飞龙掌血醇提物药理作用研究及急性毒性试验

赵春梅+刘发梅+杨和金

摘要：目的 观察飞龙掌血醇提物的药理作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭体法、小鼠二甲苯耳廓肿胀、小鼠剪尾法及玻片法止血实验，以及急性毒性试验。结果 飞龙掌血醇提物能减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度，促进小鼠凝血时间，但不能促进小鼠剪尾止血时间。飞龙掌血醇提物最小致死量为10.56 g/kg.bw（相当于生药245.58 g/kg.bw），死亡率为10%。最大耐受量为9.50 g/kg.bw（相当于生药220.93 g/kg.bw），死亡率为0%。结论 提示飞龙掌血醇提物具有明显的镇痛、抗炎、止血作用，且具有一定毒性。

关键词：飞龙掌血醇提物；镇痛；抗炎；止血

中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2017）02-0080-03

【Abstract】Objective： To observe the pharmacological action and acute toxicity of alcohol extract from Asiatic Toddalia Root. Methods： The experiments were conducted by mouse acetic acid writhing method， mouse xylene ear swelling， mouse tail cut method and slide method hemostasis test and acute toxicity test. Results： The ethanol extract from Asiatic Toddalia Root could decrease the number of writhing reaction induced by acetic acid， decrease the ear swelling of mice induced by xylene and promote the clotting time of mice， but could not promote the hemostasis time of mice. The minimum lethal dose of the ethanol extract was 10.56 g/kg. bw （equivalent to crude drug 245.58 g/kg.bw）， and the mortality was 10%. The maximum tolerance was 9.50 g/kg.bw （equivalent to 220.93 g/kg.bw of crude drug）， and the mortality was 0%. Conclusion： The study presents alcoholic extract from Asiatic Toddalia Root has obvious analgesic， anti-inflammatory and hemostatic effects， with certain toxicity.

【Key words】alcohol extract from Asiatic Toddalia Root， analgesic， anti-inflammatory， hemostasis

飞龙掌血为芸香科植物飞龙掌血Toddalia asiatica（L.）Lam.[Paullinia asiatica L.]的根或根皮。全年均可采收，挖根，洗净，鲜用或切段晒干。功效：祛风止痛；散瘀止血；解毒消肿。主风湿痹痛；腰痛；胃痛；痛经；经闭；跌打损伤；劳伤吐血；衄血；瘀滞崩漏；疮痈肿毒[1]。对飞龙掌血的药理作用研究极少，因此，本文对飞龙掌血的乙醇提取物进行了药理研究，探讨其在镇痛、抗炎、止血方面的药理作用，为将来开发应用飞龙掌血提供实验依据，现将实验结果报道如下：

1 实验材料

1.1 药物 飞龙掌血醇提取物，由云南省药物研究所提供，70%乙醇提取3次，减压回收，干燥。提取率为46.1%。使用时用纯水配制。药效试验给药剂量以急性毒性试验结果为依据确定。阿司匹林肠溶片，100 mg/片，Bayer Schering Pharma生产，批号：BJ10778；云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号：ZAA1323；冰醋酸，天津市天达净化材料精细化工厂，批号：020112；二甲苯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号：20090831。

1.2 动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供。许可证号：SCXK（粤）2013-0002。小鼠分性别饲养于空调实验室内，室温25±2℃，相对湿度40～70%，喂颗粒标准饲料，自由饮水和摄食。

1.3 统计方法 实验结果以（x±s，n）表示，n是每组动物数目。试验数据采用SPSS 16.0统计软件进行“Independent-Samples T Test”检验。

2 方法

2.1 镇痛试验 取小鼠48只，雌雄各半，随机分为4组，组别及剂量如表1，按照表1剂量ig给药，每日1次，连续8天。末次给药后45min，ip0.6%冰醋酸0.1mL/10 g/只，记录15min内的扭体反应（小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部抬起反应为准）次数，并计算其抑制率。 實验结果见表1。

飞龙掌血醇提取物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相当于生药69.77 g/kg，139.53 g/kg）的剂量连续灌胃给药3天，2组均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，抑制率分别为：53.16%、47.88%，尤以3.0 g/kg，6.0 g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出镇痛作用。

2.2 抗炎试验 选用小鼠48只，按体重随机分为4组，每组雌雄各6只，分组及给药情况见表2。各组均预先每日灌胃给药1次，连续9天，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20 mL/kg体重。末次给药后30 min，各组小鼠于右耳两面均匀涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂为对照。致炎后1h脱颈椎处死动物，用直径6 mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，取耳片称重，以两耳片重量之差作为肿胀度。实验见表2。

飞龙掌血醇提取物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相当于生药69.77 g/kg，139.53 g/kg）的剂量连续灌胃给药4天，2组均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，抑制率分别为：45.84%、41.14%，尤以3.0 g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出抗炎作用。

2.3 止血试验（剪尾法） 取小鼠48只，体重（20±2）g，雌雄各半，随机分为4组，按照剂量ig给药，每日1次，连续4天。末次给药后45 min，将小鼠四肢固定在操作台上用剪刀将小鼠尾尖剪断2 mm，待血液溢出时，用秒表开始计时，每隔30 s用滤纸吸去血滴直至血液不再溢出为止，计算止血时间，进行统计学检验。实验见表3。

飞龙掌血醇提物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相当于生药69.77 g/kg，139.53 g/kg）的剂量连续灌胃给药4天，2组均能不同程度促进小鼠剪尾止血时间，促进率分别为：29.41%、38.24%，但与空白对照组相比较没有显著性差异。未显示出止血作用。

2.4 止血试验（玻片法） 选用18～22 g小鼠48只，按体重随机分为4组，每组雌雄各6只，各组均预先每日灌胃给药1次，连续5天，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20 mL/kg体重。末次给药 45 min后毛细管眼眶取血，滴于载波片，血滴直径约 5 mm，立即用秒表记时。每隔30 s用清洁的7号注射针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止即为凝血时间。见表4。

飞龙掌血醇提物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相当于生药69.77 g/kg，139.53 g/kg）的剂量连续灌胃给药5天，2组均能不同程度缩短小鼠摘眼球凝血时间，抑制率分别为：49.32%、53.29%，与空白对照组相比较具有显著性差异（P<0.05，P<0.05）。显示出止血作用。

2.5 小鼠急性毒性实验

2.5.1 正式实验 根据预实验的结果，将KM小鼠，60只随机分为3组，即溶媒对照组和飞龙掌血10.56、9.50 g/kg.bw2个剂量组，每组20只，♀♂各10只。动物禁食不禁水约6～6 h 21 min后，按40 mL/kg体重一次灌胃给予相应供试品，观察其急性毒性反应和死亡情况，以后每天观察1次，连续14天；于给药第4、7、14天称量体重；观察结束处死动物，大体解剖观察各动物脏器、器官的体积、颜色、质地等有无明显异常。

2.5.2 试验结果与分析

2.5.2.1 毒性反应 小鼠灌胃给予供试品飞龙掌血醇提物后，在4 h内出现毒性反应，主要表现为运动减少、俯卧等，死亡动物出现惊厥、抽搐、角弓反张等反应。至第2天恢复。给药组动物的毒性反应见表5。

2.5.2.2 死亡情况 观察期内10.56 g/kg.bw雌性小鼠死亡1只，雄性小鼠死亡1只，死亡率为10%；9.50 g/kg.bw剂量组无小鼠死亡，死亡率为0%。

2.5.2.3 体重 试验期间，给药后第3、7、14天，各剂量组小鼠体重持续增长，与溶媒对照组比较无显著性差异（P>0.05）。见表6。

2.5.2.4 解剖观察 观察14天结束后脱颈椎处死的动物进行大体解剖观察，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各组织和器官的体积、颜色、质地等，飞龙掌血醇提物各剂量组、溶媒对照组各小鼠器官均无肉眼所见异常。

2.5.3 评价与结论 在本实验条件下，对飞龙掌血醇提物不同剂量进行24 h内小鼠单次灌胃给药急性毒性试验，可见动物于4 h内出现毒性反应，主要表现为运动减少、俯卧等，死亡动物出现惊厥、抽搐、角弓反张等反应。至第2天恢复。试验结束对存活动物进行大体解剖观察，各组动物脏器、器官的体积、颜色、质地等均未见明显异常。飞龙掌血醇提物24 h内小鼠灌胃给药最小致死量为10.56 g/kg.bw（相当于生药245.58 g/kg.bw），死亡率为10%。最大耐受量为9.50 g/kg.bw（相当于生药220.93 g/kg.bw），死亡率为0%。

3 讨论与小结

飞龙掌血是云南民间常用药。具有祛风止痛；散瘀止血；解毒消肿的功效。飞龙掌血药理作用的活性成分及其作用机制研究较少。为了探讨和开发飞龙掌血的药用价值，本文对其进行了镇痛、抗炎、止血药理作用的实验研究。结果表明，急性毒性实验显示，飞龙掌血醇提物24 h内小鼠灌胃给药最小致死量为10.56 g/kg.bw（相当于生药245.58 g/kg.bw），死亡率为10%。最大耐受量为9.50 g/kg.bw（相当于生药220.93 g/kg.bw），死亡率为0%。表明其具有一定毒性。飞龙掌血能抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫胀，可显著缩短小鼠凝血时间，说明飞龙掌血具有镇痛作用、抗炎作用、止血作用。本实验结果为飞龙掌血将来产品研发和临床应用提供了科学依据。

参考文献：

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999.

（收稿日期：2016-10-11）