胎盘组织中IGF—1和IGF—2表达水平与妊娠期糖尿病巨大儿发生的相关研究

蔡满红++++++程青

[摘要] 目的 探討妊娠期糖尿病（GDM）巨大儿与胎盘组织中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子-2（IGF-2）表达水平的相关性。 方法 选取2014年4月～2016年12月在南京医科大学附属妇产医院产科住院并确诊为GDM的初产妇分娩的巨大儿40例为GDM巨大儿组，同期健康初产妇分娩的巨大儿40例为健康巨大儿组，同期健康初产妇分娩的正常体重儿40例为对照组。比较三组新生儿胎盘组织中IGF-1和IGF-2表达水平，分析IGF-1和IGF-2表达水平与GDM巨大儿发生的相关。 结果 GDM巨大儿组胎盘组织中IGF-1、IGF-2 mRNA表达水平均显著高于健康巨大儿组及对照组（P < 0.01），健康巨大儿组与对照组间胎盘组织中IGF-1、IGF-2 mRNA水平差异无统计学意义（P > 0.05）；二元Logistic回归分析结果发现：IGF-1、IGF-2水平为GDM巨大儿发生的危险因素（OR = 3.490，95%CI：2.537～6.928，P = 0.017；OR = 2.077，95%CI：1.098～4.997，P=0.023）。 结论 GDM巨大儿患者胎盘组织中IGF-1、IGF-2表达水平显著增高，IGF-1、IGF-2表达水平与GDM巨大儿的发生显著相关。

[关键词] 妊娠期糖尿病；巨大儿；胎盘；胰岛素样生长因子-1；胰岛素样生长因子-2

[中图分类号] R714.256 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（c）-0112-04

Correlation between expression of IGF-1 and IGF-2 in placenta and the occurrence of gestational diabetes mellitus

CAI Manhong CHENG Qing▲

Department of Obstetrics and Gynecology， Affiliated Maternity Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing Province， Jiangsu 210004， China

[Abstract] Objective To explore the correlation of gestational diabetes mellitus （GDM） macrosomia with the expression of insulin-like growth factor-1 （IGF-1） and insulin-like growth factor-2 （IGF-2）. Methods Forty neonates with macrosomia given birth by primiparas who were admitted to Department of Obstetrics of the Affiliated Maternity Hospital of Nanjing Medical University from April 2014 to December 2016 and confirmed with GDM were assigned to the GDM macrosomia group， 40 neonates with macrosomia given birth by healthy primiparas over the same period were assigned to the healthy macrosomia group， and 40 neonates with normal weigh given birth by healthy primiparas over the same period were assigned to the control group. The expression of IGF-1 and IGF-2 in the neonate′s placenta was compared between the three groups， and the correlation of IGF-1 and IGF-2 expression with the development of GDM macrosomia was analyzed. Results Expression of IGF-1 and IGF-2 mRNA in placenta was significantly higher in GDM macrosomia group than that in healthy macrosomia group and control group （P < 0.01）， and there were no statistically significant differences between healthy macrosomia group and control group in the levels of IGF-1 or IGF-2 mRNA （P > 0.05）； binary Logistic regression analysis identified IGF-1 and IGF-2 levels as the risk factors for macrosomia in GDM （OR = 3.490， 95%CI： 2.537-6.928， P = 0.017； OR = 2.077，95%CI： 1.098-4.997， P = 0.023）. Conclusion Expression of IGF-1 and IGF-2 in placenta is significantly elevated in patients with GDM macrosomia； expression of IGF-1 and IGF-2 is significantly correlated with the development of GDM macrosomia.endprint

[Key words] Gestational diabetes mellitus； Giant children； Placenta； Insulin-like growth factor-1； Insulin-like growth factor-2

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是糖尿病的一种特殊类型，指怀孕期间首次出现或发生的不同程度的糖代谢异常的现象。据不完全统计，我国GDM发病率在5%左右，且呈现急剧上升趋势[1-2]。孕妇GDM与巨大儿发生关系密切，巨大儿是GDM孕妇临床上最常见的不良妊娠结局。目前已有研究发现，母体血清胰岛素样生长因子（insulin—like growth factors，IGF）在调节胎儿发育及胎盘生长方面有着显著作用，已逐渐成为近期研究热点，但基于孕妇胎盘组织中IGF mRNA表达水平与巨大儿发生的相关性报道较少。本研究拟通过对比分析IGF-1、IGF-2基因mRNA在GDM孕妇分娩的巨大儿、健康孕妇分娩的巨大儿及健康孕妇分娩的正常体重儿胎盘组织中的表达水平，探讨IGF-1及IGF-2在GDM巨大儿发生中的作用，为临床上防治GDM及巨大儿的发生提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年4月～2016年12月在南京医科大学附属妇产医院产科住院并确诊为GDM的初产妇分娩的巨大儿40例为GDM巨大儿组，孕妇平均年龄（30.2±1.3）岁，分娩孕龄39～40周。纳入标准：①GDM孕妇，即受试者妊娠24～28周口服葡萄糖耐量试验（OGTT）[3-4]中，空腹及服糖后1、2 h的血糖值分别达到或超过5.1 mmol/L（91.8 mg/dL）、10.0 mmol/L（180 mg/dL）、8.5 mmol/L（153 mg/dL）；②新生儿体重≥4000 g[5]；③初次妊娠，足月单胎；④病例资料完整。排除标准：①病例资料不完整；②孕妇合并其它类型妊娠并发症；③孕妇合并其他系统疾病。随机选取同期健康初产妇分娩的巨大儿40例为健康巨大儿组，孕妇年龄（28.6±0.3）岁，分娩孕龄39～40周；同时选取同期健康初产妇分娩的正常体重儿40例为对照组（C组），孕妇平均年龄（29.1±0.4）岁，分娩孕龄39～40周。三组孕妇年龄、孕龄比较，差异无统计学意义（P >0.05），具有可不行。本研究经医院医学伦理委员会批准进行。

1.2 检测方法

1.2.1 胎盘组织的取材及处理 胎盘娩出后10 min内于近脐根部胎盘母体面中央（避开钙化、坏死、出血点）取2份体积约1 cm3的绒毛组织，用已灭菌的生理盐水将其反复冲洗，去净血液，装入1.5 mL EP管封存，标记受试者姓名及日期，置于液氮中备用，以待后续提取RNA等，行RT-PCR检测。

1.2.2 RNA的提取及逆转录 应用Invitrogen公司生产的Trizol试剂盒，按说明书的步骤分别提取RNA。逆转录反应采用 Fermentas公司反转录试剂盒[RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit（K1621）]，按说明书使用。使用NANO DROP 2000试剂盒检测样本cDNA的浓度与纯度。

1.2.3 RT-PCR反应检测IGF-1、IGF-2 以GAPDH作为内参基因，引物由上海生工公司？誖合成，引物序列如下，见表1。用Oligo 6.0评价引物。建立PCR反应体系，先在95℃条件下预变性10 s，然后95℃条件下正式变性5 s，60℃退火延伸30 s，扩增40个循环；用ABI7500分析软件定量分析PCR结果，用各样品的浓度对数制作标准曲线，其中Ct值为反应管内荧光信号达到阈值时所经历的循环数，△△Ct表示试验组与对照组△Ct之差，用2^-△△Ct表示目的基因的相对表达量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，多因素分析采用Logistic回归分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组新生儿胎盘组织中IGF-1、IGF-2的mRNA表达水平的比较

GDM巨大儿组胎盘组织中IGF-1、IGF-2 mRNA表达水平均显著高于健康巨大儿组及对照组，差异有统计学意义（P < 0.01）；健康巨大儿组与对照组间胎盘组织中IGF-1、IGF-2 mRNA水平差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.2 IGF-1、IGF-2与GDM巨大儿发生的相关性

以GDM孕妇是否发生巨大儿为因变量，以年龄、孕龄、IGF-1、IGF-2为自变量，进行二元Logistic回归分析。结果发现，IGF-1、IGF-2水平为GDM巨大儿发生的影响因素，且均为危险因素（OR>1）。

3讨论

巨大儿发生率在GDM的孕妇中显著高于正常孕妇[6-8]，但具体发病机制至今仍不明确。目前主要观点认为，孕妇体内持续代谢紊乱导致的高血糖状态与巨大儿的发生有密切关系[9-10]。巨大儿是GDM孕妇临床上最常见的不良妊娠结局，GDM巨大儿在分娩过程中产妇较易发生产道损伤、产程延长、产后出血、子宫破裂等；而巨大儿则较易出现肩难产、胎儿窘迫、新生儿锁骨骨折、新生儿头颅损伤、臂丛神经损伤等并发症，且出生后新生儿肺炎、低血糖、高胆红素血症等围生期并发症发生率也有所升高，因此探索预防GDM巨大儿发生的有效方法有着重要的意义。

近年来研究证明[11-13]孕妇血清中IGF因子的表达情况与新生儿体重关系密切，IGF-l、IGF-2表达水平降低与胎儿宫内生长受限有直接关系，且孕妇血清中IGF-l、IGF-2表达增加时巨大儿出生率较正常孕妇高[14]。IGF是一类具有胰岛素样代谢和促有丝分裂功能的多肽，由IGF-1和IGF-2两种同源多肽组成[15-16]。其中IGF-1主要在出生后及成年期發挥作用介导生长激素的促生长效应，IGF-2是重要的胚胎生长和发育的调节因子。研究表明[17]，胎儿脐血中IGF-1因子的表达量与母体的身高、体重、产前的体重指数、怀孕后体重增加的比值均呈正相关[18-19]，这正是巨大儿形成的重要参数。IGF-2可与IGF-1R结合，进而调节胎盘功能，促进胎盘生长，并促进胎儿的生长发育[20]，但目前关于IGF-2表达水平与巨大儿发生的关系尚存在争议。endprint

本研究針对孕妇胎盘中IGF-1、IGF-2基因的mRNA表达水平与GDM巨大儿发生的相关性。结果发现，GDM巨大儿组胎盘组织IGF-1、IGF-2表达水平显著高于于健康巨大儿组及对照组（P < 0.01），而健康巨大儿组胎盘组织IGF-1、IGF-2表达水平与对照组相比较差异无统计学意义（P > 0.05），由此可推测，GDM孕妇胎盘中IGF-1、IGF-2表达显著上升。后期通过二元Logistic回归分析，结果发现，IGF-1、IGF-2水平为GDM巨大儿发生的影响因素，且均为危险因素（OR > 1），进一步提示GDM孕妇巨大儿发生与IGF-1、IGF-2表达水平有着显著的关系。

综上所述，GDM巨大儿患者胎盘组织中IGF-1、IGF-2表达水平显著增高，IGF-1、IGF-2表达水平与GDM巨大儿的发生显著相关。由于本研究样本量有限，胎盘组织中IGF-1、IGF-2与巨大儿发生的关系及其具体机制有待多样本的深入研究。

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（收稿日期：2017-08-02 本文编辑：任 念）endprint