3种驱虫药物对内蒙古呼盟地区绵羊胃肠道线虫驱杀效果研究

2017-12-01罗晓平敖登高娃詹树柏李军燕乌云塔娜耿万恒高海英

中国兽医杂志 2017年10期

罗晓平，敖登高娃，詹树柏，李军燕，巴金，乌云塔娜，耿万恒，高海英，张伟

(1.内蒙古自治区农牧业科学院兽医研究所，内蒙古呼和浩特 010031 ；2.内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特 010018 ；3.内蒙古自治区呼伦贝尔市新巴尔虎右旗动物疫控中心 , 内蒙古呼伦贝尔 021300)

罗晓平1,2，敖登高娃1,2，詹树柏1，李军燕1，巴金3，乌云塔娜3，耿万恒1，高海英1，张伟2

为了解草原放牧绵羊胃肠道线虫对目前常用驱虫药物的耐药情况，本研究选取呼伦贝尔草原放牧地区绵羊，采用伊维菌素、丙硫咪唑、氯氰碘柳胺钠分组给药，运用粪便虫卵减少试验进行耐药性田间检测。结果显示，伊维菌素组和丙硫咪唑组给药后30 d内试验所设时间点均无羊只粪便虫卵转阴，且平均EPG仍达800以上；氯氰碘柳胺钠组则在60 h时虫卵即开始全部转阴，30 d时仅有少数羊只检出虫卵。本试验结果进一步证实该地区绵羊胃肠道线虫对伊维菌素和丙硫咪唑产生了较强的耐药性，而对氯氰碘柳胺钠则相对敏感，研究结果为有效地防控家畜寄生虫病提供重要的基础研究资料。

伊维菌素；丙硫咪唑；氯氰碘柳胺钠；胃肠道线虫；耐药性

我国内蒙古地区是牛羊养殖大省，据“内蒙古统计年鉴(2015)”截止到2015年6月底的统计，全区羊的存栏数约为1亿零7百万只，其中绵羊为8 260万只。我区两大天然牧场呼伦贝尔和锡林郭勒，放牧绵羊数量庞大，寄生虫病复杂多样，其中线虫病占一半以上。每年都会因此给农牧民造成巨大的经济损失。特别是绵羊胃肠道线虫病是养羊业中最常见和最主要的寄生虫病，其感染率高，感染强度大，分布广泛，其中尤以捻转血矛线虫(Haemonchuscontortus)和细颈线虫(Nematodirus)为甚[1-2]。

长期以来，对这些线虫病的防治几乎主要依靠化学药物，但长期反复使用，易使虫体产生耐药性，近些年不少国家有这方面的报道。2004年，Anziani 报道，阿根延中部的血矛线虫对伊维茵素和苯丙咪唑类驱虫药产生了耐药性。同年，Suter在澳大利亚西部235个羊场调查发现,连续5年使用阿维菌素类药物驱虫后,产生耐药性,并造成了很大的经济损失。根据我们近些年对农牧业基层的寄生虫病防治情况的了解以及试验调查，发现不少地方的羊寄生性线虫已经对伊维菌素产生了耐药性[3-4]，农牧民普遍反映伊维菌素驱虫效果不佳。西藏、青海、甘肃等数个地区的牛羊驱虫临床药物试验中，都有类似的情况反映[5]。

鉴于内蒙古呼伦贝尔地区绵羊胃肠道线虫对常见驱虫药物的耐药情况尚未见报道，我们选取呼伦贝尔西旗一天然牧场，运用粪便虫卵减少试验对绵羊进行耐药性田间检测，为合理使用驱虫药物，有效防控家畜寄生虫病，提供重要的参考资料，同时也填补了国内在寄生性线虫耐药性研究领域中的空白。

1 材料与方法

1.1 试验药品伊维菌素，给药剂量0.2 mg/kg体重,内蒙古北奇药械有限责任公司；丙硫咪唑，给药剂量13 mg/kg体重，长春市腾宇兽药有限公司；氯氰碘柳胺钠，给药剂量5 mg/kg体重，成都中牧生物药业有限公司。

1.2 方法参照Coles 等[6]制定的世界兽医寄生虫学促进协会(WAAVP)关于蠕虫抗药性检测方法中的粪便虫卵减少试验进行，并做了适当的改进。

1.2.1 试验动物筛选选择试验前5个月未使用任何驱虫药驱虫的放牧绵羊，给药前1周对100只预选试验羊只逐只打耳标号、直肠采集新鲜粪便，带回实验室采用改良麦克马斯特虫卵计数法进行粪便虫卵检查-统计每克粪便虫卵数(EPG)。

1.2.2 试验分组及给药剂量依据EPG 检查结果，将感染线虫且EPGgt;300的羊分为4组，其中药物组3组，即伊维菌素组、丙硫咪唑组、氯氰碘柳胺钠组，对照组1组，每组羊只20只。分组时先将羊只按EPG排序，使用报数分组法分组。药物组依据试验药物的不同剂型采用相应给药途径或方法，对照组动物不给药。

1.2.3 粪便虫卵减少试验各试验组分别于给药后0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、30 d分别对试验组羊群直肠采粪进行EPG计数。粪便虫卵减少率按如下公式计算。

虫卵减少率(%)={(驱虫前虫卵数-驱虫后虫卵数)/驱虫前虫卵数}×100

2 结果

2.1 伊维菌素注射后不同时间点粪便平均虫卵计数结果伊维菌素给药后经直肠采集粪便检测结果显示，线虫感染强度总体呈缓慢下降趋势，给药30 d后粪便平均虫卵数由给药前的1 958减少为894(见图1)。

图1 3种药物给药后0 h～72 h各时间点平均EPG

2.2 丙硫咪唑口服后不同时间点粪便平均虫卵计数结果丙硫咪唑给药后经直肠采集粪便检测结果显示，线虫感染强度总体呈下降趋势，给药30d后粪便平均虫卵数由给药前的1274减少为890(见图1)。

2.3 氯氰碘柳胺钠注射后不同时间点粪便平均虫卵计数结果氯氰碘柳胺钠给药后经直肠采集粪便检测结果显示，驱虫30d后粪便平均EPG由1466下降为8，12h～24h粪便虫卵数快速减少，驱虫达到预期效果(见图1)。

图2 3种药物给药后30d粪便虫卵减少率比较

2.4 不同药物给药后各时间点粪便平均虫卵计数结果三种药物给药后，伊维菌素组和丙硫咪唑组羊只平均EPG均呈缓慢下降趋势。前者平均EPG由给药前1 958，驱虫30 d后减少为894，粪便平均减少率为54.35﹪；后者平均EPG由给药前1 274，驱虫30 d后减少为890，粪便虫卵平均减少率为54.51%；氯氰碘柳胺钠组在给药后的12 h～24 h内平均EPG急剧下降，60 h时趋于0，驱虫30 d后粪便虫卵平均减少率为99.58﹪(见图2)；对照组平均EPG呈锯齿形上下波动(见图1)。

3 讨论与小结

随着不同驱虫药物的使用，多重耐药性流行的问题也在不断产生。例如，Martin等(1989)用粪便虫卵减少试验和虫卵孵化试验，检测了丹麦15个地区的羊线虫对伊维菌素和丙硫咪唑的抗药性，结果表明,虫体对这两种药物都产生了很严重的抗药性。Maciel等(1996)用虫卵减少试验和幼虫发育试验检测了乌拉圭45个羊场，结果26.7%对伊维菌素产生耐药性，17.6%对丙硫咪唑产生耐药性，35.3%对两者的合剂产生耐药性。这就提示了羊胃肠道线虫多重耐药性流行的严重程度。多重耐药性现已成为一个全球性现象，据认为至今已存在于包括所有现用和已用过的抗蠕虫药物上[7-8]。

本试验结果显示，使用伊维菌素与丙硫咪唑驱虫后30 d，粪便虫卵减少率分别54.35%和54.51%，与对照组粪便虫卵减少率49.55%非常相近。这表明内蒙古呼伦贝尔地区绵羊胃肠道线虫对伊维菌素和丙硫咪唑同时产生耐药性，也同时证实了多重耐药性现象的存在。

使用氯氰碘柳胺钠驱虫后，60 h粪便虫卵即全部转阴，30 d后直肠采粪检测，仅含有极少的线虫虫卵，表明该地区绵羊胃肠道线虫对氯氰碘柳胺钠非常敏感。氯氰碘柳胺钠是一种广谱驱虫药，对多种吸虫类、线虫类和节肢动物的幼虫类虫体均有良好疗效，其抗线虫和抗节肢动物的幼虫驱杀活性则主要针对各种吸食血液或血浆的虫体。我们近几年在对呼伦贝尔地区进行流行病学研究时发现，该地区胃肠道线虫优势虫种为Haemonchuscontortus和Nematodirus，而这两种虫种均为吸血型虫体，加上本地区近20年从未用过氯氰碘柳胺钠，所以该药在本试验中较其他两种药物对线虫的驱杀作用最好。

综上所述，就相关资料以及我们自己的抗药性试验来看，近年来，内蒙古其他地区乃至国内家畜中寄生虫耐药性问题已非常严重，特别是伊维菌素类药物更具有代表性。因此本研究不仅为寄生性线虫病的有效防控，提供有价值的临床指导，也为深入研究线虫耐药机制提供素材来源。

[1] 蔡葵蒸. 羊胃肠线虫对常用驱虫药抗药性的初步研究[D]. 呼和浩特: 内蒙古农业大学博士学位论文, 2007.

[2] 郝成，杨晓野，蔡葵蒸，等.幼虫发育试验对毛圆科线虫抗药性的检测[J]. 中国兽医寄生虫病，2007，15(6)：13-17.

[3] 徐倩倩，郭时金，沈志强. 寄生虫耐药性检测方法研究进展[J]. 家畜生态学报，2013，34(10)：82-86.

[4] 蔡葵蒸，杨晓野，杨春生，等.用丙硫苯咪唑检测羊线虫抗药性的体外虫卵孵化试验[J].中国兽医科学，2007，37(08)：721-725.

[5] 蔡葵蒸，杨晓野，王晓亮，等. 宁夏羊胃肠道线虫对现行驱虫药的抗药性调查[J].中国兽医科学，2007，37(06):491-495.

[6] Coles G C, Bauer C, Borgsteede F H M,etal.World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP) methods for the detection of anthelmintic resistance in nematodes of veterinary importance[J].Vet Parasitol, 1992, 44(1/2):35-44.

[7] Eng J K, Blackhall W J, Osei-Atweneboana M Y,etal. Ivermectin selection on beta-tubulin: evidence inOnchocercavolvulusandHaemonchuscontortus[J]. Mol Biochem Parasitol, 2006,150(2): 229-235.

[8] Lopes W D Z, Teixeira W F P, Felippelli G,etal. Assessing resistance of ivermectin and moxidectin against nematodes in cattle naturally infected using three different methodologies[J]. Research in Veterinary Science, 2014, 96: 133-138.

ThestudyofanthelminthiceffectongastrointestinalnematodesofsheepbythreecurrentanthelminticsinInnerMongolia

LUO Xiao-ping1,2， AO Deng-gaowa1,2， ZHAN Shu-bai1， LI Jun-yan1， BA Jin3， WU Yun-tana3， GENG Wan-heng1， GAO Hai-ying1， ZHANG Wei2

(1. Inner Mongolia Academy of Agricultural amp; Animal Husbandry Sciences, Hohhot 010031, China; 2. Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease,Ministry of Agriculture, College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China; 3. Animal Epidemic Disease Control Center of New Barag Right Banner in Hulunbeier in Inner Mongolia, Hulunbeier 021300，China)

To understand the current situation of resistance of gastrointestinal nematodes in sheep to current anthelmintics(Ivermectin, Albendazole, Closantel Sodium), an investigation was carried out by faecal egg count reduction tests in HulunBuir, Inner Mongolia, China. The results showed that an average EPG of more than 800 was observed in ivermectin group and albendazole group after 30 days, but there were no trans-negative sheep. The trans-negative rate of eggs was 100 in closantel sodium group after 60 hours, and a few eggs were found until 30 days. It is showed that a serious resistance to ivermectin and albendazole was found in this regions, but sensitive to chlorine sodium.

Ivermectin ； Albendazole ； Closantel Sodium ； Gastrointestinal Nematodes ； Drug resistance

LI Jun-yan

S855.9+1

0529-6005(2017)10-0035-03

2016-12-16

公益性行业(农业)科研专项项目(No.201303037)；内蒙古自治区农牧业科学院创新基金项目(2016CXJJMa)

罗晓平(1987-)，男，博士生，主要从事家畜寄生虫病防治工作，E-mail:luoxpnmg@163.com

李军燕，E-mail:zhanshubai@126.com