Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2在鼻息肉中的表达

韩雪，陈颖，陈长祥

（营口市中心医院耳鼻喉科，辽宁 营口 115000）

Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2在鼻息肉中的表达

韩雪，陈颖，陈长祥

（营口市中心医院耳鼻喉科，辽宁 营口 115000）

目的 检测鼻息肉中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2的表达情况，研究这三种因子在鼻息肉发病中所起到的作用。方法 设定50例鼻息肉组织为实验组，30例下鼻甲黏膜组织为对照组,应用实时定量-聚合酶链反应（RT-PCR），测定两组中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2的mRNA的表达水平，应用统计学的方法，对其相关性进行分析。结果 Bcl-2的mRNA在实验组的相对表达量RQ（4.28±0.79）与对照组的相对表达量RQ（1.27±0.31）比较有明显的差异；Fas的mRNA在实验组的相对表达量RQ（1.42±0.31）与对照组的相对表达量RQ（10.90±1.92）比较有明显的差异；Eotaxin-2的mRNA在实验组的相对表达量RQ（2.47±0.77）与对照组的相对表达量RQ（1.69±0.67）比较有明显的差异；Bcl-2与Eotaxin-2二者呈正相关；Eotaxin-2与Fas二者无相关性；Bcl-2与Fas二者无相关性。结论Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2在鼻息肉发生发展中起到了重要作用。

鼻息肉；Bcl-2；Fas；嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2

鼻息肉（NP）是耳鼻喉科的一种常见病及多发病，这种公认的慢性炎症是在多种致病因素作用下产生的[1]。主要表现为基质黏膜水肿、黏膜下血管及间质增生、大量嗜酸性粒细胞（EOS）浸润、伴有浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞等炎性细胞浸润，腺体呈囊性扩张。基于这种改变，重力使水肿的黏膜下垂形成NP[2]。迄今为止NP的发病机制仍不清晰，但其复杂程度是公认的[3]。但有研究表明在EOS浸润、活化刺激鼻息肉形成的过程中，众多的细胞因子也起到了重要作用[4]。根据EOS高浓度聚集导致的NP形成，这一常见的发病因素暨感染因素以及细胞凋亡及细胞因子的重要作用[5]，我们选择了Bcl-2、Fas及与嗜酸性粒细胞趋化密切相关的趋化因子Eotaxin-2，这三种因子作为研究对象，通过研究Bcl-2、Fas及Eotaxin-2这三种因子在鼻息肉中的表达，探讨三种因子在鼻息肉发病中的作用及其之间的相互作用对鼻息肉发生发展的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 鼻息肉组织标本来源于营口市中心医院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科行鼻内镜下鼻息肉手术切除的患者50例为实验组,男28例,女22例,年龄21～68岁。选择的对象要求排除变态反应性鼻炎、支气管哮喘病史及对阿司匹林的耐受不良。术前无皮质类固醇激素、抗组胺及抗生素等相关治疗。下鼻甲黏膜组织标本来源于营口市中心医院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科慢性肥厚性鼻炎在鼻内镜下行下鼻甲缩容术即下鼻甲骨黏膜下切除术的患者30例为对照组,男16例,女14例，年龄27～56岁，实验组鼻息肉组织及对照组正常下鼻甲黏膜组织均液氮冻存。

1.2 方法

1.2.1 引物的设计[6]在BLAST搜索针对Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的基因序列，设计特异性引物后经UCSC验证，以βactin为内参。引物合成由大连宝生物科技有限公司提供。

1.2.2 提取RNA[7-8]①1mLRNAiso Plus加入冻存碎裂的组织中，不断吹打混匀。②当不可见固体成分以后，室温静置5min后组织细胞充分裂解。③加入氯仿0.2mL，剧烈震荡15 s，乳化后，静置5min。④12 000 g，4 ℃离心15min,液体分三层,无色上层水相可分离RNA、中层和红色底层有机相可分离DNA和蛋白，缓慢吸取无色上清。⑤加等量体积异丙醇颠倒混匀，沉淀RNA，冰上静置10min。⑥12 000 g，4℃离心10min,弃上清，加1mL 75%乙醇，缓慢颠倒洗涤DNA。⑦12 000 g，4℃离心5min,弃上清，吸取乙醇，室温空气中干燥5min。⑧向干燥过的沉淀物加入100μLDEPC水溶解RNA沉淀。⑨RNA浓度检测：酶标仪检测RNA浓度，每次上样1 uL，重复3次，取平均值。

1.3 统计学方法 选取SPSS 17.0统计学软件，计量资料采用“x±s”表示,组间比较采用t检验,计数资料以率（%）表示,采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组和对照组中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2的mRNA的表达 ①Bcl-2的mRNA在实验组的表达RQ为（4.28±0.79），在对照组的表达RQ为（1.27±0.31），即Bcl-2在实验组的表达要强于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。②Fas的mRNA在实验组的表达水平RQ为（1.42±0.31），在对照组的表达RQ为（10.90±1.92），即Fas在实验组的表达要弱于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。③Eotaxin-2的mRNA在实验组的表达RQ为（2.47±0.77），在对照组的表达RQ为（1.69±0.67），即Eotaxin-2在实验组的表达水平要高于对照组的表达水平，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 实验组和对照组中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相对表达量

表1 实验组和对照组中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相对表达量

P值＜0.05＜0.05＜0.05项目Bcl-2 Fas Eotaxin-2实验组（n=50）4.28±0.79 1.42±0.31 2.47±0.77对照组（n=30）1.27±0.31 10.90±1.92 1.69±0.67 t值8.92 5.32 5.61

2.2 实验组Bcl-2、Fas和嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2的mRNA相对表达量之间的相关性分析 实验组中三个因子的mRNA相对表达量统计学相关性分析结果如下：Bcl-2与Eotaxin-2（r=0.581，P＜0.05）；Eotaxin-2 与 Fas（r=-0.047，P＞0.05）；Bcl-2 与 Fas（r=-0.174，P＞0.05）；提示Bcl-2与Eotaxin-2表达呈正相关，而Fas和Bcl-2及Eotaxin-2的表达无相关性。

3 讨论

3.1 Bcl-2与鼻息肉的关系 Bcl-2及其相关蛋白在细胞凋亡这一过程的调控中扮演着重要的角色[9]。本文通过RTPCR的检测方法研究50例鼻息肉组织（实验组）及30例下鼻甲黏膜组织（对照组)中Bcl-2mRNA的表达情况，发现其在是实验组的相对表达量高于对照组，实验组RQ（4.28±0.79），对照组RQ（1.27±0.31），差异有统计学意义(P＜0.05)。本实验结果同以往实验结果一致[10]，即在鼻息肉组织中表达增多，Bcl-2有抑制凋亡的作用，在鼻息肉形成的过程中起到了促进其发生发展的作用。

3.2 Fas与鼻息肉的关系 本文通过RT-PCR的方法得出其作用的结论：Fas在实验组中的表达要低于对照组，其在NP中的表达RQ（1.42±0.31）与下鼻甲黏膜组织中表达RQ（10.90±1.92）比较差异有统计学意义（P＜0.05）。即在鼻息肉组织中Fas呈现低表达，同时在下鼻甲黏膜组织中高表达。鼻息肉上皮细胞因此而过度增殖，导致鼻息肉体积的不断增大，间质中出现新腺体的形成。因此Fas是NP形成中的一个重要的细胞因子。

本实验结果提示：Eotaxin-2在鼻息肉组织中的表达量RQ（2.47±0.77），在下鼻甲黏膜组织中的表达量RQ（1.69±0.67）比较差异有统计学意义（P＜0.05），即Eotaxin-2在鼻息肉中含量要高于其在下鼻甲黏膜组织中的含量，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结果同众多的研究结论一致[11]，即鼻息肉组织中Eotaxin-2高表达，同时在下鼻甲组织中的低表达相符。进一步说明了Eotaxin-2与在NP形成中的不可替代的作用。

三种因子Bcl-2、Fas及Eotaxin-2，在鼻息肉的发生发展中，抑制凋亡基因Bcl-2含量上调，诱导凋亡基因Fas含量下调，而可活化及促使嗜酸性粒细胞募集及原位激活的趋化因子Eotaxin-2含量上调，且Bcl-2和Eotaxin-2存在相关性，在两者共同的作用下从不同的方面促进了NP的生长。

综上所述，对于鼻息肉的发生发展机制的解释仍趋于为多因素及多途径的作用结果。在NP形成的微环境中，EOS及其相关的众多的细胞因子扮演者着重要的角色。Bcl-2、Fas及嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin-2这三个因子在鼻息肉中的发生发展中起到了重要的作用。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.042