异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织中SP、AchE的表达*

刘凤霞 毛吾兰•买买提依明 阿卜杜热伊木江•如则 朱彦刘莹 张盼盼 阿地力江•伊明**

1.新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室（乌鲁木齐 830011）；2.新疆医科大学基础医学院生物学教研室；3.新疆克拉玛依市人民医院

·论 著·

异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织中SP、AchE的表达*

刘凤霞1毛吾兰•买买提依明2阿卜杜热伊木江•如则1朱彦刘莹3张盼盼1阿地力江•伊明1**

1.新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室（乌鲁木齐 830011）；2.新疆医科大学基础医学院生物学教研室；3.新疆克拉玛依市人民医院

目的研究异常黏液质型阳痿病证大鼠模型阴茎组织中P物质（SP）、乙酰胆碱酯酶（AchE）的表达与伊木萨克片的影响，探讨其生物学意义。方法取100只正常雄性SD大鼠，随机取10只作为正常对照组（N），余90只是造模组，采用湿寒环境和饮食方法建立异常黏液质证候大鼠模型，根据勃起和交配实验，筛选出44只阳痿病证大鼠模型，并将其随机分为病证模型组（A1）、病证自然反证组（A2）、病证药物反证组（A3）。反证后，免疫组化方法检测阴茎组织中SP、AchE的表达。结果（1）大鼠阴茎组织中SP表达：A1、A2和A3组较N组显著增高（P＜0.05）；A3组较A1、A2组显著降低（P＜0.05）。（2）大鼠阴茎组织中AchE表达：A1、A2组较N组显著降低（P＜0.05）；A3组较A1组显著升高（P＜0.05）。结论异常黏液质型阳痿病证大鼠模型阴茎组织中SP显著增高、AchE显著降低，对证维药伊木萨克片可能通过下调SP、上调AchE表达对异常黏液质型阳痿病证大鼠模型发挥作用。

伊木萨克片; 阳萎; P物质; 乙酰胆碱酯酶

阳痿（impotence），也称勃起功能障碍（erectile dysfunction, ED），是男子最常见的性功能障碍之一,虽然不会危及生命,却与患者的生活质量、性伴侣关系、家庭和谐息息相关,也是多种身体疾病的重要早期预警因子。欧洲泌尿外科协会（EUA）ED指南（2015版）中资料显示, ED在世界各地出现较高的患病率和发病率[1,2]。维吾尔医学（维医）作为传统医学宝库中重要成员之一，在男科疾病，尤其是ED、早泄和少、弱精子症等疾病的诊疗中有着举足轻重的作用。本研究团队前期研究[3-8]以维医理论为指导，建立了异常黏液质证候和阳痿病证大鼠模型，其勃起功能和交配能力等明显减退，对其阴茎组织的形态学研究发现，水肿、纤维化等炎症反应明显，采用对证维药伊木萨克片干预后，有显著的修复作用。本研究拟检测异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织中P物质（SP）和乙酰胆碱酯酶（AchE）的表达，并观察对证维药伊木萨克片干预后对其的影响，旨在发现异常黏液质型阳痿更多的发病机制和药物的作用靶点。

材料与方法

一、实验动物

100只正常的雄性（SD）大鼠，20只正常的雌性大鼠，体质量（200±20）g，均由新疆医科大学实验动物中心提供。

二、主要仪器与试剂

人工气候箱（上海博迅实业有限公司），阿朴吗啡（APO，美国Sigma公司），黄体酮（浙江仙琚制药股份有限公司），雌二醇（宁波市三生药业有限公司），伊木萨克片（新疆和田维吾尔药业有限责任公司，国药准字Z65020144，规格0.5g），鼠抗兔抗体SP、AchE（美国Abcam公司），免疫组化检测试剂盒（北京中杉金桥公司），DAB显色试剂盒（北京中杉金桥公司）。

三、实验方法

（一）动物分组和模型的建立

100只正常雄性SD大鼠中，随机取10只作为正常对照组（N），余90只作为造模组。异常黏液质型阳痿病证大鼠模型的建立及阴茎取材方法见文献[3-8]。从造模组中筛选出44只阳痿病大鼠模型，并将其分为病证模型组（A1）15只、病证自然反证组（A2）15只和病证药物反证组（A3）14只。

（二）免疫组化

严格按照试剂盒步骤操作，封片后显微镜观察并采集图像。结果按文献方法量化[8]。

（三）统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件包处理实验数据。计量资料用均数±标准差（±s）进行统计描述，多组之间数据比较采用单因素方差分析（ANOVA），检验水准α = 0.05。

结 果

一、大鼠阴茎组织中SP表达

与N组比较，A1、A2和A3组大鼠阴茎组织中SP表达明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与A1组比较，A2组大鼠阴茎组织中SP表达差异无统计学意义（P＞0.05）；A3组大鼠阴茎组织中SP表达显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与A2组比较，A3组大鼠阴茎组织中SP表达显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），见图1、表1。

二、大鼠阴茎组织中AchE表达

与N组比较，A1、A2组大鼠阴茎组织中AchE表达明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。与A1组比较，A2组大鼠阴茎组织中AchE表达差异无统计学意义（P＞0.05）；A3组大鼠阴茎组织中AchE表达明显增多（P＜0.05），差异有统计学意义。与A2组比较，A3组大鼠阴茎组织中AchE表达增多，但差异无统计学意义（P＞0.05），见图1、表1。

讨 论

维医通过2500多年的发展，汲取了多种医学的精华，已经形成了完整、独特的理论体系，系统阐释了人体与外界的辩证关系，由此生成诊治疾病的治疗学说和药物学说[9]。体液学说是维医各种病证诊断、分型的核心理论和辨证施治的基础[10,11]。

图1 免疫组化检测大鼠阴茎组织中SP和AchE表达(×400）

表1 免疫组化检测大鼠阴茎组织SP、AchE表达（±s）

注: 与N组比较，*P＜0.05；与A1组比较，△P＜0.05；与A2组比较，▲P＜0.05

10 31.8±11.7 172.7±44.0 A1 15 258.3±39.5* 92.9±45.0*A2 15 202.3±69.3* 106.3±50.0*A3 14 70.0±25.8*△▲ 147.5±54.6△分组 样本量(只) SP AchE N

本课题组前期研究[3-8]基于维医理论，成功建立了异常黏液质证候和阳痿病证大鼠模型，对其生物学表征、性功能与交配行为、性腺轴、甲状腺轴、肾上腺轴等生殖生物学和形态学方面的改变进行了研究，并研究了异常黏液质型阳痿、早泄对证治疗特色维药伊木萨克，研究结果发现其可增强大鼠勃起功能和性行为，其作用机制涉及神经内分泌网络、NO-cGMP通路等。进一步研究结果发现异常黏液质型阳痿大鼠模型出现肝细胞损伤及蛋白质和脂代谢的紊乱，阳痿关键靶器官（阴茎）形态学研究，发现有水肿、纤维化等炎症反应，对证维药伊木萨克片干预后，具有显著的修复作用。

SP在炎症时的免疫细胞募集环节中发挥着重要作用，可以调节免疫功能和炎症反应[12]。本研究发现，SP在A1组大鼠阴茎组织中表达较N组明显增多，说明SP可能参与异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织炎症过程。A2组较A1组减少，差异不明显，但较N组明显增多，提示去除湿寒环境、饮食的造模条件，经过自然反证后，SP虽有降低，但仍然比正常组大鼠表达水平增高；A3组较A1、A2组明显减少，说明经过对证维药伊木萨克片干预后，SP表达明显减少，反证结果明显优于自然反证，提示伊木萨克片可能通过下调阴茎组织中SP表达水平，减轻阴茎组织炎症反应，对异常黏液质型病证大鼠发挥作用。

AchE是乙酰胆碱（Ach）的水解酶，其活性增加说明胆碱能神经兴奋性增高[13]。近年有研究报道[14]，胆碱能抗炎通路是一条神经-免疫调节通路，是胆碱能神经及其递质ACh调节免疫反应的通路，抑制多种促炎因子的产生。炎症反应时Ach减少，阻碍抗炎效应。 本研究发现，大鼠阴茎组织中AchE表达，A1组较N组显著降低，提示胆碱能神经通路抑制可能促进异常黏液质病证大鼠模型的建立，加剧此模型阴茎组织的炎症反应；A2组较A1组增高，差异不显著，但仍较N组显著降低，提示去除湿寒环境和湿寒饮食的造模条件，经过自然反证，AchE虽然有一定程度的增高，但仍然比正常组大鼠低；A3组较A1组显著升高，较A2组升高，较N组无显著差异，提示经过对证维药伊木萨克片干预后，AchE显著增高，反证结果优于自然反证，与正常大鼠无显著差别，说明伊木萨克片可能通过上调AchE表达，减轻阴茎组织炎症反应，对异常黏液质证型阳痿大鼠发挥作用。

综上所述，异常黏液质型阳痿病证大鼠模型中SP表达显著增高、AchE表达显著降低，对证维药伊木萨克片可能通过下调SP、上调AchE表达调控炎症反应发挥作用。

1 中国医学百科全书编辑委员会.中国医学百科全书维吾尔医学分册. 上海: 上海科学技术出版社, 2005: 120-124

2 中国中西医结合学会男科专业委员会.勃起功能障碍中西医结合诊疗指南(试行版). 中华男科学杂志 2016;22(8): 751-757

3 阿地力江•伊明, 潘建春, 哈木拉提•吾甫尔, 等. 几种不同方法建立维医异常黏液质阳痿病证模型的研究. 新疆医科大学学报 2010; 33(11): 1275-1280

4 阿地力江•伊明, 范强, 哈木拉提•吾甫尔, 等. 维医异常黏液质阳痿病证动物模型的建立. 中国男科学杂志2011; 25(9): 3-9

5 阿地力江•伊明, 范强, 潘建春, 等. 维医异常黏液质证候与阳痿病证大鼠性行为学改变的研究. 中国男科学杂志 2011; 25(9): 20-23

6 朱彦刘莹, 买买提祖农•买苏尔, 刘凤霞, 等. 伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证模型大鼠阴茎组织形态学的影响. 中国男科学杂志 2015; 29(6): 9-14

7 买买提祖农•买苏尔, 朱彦刘莹, 刘凤霞, 等. 异常黏液质证侯大鼠模型阴茎组织形态学改变的研究. 新疆医科大学学报 2015; 38(6): 687-690, 695

8 朱彦刘莹. 维医异常黏液质型阳痿病证模型大鼠性腺轴与NO-cGMP通路改变的实验研究. 新疆医科大学2015

9 耿东升. 维吾尔医药基本理论及其药物研究进展(上).中国民族医药杂志 2006; 13(3): 5-6

10 哈木拉提•吾甫尔. 维医气质、体液论及其现代研究.乌鲁木齐: 新疆科学技术出版社, 2003: 29-41

11 巴吐尔•买买提明. 复杂性疾病维吾尔医异常黑胆质证的代谢组学研究. 湖南: 中南大学(长沙) 2011

12 张世红, 赵晏. P物质的免疫调节作用. 生理科学进展2002; 33(3): 235-238

13 朱金照, 冷恩仁, 张捷, 等. 白术对大鼠肠道乙酰胆碱酯酶及P物质分布的影响. 中国现代应用药学 2003; 20(1):14-16

14 刘芬, 赵宁, 李东海, 等. 乙酰胆碱对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的影响. 中华危重病急救医学 2015;27(10): 811-815

（2017-04-08收稿）

SP and AchE expression in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rats model and the role of Yimusake＊

Liu Fengxia1, Maimaitiyiming Maowulan2,Ruze Abudureyimujiang1, Zhu yanliuying1, Zhang Panpan1, Adilijiang Yiming1**
1Department of Human Anatomy, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi,830011,China;2 Department of Biology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi; 3.The people's hospital of xinjiang Kelamayi

Adilijiang Yiming, E-mail: adljym@163.com

ObstractTo study the roles of Yimusake on SP and AchE expressions in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rats model.MethodsA total of 100 mature male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups. Rats in model group (n = 90) were treated with cold-wet environment and diet, and rats(n = 10) in normal control group with normal environment and diet. Biological parameters and sexual behavior of the rats were observed for 20 weeks until establishment of abnormal phlegmatic syndrome rat model. Through APO erection test,we selected impotence rat model, the rats were randomly divided into 3 groups (A1, A2, A3) and disproved for 2 weeks. The expressions of SP and AchE were detected by immunohistochemistry.Results(1)SP expression in A1、A2、A3 groups were increased compared with that in N group (P＜0.05); SP expression in A3 group was decreased compared with that in A1、A2 group (P＜0.05).（2）AchE expression in A1、A2 groups were decreased compared with that in N group(P＜0.05);Ache expression in A3 group was increased compared with that in A1 group (P＜0.05).ConclusionHigher expression of SP and lower expression AchE occurred in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rat model. Yimusake might play key roles in treatment of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rat model via regulating the SP and AchE expression.

Yimusake; impotence; Substance P; Acetylcholinesterase

10.3969/j.issn.1008-0848.2017.05.001

中国分类号R698.1

资助：国家自然科学基金联合基金项目（81160470,81260581）

**通讯作者,E-mail：adljym@126.com