异叶茴芹提取物抗炎止血凝血作用的实验研究

2017-11-28王张英王志新

云南中医中药杂志 2017年11期

关键词：抗炎

王张英+王志新

摘要：目的研究异叶茴芹提取物抗炎、止血、凝血作用功效，为异叶茴芹的潜在药用价值开发利用提供依据。方法选取健康小鼠，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀，测定异叶茴芹醇提液和水提液的抗炎作用效果；采用小鼠断尾法止血实验、小鼠载玻片法凝血实验评价异叶茴芹醇提液和水提液的止血和凝血作用效果。结果异叶茴芹提取物灌胃能减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀程度，水提液组其足肿胀抑制率达24.51%，缩短剪尾法所致小鼠出血时间，水提液组其缩短率为33.41%，加速实验小鼠的凝血时间，醇提液组其缩短率达47.59%。结论异叶茴芹提取物具有一定程度的抗炎、止血、凝血活性，具有综合利用前景。

关键词：异叶茴芹；抗炎；止血；凝血

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）11-0075-03

【Abstract】Objective： To study the anti-inflammatory， hemostatic and coagulation effects of extracts from Pimpinella diversifolia and to provide the basis for the development and utilization of its potential medicinal value. Methods： The healthy mice were selected to induce their ear swelling by xylene to determine the anti-inflammatory effect of ethanol extract and aqueous extract of Pimpinella diversifolia. The tail-cut hemostasis experiment and slide glass coagulation experiment were used to evaluate the effect of hemostatic and coagulation effects of ethanol extract and aqueous extract of Pimpinella diversifolia. Results： The intragastric administration of Pimpinella diversifolia extracts could reduce the degree of auricle swelling in xylene-induced mice. The inhibition rate of foot swelling in the aqueous extract group was 24.51%. The tail-cut hemostasis shortened the bleeding time of the mice， and the shortened rate of the aqueous extract group was 33.41% and the coagulation time of the mice was accelerated. The shortened rate of alcohol extract was 47.59%. Conclusion： The extracts of Pimpinella diversifolia has certain anti-inflammatory， hemostatic and coagulation activity and has comprehensive utilization prospect.

【Key words】Pimpinella diversifolia， anti-inflammatory， hemostasis， blood coagulation

异叶茴芹（Pimpinella diversifolia DC.）为伞形科茴芹属植物，别名为八月白、苦爹菜、山当归、鹅脚板、蛇倒退。野生植物资源丰富，是民间常用草药和野菜之一。以全草入药，具有温中散寒、宣肺祛痰、活血止痛、解毒消肿等作用[1-6]。茴芹属植物中主要含有挥发油及萜类化合物、香豆素类化合物、黄酮类化合物、甾醇类化合物和脂肪酸类化合物等[7]，这些化合物的存在，可以对异叶茴芹的药用功效给出合理的解释。异叶茴芹虽在民间用药中历史已久，但是其药用价值的挖掘工作还很有限，其植物提取物的动物实验至今还鲜有报道。笔者针对异叶茴芹提取物抗炎、止血、凝血作用功效展开了研究，可为异叶茴芹药用价值的开发利用提供实验依据和参考。

1材料和方法

1.1仪器和材料TDL-40B普通离心机（上海安亭科学仪器厂），RE-6000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），FA204B电子天平（上海精科天美科学仪器有限公司），DHG-9040A电热恒温鼓风干箱（宁波江南仪器厂）。

材料和试剂：异叶茴芹购自福建寿宁，除杂，放置于60℃的烘箱烘干，粉碎，过60目筛，得到异叶茴芹粉末，置干燥通风处保存。清洁级昆明小鼠，雌雄各半，27±3 g，由南华大学动物养殖实验基地提供。

95%乙醇（天津市北联精细化学品开发有限公司）、二甲苯（天津市大茂化学试剂厂）均为分析纯；无菌生理盐水；无菌水。

1.2方法

1.2.1异叶茴芹水提液和醇提液的制备称取异叶茴芹样品10 g置烧杯中，加蒸馏水200 mL浸泡2 h后，煮沸30 min，过滤，离心得上清液，加热浓缩至10 mL（浓度为1 g/mL）。水提液高压灭菌（120°C，15 min）后放入4℃冰箱密封保存備用。

称取异叶茴芹样品10 g置烧杯中，加入75%乙醇200 mL浸泡48 h，经离心过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至10 mL（浓缩液已不含乙醇，浓度为1 g/mL）。醇提液经微孔滤膜（0.22 μm）除菌后放入4℃冰箱密封保存，备用。endprint

1.2.2小鼠分组与饲喂将昆明小鼠常规饲养3天，然后选取健康昆明小白鼠，随机分为6组，每10只一组。标记异叶茴芹醇提物组（雄鼠）、异叶茴芹醇提物组（雌鼠）、异叶茴芹水提物组（雄鼠）、异叶茴芹水提物组（雌鼠）、生理盐水对照组（雄鼠）、生理盐水对照组（雌鼠），各组间小鼠体重均无显著性差异，饲养于25～28℃，相对湿度55～65%的清洁环境中，自由摄食和饮水，使用标准饲料。

1.2.3抗炎实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀[8-11]。实验前禁食给水6 h后，按照灌胃剂量为每只小鼠0.2 mL/次，连续6天。每只小鼠于末次给药后1 h分别行人工致炎，方法采用行右耳廓正反面均匀涂抹一定量的二甲苯，同时留取左耳不涂为正常对照，小鼠右耳廓致炎肿胀后1 h，采取断颈椎的方法处死小鼠，沿耳廓基线对称剪下小鼠两耳，使用6 mm打孔器于两耳同一部位切下、用精密电子分析天平称重，求其两耳质量差值，计算炎症肿胀程度，并根据公式统计肿胀抑制率。肿胀率（%）=[右耳片重（mg）-左耳片重（mg）]/左耳片重（mg）×100%，肿胀抑制率（%）=生理盐水组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/生理盐水组平均肿胀度×100%。

1.2.4止血实验采用剪尾法[12-15]。实验前禁食给水6 h后，按照灌胃剂量为每只小鼠0.2 mL/次，连续6天。末次给药后45 min，将小鼠固定于固鼠皿中，用手术剪将小鼠距尾尖1 cm处剪断，待血液自行溢出开始计时，每隔20 s用滤纸吸去血滴1次，直至出血自然停止（滤纸吸时无血为止），即为出血时间。以人工创面形成到出血停止所经时间作为出血时间。

1.2.5凝血实验采用玻片法[16-18]。实验前禁食给水6 h后，按照灌胃剂量为每只小鼠0.2 mL/次，连续6天。末次给药后1 h，将小鼠固定于固鼠皿中，将小鼠剪尾采血，滴于载玻片，血滴直径约5 mm，立即用秒表计时，每隔30 s用清洁的7号注射针头自血滴边缘向里轻轻挑动1次，并观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止，所历时间即为凝血时间，记录凝血时间。

1.2.6数据处理实验数据用（x±s）表示，采用SPSS 19.0统计软件进行方差分析（One-way ANOVA）。P<0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著。

2结果

2.1抗炎实验结果实验结果显示，异叶茴芹醇提物组和异叶茴芹水提物对二甲苯所致小鼠的耳廓肿胀度均具有极为明显的影响作用（P<0.01）。说明异叶茴芹提取物含有抗炎活性成分，能降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀的程度。异叶茴芹水提取液组的肿胀抑制率比醇提取液组的肿胀抑制率高，说明异叶茴芹的水提取液比醇提取液具有更好的抗炎效果。异叶茴芹的醇提取液组与水提取液组作用效果差别不显著（P>0.05）。见表1。

2.2止血实验结果实验结果表明，异叶茴芹水提物和醇提物均具有极明显的止血效果（P<0.01），且异叶茴芹水提取液组对小鼠出血时间的缩短率（33.41%）比乙醇提取液组（21.32%）大，但异叶茴芹水提取液组对小鼠的出血时间的作用与醇提取液组比较并没有显著性差异（P>0.05）。见表2。

2.3凝血实验结果由实验结果可以得出，异叶茴芹醇提取液和水提取液均能明显缩短凝血时间，与空白对照组相比，具有极显著差异（P<0.01）。此外，异叶茴芹醇提取液组对小鼠的凝血作用时间缩短率（47.59%）比水提取液组（35.05%）大。但异叶茴芹的醇提取液组对小鼠的凝血作用与水提取液组比较，两者无显著性差异（P>0.05）。见表3。

3讨论

异叶茴芹是民间常用药，具有理气止痛、解毒消肿、止血抗菌等作用，但是有关异叶茴芹提取物的药效学动物实验研究较少。二甲苯引起的神经源性肿胀可作为常见的炎症模型来评价炎症的严重程度，本实验结果显示，异叶茴芹醇提取物和水提取物均能极为明显地减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀程度，异叶茴芹的醇提取物组和水提取物组的肿胀抑制率分别为15.83%和24.51%，说明异叶茴芹在一定程度上对组织肿胀具有抑制作用，具有抗炎药理作用。此外，异叶茴芹提取物能明显缩短实验小鼠断尾后的出血时间以及玻片法实验中凝血时间，说明异叶茴芹具有一定的止血和凝血作用。本实验为今后进一步研究异叶茴芹抗炎、止血、凝血活性的中药有效成分和临床应用提供参考，也为开发利用异叶茴芹中草药材资源提供了实验依据，但关于异叶茴芹提物抗炎、止血、凝血的作用机制有待深入研究。

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