天然维生素E软胶囊中维生素E的含量测定

徐文峰++++++徐硕++++++何笑荣++++++姜文清++++++吴学军++++++邝咏梅++++++金鹏飞

[摘要] 目的 应用高效液相色谱法（HPLC）建立天然维生素E软胶囊的含量测定方法。 方法 采用Alltima C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），以甲醇为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长285 nm。 结果 在本方法中，维生素E的线性关系良好，线性相关系数为0.9999；专属性强，精密度和稳定性良好，相对标准偏差（RSD）分别为0.17%和0.87%；平均加样回收率（n = 6）为100.8%，加样回收率良好。含量测定结果显示3个批号样品中维生素E的含量分别为标示量的101.2%、100.8%、102.7%。 结论 该方法准确、简单、快速，可用于天然维生素E软胶囊的含量测定。

[关键词] 天然维生素E软胶囊；维生素E；高效液相色谱法；含量测定

[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（c）-0136-04

Determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules

XU Wenfeng XU Shuo HE Xiaorong JIANG Wenqing WU Xuejun KUANG Yongmei JIN Pengfei

Department of Pharmacy， Beijing Hospital National Center of Gerontology， Beijing 100730， China

[Abstract] Objective To establish a high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules. Methods An Alltima C18 column （150 mm× 4.6 mm， 5 μm） was used for the separation， with methanol as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 285 nm. Results The method showed good linearity with correlation coefficient of 0.9999 for vitamin E. The assay method showed good specificity. The precision and stability were satisfactory with the relative standard deviations （RSD） of 0.17% and 0.87% respectively. The average spiked recovery was 100.8% （n = 6）， the recovery rate was good. The determination results was 101.2%， 100.8% and 102.7% of the labeled amount of the three batches of samples respectively. Conclusion The established method is accurate， simple and fast， and can be used for determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules.

[Key words] Natural Vitamin E Soft Capsules； Natural vitamin E； HPLC； Determination

维生素E为微黄色至黃色澄清的黏稠液体，几乎无臭，遇光色渐变深，不溶于水，溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂，在空气中会缓慢氧化，紫外线照射可使其分解。维生素E分为合成型或天然型，合成型为dl-α-生育酚醋酸酯，d-α-生育酚醋酸酯[1]。大量研究表明，维生素E具有抗氧化、调节机体免疫力、促进生育、抗衰老、细胞保护等生物学功能[2-5]。维生素E属于人体必需的植物源脂溶性维生素，机体不能合成，必须从膳食中获取。植物油中富含天然维生素E，是膳食维生素E的主要来源[6]，同时维生素E也常被作为药品、营养保健品和食品添加剂使用。维生素E的定量方法有气相色谱法[1，7-11]、气相色谱-质谱法[12-13]、高效液相色谱法[14-17]、高效液相色谱-质谱法[18]、毛细管电泳法[19]、红外光谱法[20]等。杨红娟等[21]采用高效液相色谱法对天然维生素E软胶囊中α-生育酚的含量测定进行了研究，但高效液相色谱法测定天然维生素E软胶囊中d-α-生育酚醋酸酯的含量尚未见报道。本实验应用高效液相色谱技术建立了天然维生素E软胶囊中维生素E含量测定的方法，对于补充其质量控制具有一定参考价值。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260型高效液相色谱系统，配有四元梯度泵（型号：G1311C），自动进样器（型号：G1329B），柱温箱（型号：G1316A），DAD检测器（型号：G4212B）（安捷伦科技有限公司，美国）；Mettler XP-205型电子天平（精密度为十万分之一，梅特勒-托利多集团，瑞士）；KQ-800KDE型超声仪（昆山市超声仪器有限公司，中国）；Milli-Q超纯水系统（密理博中国有限公司，美国）。endprint

1.2 试药

无水乙醇（分析纯，批号：20141113，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇[色谱纯，批号：164787，赛默飞科技（中国）有限公司]；实验用水为纯净水；甘油[批号：20851101，国药控股星鲨制药（厦门）有限公司]；大豆油（批号：20170519，益海嘉里食品营销有限公司）；维生素E对照品购自中国食品药品检定研究院（批号：100062-201110，含量为97.7%）；天然维生素E软胶囊[每粒含有天然维生素E 400 IU（相当于维生素E 294.1 mg）[22]，批号：450279-12、442049-17、423022-11，美国“天然素”药厂]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Alltima，150 mm × 4.6 mm，5 μm）；甲醇为流动相；检测波长为285 nm；流速为1.0 mL/min；进样体积为10 μL；28℃。所用溶液进样前均经0.22 μm孔径尼龙滤膜过滤。

2.2 对照品溶液的制备

避光操作，取维生素E对照品约250 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加适量无水乙醇，振摇使溶解，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，即为维生素E储备液（5.0 mg/mL）。精密量取维生素E储备液1、2、3、4、5 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，获得维生素E质量浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL的对照品溶液。取中间浓度（1.5 mg/mL）的对照品溶液用作含量测定时的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

避光操作，精密称取天然维生素E软胶囊内容物约0.1 g（约相当于维生素E 75 mg），置50 mL容量瓶中，加适量无水乙醇，振摇使溶解，甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

取说明书中的辅料，制备不含维生素E的阴性空白樣品，按“2.3”项下操作，得到阴性对照溶液，用于本实验的专属性研究。

2.5 专属性及系统适应性实验

分别取阴性对照溶液、维生素E对照品溶液和供试品溶液进样分析，考察样品中辅料及其他成分对维生素E色谱峰的干扰。上述3种溶液的色谱图（图1）显示，样品辅料和其他成分不干扰维生素E的测定。理论板数按维生素E计算应>4000。

2.6 线性和灵敏度

对“2.2”项下系列对照品溶液进样分析，记录峰面积，以维生素E的质量浓度（mg/mL）和对应的色谱峰面积进行线性回归，维生素E在质量浓度0.4976～2.4879 mg/mL范围内呈良好线性，回归方程为Y = 2264.22X - 1.75，线性相关系数（r）为0.9999。

将低浓度的对照品溶液以甲醇逐级稀释后进样分析，当信噪比（S/N）约为3.0时，确定该方法维生素E的最低检出限（LOD）为0.12 μg/mL；当S/N约为10.0时，测得该方法维生素E的最低定量限（LOQ）为0.50 μg/mL。

2.7 精密度实验

取“2.2”项下中间浓度对照品溶液，重复进样6次，维生素E色谱峰面积的RSD为0.17%，表明仪器精密度良好。

2.8 重复性实验

取同一批天然维生素E软胶囊样品6份（批号：450279-12），分别制备供试品溶液，照含量测定项下方法进样分析，6份样品测定结果分别为标示量的100.9%、101.4%、102.2%、100.4%、101.4%、100.6%（平均值为标示量的101.2%），结果维生素E含量的RSD为0.65%，说明方法的重复性良好。

2.9 稳定性实验

取同一供试品溶液（批号：450279-12），置于仪器自动进样器内，分别在0、2、4、8、12、24 h分析测定其含量，结果显示含量基本不变，24 h内维生素E色谱峰面积RSD为0.87%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.10 加样回收率实验

在50 mL容量瓶中加入批号为450279-12的天然维生素E软胶囊内容物约0.1 g，精密加入维生素E储备液5 mL，加适量无水乙醇，振摇，用甲醇定容，摇匀，过滤，进样测定。共制备6份样品，计算加样回收率和RSD。

2.11 样品含量测定

应用建立的方法对批号为450279-12、442049-17、423022-11的天然维生素E软胶囊进行含量测定，每个样品制备3份，取平均值。测定结果显示批号为450279-12、442049-17、423022-11样品中维生素E的含量分别为标示量的101.2%、100.8%、102.7%。

3 讨论

本实验采用高效液相色谱建立了天然维生素E软胶囊含量测定的方法，该方法操作简单，重复性好，结果准确可靠，可用于维生素E软胶囊的质量控制。

3.1 提取溶剂的选择

适用于天然食品中的维生素E测定方法的现行国家标准，都需要将不同构型的微生物E皂化转化为生育酚的形式，预处理操作繁琐[14]。《中国药典》中维生素E的含量测定为气相色谱法，样品提取溶剂为正己烷[1]，不适用于反相高效液相色谱。维生素E在无水乙醇中易溶，在甲醇中即使超声30 min样品也不能完全溶解，故实验中选择无水乙醇溶解，甲醇稀释的方法配制样品。这样可以避免完全用无水乙醇配制样品时液相分析中潜在的溶剂效应。

3.2 流动相的选择

维生素E在水中几乎不溶，预实验中发现，流动相即使选择甲醇-水（98∶2），维生素E的色谱峰型也会受到影响，故实验采用纯甲醇作为流动相。

3.3 检测波长的选择endprint

灵敏度和专属性是选择检测波长需要考虑的两个方面。分别取维生素E的对照品溶液及空白溶液进样，从DAD检测器生成的紫外扫描图上可以看到维生素E的最大吸收波长为285 nm，而且空白样品在285 nm处没有紫外吸收。故本实验将285 nm作为检测波长。

3.4 注意事项

维生素E稳定性较差，对光照敏感，长时间光照，其溶液的峰面积会降低，本实验样品配制过程需采用棕色容量瓶，液相测定时样品需采用棕色进样瓶保存。

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（收稿日期：2017-07-01 本文编辑：李亚聪）endprint