乙型肝炎肝硬化患者血清自身抗体检测的临床意义

闫秀萍++侯青顺+王慧++郭璐

[摘要] 目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者血清自身抗体的存在情况及其临床意义。方法 选取2016年3月～2017年6月青岛市第六人民医院门诊及住院的乙型肝炎肝硬化患者60例，采用免疫印迹法检测患者血清自身抗体，并根据自身抗体检测结果分为自身抗体阳性组（n=13）和自身抗体阴性组（n=47），采用全自动生化分析仪检测两组肝功能指标（ALT、AST、TBil、AKP、GGT）及免疫球蛋白，并进行肝脏瞬时弹性硬度检测（Fibroscan）。 结果 乙型肝炎肝硬化患者自身抗体总检出率为21.7%。与自身抗体阴性组比较，自身抗体阳性组年龄增大（P < 0.05），GLB、IgG、Fibroscan值显著升高（P < 0.05），ALB降低（P < 0.05）。 结论 乙型肝炎肝硬化患者存在自身免疫反应，导致自身抗体的产生，其与患者的年龄、肝脏损伤及肝纤维化程度有关。

[关键词] 乙型肝炎肝硬化；自身抗体；抗核抗体；自身免疫反应

[中图分类号] R512.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（b）-0121-04

Clinical significance of serum autoantibodies detection in patients with hepatitis B cirrhosis

YAN Xiuping HOU Qingshun WANG Hui GUO Lu

Liver Disease Ten Area， the Sixth People′s Hospital of Qingdao City， Shandong Province， Qingdao 266033， China

[Abstract] Objective To explore the presence of serum autoantibodies in patients with hepatitis B cirrhosis and its clinical significance. Methods 60 patients with hepatitis B cirrhosis in the Sixth People′s Hospital of Qingdao City from March 2016 to June 2017 were selected and divided into autoantibodies positive group （n=13） and autoantibodies negative group （n=47） according to the test results of serum autoantibodies which were detected with immunoblot. The liver function indexes of ALT， AST， TBil， AKP， GGT and immunoglobulin between two groups were detected by using full automatic biochemical analyzer. Liver instantaneous elastic hardness （Fibroscan） was tested. Results Total positive rate of autoantibodies in patients with hepatitis B cirrhosis was 21.7%. Compared with autoantibody negative group， the age of autoantibody positive group was increased （P < 0.05）， the levels of GLB， IgG and Fibroscan were significantly increased in autoantibody positive group （P < 0.05）， ALB of autoantibody positive group was decreased （P < 0.05）. Conclusion Autoimmune reactions exist in patients with hepatitis B cirrhosis， and cause production of autoantibodies， which are related to the age， the degree of liver damage and liver fibrosis of paients.

[Key words] Hepatic B cirrhosis； Autoantibodies； Anti-nuclear antibodies； Autoimmunity

自身抗体是多种针对自身组织细胞成分（核酸、蛋白、受体或者功能细胞组件）的抗体，是自身免疫性疾病的重要标志，其中抗核抗体、抗线粒体抗体M2、抗肝肾微粒体抗体、抗肝可溶性抗原/肝胰抗原抗体等是与自身免疫性肝病相关的自身抗体（以下统称自身抗体）。但是越来越多的研究发现，不仅在自身免疫性肝病，在乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、脂肪肝以及药物性肝炎患者血清中也可检测出自身抗体，只是病毒性肝炎患者自身抗体滴度较自身免疫性肝病低[1]。因此目前的观念认为自身抗体阳性并不一定是自身免疫性肝病，也可能与肝脏损害及慢性化密切相关。本研究旨在探讨血清自身抗体的检测在乙型肝炎肝硬化患者中的特点及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年3月～2017年6月青岛市第六人民医院门诊及住院的乙型肝炎肝硬化患者60例，男38例，女22例，年龄25～76岁，根据自身抗体检测结果分为自身抗体阳性组（n=13）和自身抗體阴性组（n=47）。诊断符合2015年中华医学会制订的《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准，排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染以及酒精性肝损伤、自身免疫性肝病、药物性肝损伤、遗传代谢性肝病等。本研究经医院伦理委员会审查批准通过。endprint

1.2 实验方法

1.2.1 血生化学检测 采用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪进行检测，主要检测指标包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、谷氨酰转肽酶（GGT）、碱性磷酸酶（AKP）、免疫球蛋白。

1.2.2 免疫学检测 采用免疫印迹法进行检测自身免疫性肝病抗体谱，包括抗核抗体、抗线粒体抗体M2、抗肝肾微粒体抗体、抗肝可溶性抗原/肝胰抗原抗体、抗gp210抗体、抗sp100抗体、抗着丝点蛋白B抗体、抗Ro52抗体，试剂盒购自苏州HOB生物医药有限公司。具体操作步骤如下：①将抗原膜条置于孵育槽中，将带有文字标记的一面朝上，每槽加入1.5 mL样品缓冲液将膜条室温下摇摆摇床轻微晃动5 min后将其吸掉；②每槽加入1.5 mL稀释血清样品，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30 min；③吸去孵育槽中液体，然后每槽加入1.5 mL清洗缓冲液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动5 min，吸去孵育槽中液体，再重复洗涤2次；④吸去孵育槽中液体，然后每槽加入1.5 mL稀释的酶结合物，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30 min；⑤重复步骤③；⑥吸去孵育槽中液体，然后每槽加入1.5 mL底物液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育10 min；⑦吸去孵育槽中液体，然后每槽加入1.5 mL蒸馏水或纯净水，室温下在摇摆摇床上轻微晃动1 min，吸去孵育槽中液体，再重复洗涤2次；⑧膜条干燥后，将抗原膜条粘贴于结果记录单上。结果判定：根据抗原带着色程度，无着色或较临界值线着色浅为阴性；与临界值线着色强度基本相当为临界阳性；着色强度较临界线深为阳性。

1.2.3 肝脏瞬时弹性硬度检测 采用Fibroscan无创肝纤维化诊断设备仪器瞬时弹性扫描仪（法国Echosens公司）进行检测，由经过专业培训的专职医师按照仪器标准操作方法，分别于右腋前线和腋中线之间第7、8肋间进行10次有效测量，取中位数作为Fibroscan值（单位kPa），代表肝组织的弹性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乙型肝炎肝硬化患者自身抗体检测

60例乙型肝炎肝硬化患者中13例检测出至少一项自身抗体阳性，检出率为21.7%，抗核抗体阳性8例，其中胞浆颗粒型4例，核颗粒型2例，着丝点型2例；抗线粒体抗体阳性1例；抗着丝点蛋白B抗体阳性3例；抗Ro52抗体阳性6例；抗肝肾微粒体抗体阳性1例。其中4例患者两种抗体阳性，1例患者有3种抗体阳性。

2.2 乙型肝炎肝硬化患者自身抗体与性别、年龄及病程关系

自身抗体阳性组与自身抗体阴性组性别及病程比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；但自身抗体阳性组年龄大于自身抗体阴性组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.3 乙型肝炎肝硬化患者自身抗体与生化指标关系

与自身抗体阴性组比较，自身抗体阳性组ALB降低，GLB升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；两组ALT、AST、TBil、AKP、GGT水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.4 乙型肝炎肝硬化患者自身抗体与免疫球蛋白及肝纤维化指数关系

与自身抗体阴性组比较，自身抗体阳性组IgG、Fibroscan值升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；两组IgM、IgA水平比較，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

3 讨论

自身免疫是人体正常的生理现象，但反应过度就可能引发自身免疫性疾病。研究发现，某些药物可通过刺激T细胞的异常活化及释放细胞因子而导致自身免疫性肝病[2]；在非酒精性脂肪性肝炎患者中自身抗体的阳性率明显高于正常人群，研究发现抗核抗体的滴度与非酒精性脂肪性肝炎患者的胰岛素抵抗存在相关性[3]。

目前对自身免疫疾病与病毒感染相关性进行的大量研究认为，病毒感染是自身免疫性疾病的启动因子，可诱发机体自身免疫[4]。既往研究发现，丙型肝炎病毒感染常常伴随自身免疫现象，其可能是肝细胞损伤的诱因之一，并引起肝脏疾病的慢性化进展，主要表现为血中可检测出各种自身抗体[5]，全球丙型肝炎病毒感染相关的慢性肝炎患者自身抗体的发生率约为25%[6]，与自身抗体阴性的慢性丙型肝炎病毒感染的患者相比，自身抗体阳性患者疾病的活动性及严重程度更高，组织和生化学指标更严重[7-8]。近年，乙型肝炎病毒感染与自身免疫疾病之间的关系也受到广泛关注，研究认为乙型肝炎病毒感染肝脏细胞并不直接引起肝细胞病变，而是通过一系列免疫应答引起免疫损伤从而造成肝组织的炎症坏死[9]，即当肝细胞功能受损时，乙型肝炎病毒感染可能会激发体内自身抗体的产生，而相应的免疫应答和免疫病理反应可导致肝细胞进一步损伤[10]。另外，乙型肝炎患者进行干扰素治疗可产生自身抗体，且停用干扰素后自身抗体可消失[11]。因此目前认为乙型肝炎病毒感染后引发的自身免疫反应与肝细胞损伤密切相关[12]，自身抗体的阳性率与肝损伤程度有关，随疾病的严重程度和疾病进展增高，但其滴度与肝损伤程度无关[10]，其产生自身免疫的机制可能为：①乙型肝炎病毒感染诱导自身抗原修饰，从而激发自身免疫；②乙型肝炎病毒感染导致控制自身免疫的机制紊乱；③乙型肝炎病毒抗原与机体自身抗原之间的分子模拟[13]。也就是说，不仅是自身免疫性肝病，在病毒性肝炎如乙型肝炎、丙型肝炎等患者也存在自身免疫性反应，可检测出一种或多种自身抗体，自身抗体的产生与年龄、性别以及肝脏纤维化程度有关[14-15]，并且慢性肝炎病毒感染可导致自身免疫性肝炎的发生，研究发现慢性乙型肝炎病毒感染可能引发Ⅰ型自身免疫性肝病，而慢性丙型肝炎病毒感染可引起Ⅱ型自身免疫性肝炎的发生[16]。而病毒性肝炎患者机体长期的自身免疫紊乱可导致肝细胞硬变和癌变[17]。我国是乙型肝炎大国，乙型肝炎引起的肝硬化很常见，因此，研究自身抗体在乙型肝炎肝硬化患者中的意义显得尤为重要。endprint

肝脏是蛋白合成、分解的重要场所，当肝炎病毒引起肝脏细胞、人体血清中的免疫球蛋白常常发生变化，张占卿等[18]通过研究发现，血清免疫球蛋白尤其是IgG对肝硬化可能有诊断价值，且免疫球蛋白的升高与肝脏储备功能下降有关[19]。

本研究发现，在乙型肝炎肝硬化患者中可检测出多种自身抗体，其中抗核抗体最常见，说明乙型肝炎肝硬化患者机体内存在自身免疫现象。自身抗体阳性组乙型肝炎肝硬化患者与自身抗体阴性组相比，前者年龄明显大于后者，而两组间性别及病程无明显差异，表明乙型肝炎肝硬化患者自身抗体的出现与性别无关，也与乙型肝炎病毒感染的时间长短有关[13]，但本研究两组间病程比较差异无统计学意义，考虑原因可能是部分患者症状轻，发现时间晚，以至于在病程的描述上不够确切，导致误差有关。两组间ALT、AST、TBil及AKP、GGT无明显差异，与以往研究[13]认为自身抗体检出率与肝脏的损伤程度相关不符，考虑原因可能与本研究病例数较少有关，需要增大样本量进一步研究。另一方面，自身抗体阳性的乙型肝炎肝硬化患者与自身抗体阴性患者相比，GLB明显升高，ALB降低（P < 0.05），且前者IgG以及Fibroscan值明显高于后者，提示自身抗体的出现与肝脏的储备功能和肝脏纤维化程度有关，原因可能为乙型肝炎病毒感染后诱导肝细胞膜发生免疫反应，加重肝脏损害，同时促进肝纤维化的进展[20]。

总之，乙型肝炎肝硬化患者机体存在自身免疫反应，以自身抗体阳性为主要表现，其与患者的年龄及肝脏损伤程度有关，并参与肝纤维化的进展。因此，在临床上，可通过自身抗体的检测对乙型肝炎肝硬化患者进行临床病情及预后评估，指导治疗。

[参考文献]

[1] 谢守凤，杨静，王宁.自身抗体检测对肝病患者的鉴别诊断价值[J].胃肠病学和肝病学杂志，2015，24（5）：549-552.

[2] 黄瑛，林志，李波.药物诱导性自身免疫性疾病研究进展[J].中国新药杂志，2013，22（19）：2244-2249.

[3] Loria P，Lonardo A，Leonardi F，et al. Non-organ-specific autoantibodies in nonalcoholic fatty liver disease：prevalence and correlates [J]. Digest Dis Sci，2003，48（11）：2173-2181.

[4] 黄金保，徐秀亮，胡义忠，等.病毒性肝炎患者血清自身抗体的变化[J].检验医学，2015，30（7）：731-733.

[5] 李文淑，赵景民，周光德，等.HCV感染者自身抗体对肝脏损伤的影响[J/CD].中华临床医师杂志：电子版，2011， 5（20）：5969-5973.

[6] Muratori P，Muratori L，Verucchi G，et al. Non-organ-specific autoantibodies in children with chronic hepatitis C：clinical significance and impact on interferon treatment [J]. CID，2003：37（15）：1320-1326.

[7] Chen CH，Lee CM，Chen CH，et al. Prevalence and clinical relevance of serum autoantibodies in patients with chronic hepatitis C [J]. Chang Gung Med J，2010，33（3）：258-265.

[8] Marconcini ML，Fayad L，Shiozawa MB，et al. Autoantibody profile in individuals with chronic hepatitis C [J]. Rev Soc Bras Med Trop，2013，46（2）：147-153.

[9] 张海萍，闫惠平，冯霞，等.乙肝病毒感染者血清抗核抗体特征及临床相关性[J].首都医科大学学报，2007，28（2）：154-157.

[10] 聂红，王云英，王毅，等.不同基因型乙型肝炎病毒感染者与其自身抗体的相关性分析[J].中华肝脏病杂志，2012， 20（6）：448-452.

[11] Kansu A，Kulo■lu Z，Demir？觭eken F，et al. Autoantibodies in children with chronic hepatitis B infection and the influence of interferon alpha [J]. Turk J Gastroenterol，2004， 15（4）：213-218.

[12] 林曉梅，潘钦石，张文辉，等.慢性乙型肝炎患者产生自身免疫的研究[J].中华医院感染学杂志，2009，19（8）：889-891.

[13] 樊启艳，杨京.慢性HBV感染患者血清自身抗体的检测与临床意义[J].中国医学创新，2014，11（7）：27-29.

[14] Acay A，Demir K，Asik G，et al. Assessment of the frequency of autoantibodies in chronic viral hepatitis [J]. Pak J Med Sci，2015，31（1）：150-154.

[15] Squadrito G，Previti M，Lenzi M，et al. High prevalence of non-organ-specific autoantibodies in hepatitis C virus-infected cirrhotic patients from southern Italy [J]. Digest Dis Sci，2003，48（2）：349-353.

[16] Shantha S，Thyagarajan SP，Premavathy RK，et al. Correlation of autoimmune reactivity with hepatitis B and C virus（HBV and HCV）infection in histologically proven chronic liver diseases [J]. Indian J Med Microbiol，2002， 20（1）：12-15.

[17] 王波，丁楠，常波.乙型肝炎后肝硬化自身抗体检测及其对肝功能影响的研究[J].中国实验诊断学，2013，17（11）：2022-2025.

[18] 张占卿，陈淑琴，陆伟，等.血清免疫球蛋白诊断乙型肝炎相关肝硬化的价值[J].胃肠病学和肝病学杂志，2008， 17（10）：844-845，848.

[19] 张占卿，陆伟，饶敏，等.血清免疫球蛋白对慢性肝炎病理分级和分期的判别价值[J].肝脏，2008，13（4）：299-302.

[20] 范公忍，刘力瑞，胡学玲，等.乙型肝炎病毒感染者血清肝特异性自身抗体的检测及临床意义[J].实用肝脏病杂志，2013，16（5）：421-423.

（收稿日期：2017-07-15 本文编辑：李亚聪）endprint