金针菇菇脚对肉鸡小肠绒毛形态及黏膜免疫指标的影响

高雅松 , 王 健 , 卫佳丽, 陈 默, 宋 慧,2

(1.吉林农业大学生命科学学院 ， 吉林 长春 130118 ; 2.吉林农业大学 教育部食药用菌工程研究中心 ， 吉林 长春 130118)

金针菇菇脚对肉鸡小肠绒毛形态及黏膜免疫指标的影响

高雅松1, 王 健1, 卫佳丽1, 陈 默1, 宋 慧1,2

(1.吉林农业大学生命科学学院 ， 吉林 长春 130118 ; 2.吉林农业大学 教育部食药用菌工程研究中心 ， 吉林 长春 130118)

为探讨金针菇菇脚(Flammulinavelutipesstembase，FVS)对肉鸡小肠绒毛形态和黏膜免疫指标的影响，将4 500只1日龄爱拔益加(AA+)肉鸡随机分为5个处理组，每个处理组7个重复，饲喂至43 d。分别于22、43 d测定肉鸡小肠绒毛高度(villous height，V)、隐窝深度(crypt depth，C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量。结果显示，FVS可提高肉鸡小肠V/C和小肠黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量。

金针菇 ; 肉鸡 ; 小肠 ; 免疫

金针菇菇脚(Flammulinavelutipesstembase，FVS)含蛋白质和糖类等成分，有抗氧化和免疫调节活性[1]。FVS常作为废弃料被丢弃[2-3]。饲料中添加抗生素导致耐药性问题，增加消费者对抗生素残留在禽业生产中的关注度。开发绿色饲料，增强肉鸡免疫力成为研究关键[4]。

将FVS添加到规模饲养的肉鸡饲料中，通过测定肉鸡小肠绒毛高度(villous height, V)和隐窝深度(crypt depth, C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量，探讨FVS对肉鸡小肠绒毛形态和黏膜免疫指标的影响，为其深入研究及综合开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 FVS(食用菌生产企业馈赠)，自然风干，粉碎；OCT包埋剂(德国徕卡公司)；鸡IL-2、IL-4和S-IgA试剂盒(BPE60056、BPE60055、BPE60021；上海朗顿生物技术有限公司)；其余化学试剂均为分析纯。

1.2 试验动物及分组 4 500只1日龄(AA+)肉鸡(吉林省东丰县鹏翔牧业有限责任公司)随机分为5个处理组：对照组(饲喂吉林省东丰县鹏翔牧业有限责任公司常规日粮)、低剂量组(饲喂含2%FVS的常规日粮)、中剂量组(饲喂含4%FVS的常规日粮)、高剂量组(饲喂含6%FVS的常规日粮)和阶段饲喂组(于试验1～7、15～21、29～35 d饲喂含6%FVS的常规日粮)，除对照组外各剂量组日粮去除预混料中的抗虫剂、多酶制剂及植物营养添加剂等成分，不添加任何抗生素。每个处理组7个重复，试验期43 d。所有日粮均按等氮等能原则配置，营养标准满足NRC(1994)，以《GB/T 19664—2005》为饲养标准，常规免疫，自由采食和饮水。

1.3 试验方法

1.3.1 样品处理 于22 d和43 d，每个组重复3只AA+肉鸡，颈动脉放血处死，取十二指肠、空肠、回肠各2 cm肠段。

1.3.2 小肠绒毛形态的测定 4%多聚甲醛固定，30%蔗糖脱水。Leica CM1950冷冻切片机制作组织切片，H.E.染色，中性树胶封片。Leica DM2000生物显微镜观察小肠绒毛形态。各肠段取不相邻3张切片进行拍照，每张切片选取3处走向完整绒毛，Image-Pro Plus 6.0测量V和C。

1.3.3 小肠黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量的测定 生理盐水冲去肠道内容物，刮取肠黏膜，生理盐水10倍稀释，4 ℃匀浆，3 500 r/min(4 ℃)离心15 min，取上清。ELISA法测定十二指肠、空肠和回肠黏膜上清细胞因子IL-2、IL-4和S-Ig A含量，按试剂盒说明书进行测定。

1.3.4 数据处理与分析 SPSS22.0软件进行统计学处理， Ducan进行多重比较，试验结果以平均值±标准误(x±Sx)表示。

2 结果与分析

2.1 FVS对肉鸡小肠绒毛形态的影响

2.1.1 如表1，22日龄和43日龄，低剂量组和中剂量组十二指肠V/C显著高于对照组(Plt;0.05),高剂量组和阶段饲喂组十二指肠V/C与对照组相比无显著差异(Pgt;0.05)。

2.1.2 FVS对肉鸡空肠绒毛形态的影响 如表2，22日龄，阶段饲喂组空肠V/C显著高于对照组(Plt;0.05)，各剂量组空肠V/C与对照组相比无显著差异(Pgt;0.05)。43日龄，各组间空肠V/C无显著差异(Pgt;0.05)。

表1 FVS对肉鸡十二指肠绒毛形态的影响 (n=21)

注：同列数据后所标字母相异表示差异显著(Plt;0.05)，所标字母相同表示差异不显著(Pgt;0.05)，下表同

表2 FVS对肉鸡空肠绒毛形态的影响 (n=21)

2.1.3 FVS对肉鸡回肠绒毛形态的影响 如表3，22日龄，低剂量组和阶段饲喂组回肠V/C显著高于对照组(Plt;0.05)，中剂量组和高剂量组回肠V/C与对照组相比无显著差异(Pgt;0.05)。43日龄，中剂量组和阶段饲喂组回肠V/C显著高于对照组(Plt;0.05)，低剂量组和高剂量组回肠V/C与对照组相比无显著差异(Pgt;0.05)。

2.2 FVS对肉鸡小肠黏膜免疫指标的影响

2.2.1 FVS对肉鸡小肠IL-2含量的影响 如表4，22日龄，各剂量组和阶段饲喂组肉鸡小肠IL-2含量与对照组相比无显著差异(Pgt;0.05)。 43日龄，阶段饲喂组回肠IL-2含量显著高于对照组(Plt;0.05)。

表3 FVS对肉鸡回肠绒毛形态的影响 (n=21)

表4 FVS对肉鸡小肠IL-2的影响 (n=21)

2.2.2 FVS对肉鸡小肠IL-4的影响 如表5，22日龄，高剂量组十二指肠、空肠和回肠IL-4含量显著高于对照组(Plt;0.05)。43日龄，低剂量组、高剂量组和阶段饲喂组十二指肠IL-4含量与对照组无显著差异(Pgt;0.05)，各剂量组空肠和回肠IL-4含量与对照组无显著差异(Pgt;0.05)。

表5 FVS对肉鸡小肠IL-4的影响 (n=21)

2.2.3 FVS对肉鸡小肠S-IgA的影响 如表6，22日龄，中剂量组与阶段饲喂组十二指肠S-IgA含量显著高于对照组(Plt;0.05)，低剂量组空肠S-IgA含量显著高于对照组(Plt;0.05)，中剂量组和阶段饲喂组回肠S-IgA含量显著高于对照组(Plt;0.05)。43日龄，各剂量组十二指肠S-IgA含量无显著差异(Pgt;0.05)，低剂量组和阶段饲喂组空肠和回肠S-IgA含量与对照组无显著差异(Pgt;0.05)。

3 讨论

3.1 FVS对肉鸡小肠绒毛形态的影响 鸡肠黏膜生长、发育及健康状况直接影响其生长发育和免疫功能[5]。前期研究结果表明，FVS可促进肉鸡生长后期十二指肠和空肠发育。绒毛高度的增加使肠道表面积增加可促进吸收和消化[6]。邢亚丽等研究表明，树舌发酵浸膏多糖可显著改善肉鸡小肠黏膜结构，维持肠黏膜屏障结构，促进肉鸡健康生长[7]。V/C综合反映小肠的功能状态，比值增大，绒毛吸收能力变强。本试验结果提示，FVS可提高肉鸡小肠吸收能力。

表6 FVS对肉鸡小肠S-IgA的影响 (n=21)

3.2 FVS对肉鸡小肠黏膜免疫指标的影响 分泌型IgA(S-IgA)是黏膜表面主要的免疫球蛋白，黏膜免疫系统可抵抗病原菌入侵[8]。IL-4主要由Th2细胞分泌，促进IgA的分泌。Th2细胞在小肠黏膜中表达量较高。研究结果提示，FVS可提高肉鸡黏膜免疫功能。张彤瑶等研究表明，FVS可提高肉鸡血清IL-2和Ig-A含量，增强肉鸡T、B淋巴细胞免疫功能[9]。肠黏膜免疫功能与肠道菌群共同维持肠道健康。曾巧莉等研究结果显示，日粮中添加FVS可改善肉鸡肠道菌群结构[10]。根据以上结果可以推测FVS提高肉鸡免疫功能同时促进肠道有益菌生长。

4 结论

日粮中添加FVS可促进小肠吸收和消化功能，增强肉鸡黏膜免疫功能。

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EffectsofFlammulinavelutipesstembaseonMorphologyandImmuneIndexesofBroilerssmallintestinalmucosa

GAO Ya-song1, WANG Jian1, WEI Jia-li1, CHEN Mo1, SONG Hui1,2

(1. School of Life Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China; 2. Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

The experiment was conducted to study the effects of different contents ofFlammulinavelutipesstembase (FVS) as dietary supplements on morphology and immune indexes of broilers small intestinal mucosa. A total of 4500 one-day-old Arbor Acre+ (AA+) broilers were randomly divided into five groups with seven replications per group. The experimental period was 43 days. The detection indexes at 22 and 43 days were the villus height (VH, V), crypt depth (CD, C), IL-2, IL-4 and S-IgA of small intestinal. We concluded that diets of FVS could improve V/C, IL-2 IL-4 and S-IgA content of broilers.

Flammulinavelutipes; broilers ; intestinal ; immune

SONG Hui

S831.5

A

0529-6005(2017)10-0051-04

2016-12-26

吉林省经济菌物创新平台(2014-2016)

高雅松(1988-)，女(回族)，硕士，研究方向为生物化学与分子生物学，E-mail:gaoyasong2016@126.com

宋慧，E-mail:songhuinongda@163.com