复早期（P＜0.01），见表 1。

表1 两组患儿尿液LXA4、NF-κB水平比较

2.2 HSPN患儿与非HSPN患儿急性期尿液中LXA4、NF-κB水平比较 HSPN患儿急性期尿液LXA4水平显著低于非HSPN患儿，NF-κB水平显著高于非HSPN患儿，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

2.3 尿液LXA4、NF-κB与24h尿蛋白定量的相关性分析 病例组急性期尿液LXA4水平与NF-κB水平呈负相关（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患儿急性期24h尿蛋白量为 0.02～0.86（0.318±0.294）g/24h，LXA4水平为293.851～608.039（446.453±98.260）pg/ml，NF-κB 水平为 317.740～743.973（547.097±99.692）ng/L，HSPN 患儿急性期 24h尿蛋白定量与LXA4水平呈负相关（r=0.562，P＜0.05），与 NF-κB 无相关性（r=0.370，P＞0.05）。

表2 HSPN患儿与非HSPN患儿急性期尿液中LXA4、NF-κB 水平比较

3 讨论

HSP是以小血管为主要病变的系统性血管炎，具有发病率高、病程长、反复发作的特点。然其发病机制不明，目前研究认为的发病模式是各种刺激因子，包括感染原和过敏原作用于具有遗传背景的个体，激发辅助性T淋巴细胞及B淋巴细胞扩增并增强其活性，产生大量以免疫球蛋白A为主的免疫复合物，沉积在全身小血管壁而致血管炎性免疫反应。

LXs产生于机体发生炎症、过敏和血管病变时，是一类重要的内源性抗炎介质。LXA4是家族中的一员，有明确抗炎、促进炎症消退的作用，可通过不同方式调控多种炎症信号通路发挥抗炎活性，其中包括NF-κB信号通路[14]。NF-κB为p50/p65形成的异源二聚体，当细胞未受到外界刺激时，NF-κB/p65与其抑制蛋白IκB结合，以未活化的状态存在胞质中；而当受到刺激后，NF-κB/p65与IκB解离，随即NF-κB/p65被激活而进入胞核，调控TNF-α、IL-8等细胞因子相应基因的转录并促进细胞因子释放，导致炎症级联反应的发生，而这些因子增多又可以激活NF-κB，进一步加重细胞损伤。NF-κB信号通路与免疫密切相关，既参与机体防御病原体的入侵，又是炎症反应的启动闸门，其异常激活在多种自身免疫性疾病如炎症性肠病、川崎病发病中起重要作用[15-16]。既往研究表明LXA4与肾脏疾病相关，在肾脏纤维化、肾脏缺陷-再灌注损伤及多种肾脏炎性疾病中均有肾保护作用[17]。动物实验表明LXA4在急性肾损伤中起保护作用的部分机制是通过抑制NF-κB的激活，从而降低炎性因子表达及炎性细胞浸润[18]。

郎艳美[19]报道HSP患儿急性期血清中LXA4水平增高，恢复期进一步增高，且HSPN患儿水平低于仅有皮肤紫癜的HSP患儿，提示LXA4有抗炎作用，并具有保护肾脏作用。Wu等[6]研究表明在HSP患儿急性期尿液中也能检测到LXA4的升高。华冉等[20]研究发现HSP患儿急性期血清中NF-κB水平升高，恢复期下降，表明NF-κB参与HSP的发病。本研究发现HSP患儿急性期尿液中LXA4显著高于对照组，经治疗后，患儿恢复早期的尿液中LXA4水平进一步升高，与文献报道一致[21]，推测LXA4可能通过合成增多来促进炎症消退。HSP患儿急性期及恢复早期NF-κB水平均显著高于对照组，恢复早期显著低于急性期，提示NF-κB参与HSP发病，随着病情好转而下降。HSPN患儿尿液LXA4水平显著低于非HSPN患儿，NF-κB水平显著高于非HSPN患儿，且HSPN患儿24h尿蛋白定量与尿液LXA4水平呈负相关，而与NF-κB水平无相关性，提示LXA4、NF-κB水平能反映炎症严重程度，且LXA4水平可反映肾损害程度，LXA4不足可能加重肾损害。LXA4有望成为HSP患儿肾损害的预测指标，且监测尿液较监测血液更便捷，因其无创，患者的痛苦较少。HSP患儿急性期LXA4水平与NF-κB水平呈负相关，猜测LXA4生成增多可能有利于NF-κB水平下降，进一步猜测LXA4可能通过拮抗NF-κB发挥抗炎作用，调控NF-κB信号通路可能成为HSP等血管炎症病变的治疗新靶点，在HSP患儿中LXA4是否通过抑制NF-κB信号通路来发挥抗炎作用还需要进一步研究。

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（本文由浙江省医学会风湿病学分会推荐）

Urinary lipoxin A4and NF-κB levels in children with Henoch-Schnlein purpura and their clinical significance

YING Qianqian,SHEN Mengjiao,LI Yunyan,et al.
Medicine School,Ningbo University,Ningbo 315000,China

Objective To investigate the changes of lipoxin A4(LXA4)and nuclear factor-κB(NF-κB)levels in the urine of children with Henoch-Schnlein purpura(HSP),and their clinical significance. Methods Fifty children with HSP,including 20 with HSP nephritis(HSPN),and 25 age-matched children with inguinal hernia(control group)were enrolled in the study.The morning urine specimens were collected and ELISA was used to determine the levels of LXA4and NF-κB.LXA4and NF-κB levels were compared between case and control groups,and among different subgroups,and the correlation between LXA4and NF-κB was analyzed. Results The urinary LXA4levels in acute phase and early recovery phase ofHSP patients were significantly higher than those in controlgroup(both P＜0.01),and the urinary LXA4levels in acute phase patients were significantly lower than those in early recovery phase (P＜0.01).The urinary NF-κB levels in acute phase and early recovery phase of HSP patients were also significantly higher than those in control group(both P＜0.05),while the urinary levels of NF-κB in acute phase was significantly higher than those in early recovery phase(P＜0.01).The urinary levels of LXA4in acute phase of HSP patients without kidney damage were significantly higher than those in HSPN,and the urinary levels of NF-κB were significantly lower(P＜0.05).There was a significantly negative correlation between the urinary levels of LXA4and NF-κB(r=0.347,P＜0.05)in acute phase HSP patients.Meanwhile,there was a significantly negative correlation between LXA4 and 24-h urinary protein(r=0.562,P＜0.05),while there was no correlation between NF-κB and 24-h urinary protein(r=0.370,P＞0.05)in acute phase of HSPN. Conclusion NF-κB may be involved in the pathogenesis of HSP,and associated with disease severity.LXA4 may protect kidney against inflammation by inhibiting NF-κB.

Henoch-Schnlein purpura Children Lipoxin A4Nuclear factor-κB 24-hour urinary protein

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1597

浙江省医药卫生平台研究计划（2015ZDA027）；宁波市医学科技项目（2015C50014）；宁波市自然基金项目（2014A610280）

315000 宁波大学医学院（应倩倩、沈梦娇、傅诗薇）；宁波市妇女儿童医院小儿风湿免疫科（李蕴言、吴菱、狄亚珍、王佳佩）

狄亚珍，E-mail：dyz028sci@163.com

2017-07-07）

陈丽）