微柱凝胶法交叉配血次侧凝集原因分析及临床意义

李妙珊+伍昌林+周雪敏

[摘要]目的 分析輸血前微柱凝胶法交叉配血次侧凝集的原因及意义，为临床安全输血提供参考。方法 统计2013年1月～2016年5月我院微柱凝胶法次侧交叉配血凝集患者，按照病种分组分析交叉配血次侧凝集的比例，次侧配血凝集率与输血次数、输血反应的相关性；采用抗人球蛋白试验、放散试验、抗体筛选鉴定、药物性抗体筛查及RBC形态结构分析等方法研究交叉配血次侧凝集的原因。结果 调查分析微柱凝胶卡交叉配血45 672人次，其中325例次侧配血凝集，凝集率为0.71%；次侧配血凝集主要病种为血液系统疾病、ICU重症及急诊抢救、烧伤等；血液病患者次侧配血凝集率与输血次数、输血反应率、输血效率等均成正相关性（P<0.05）；ICU重症、急诊和烧伤等患者次侧配血凝集率与输血次数、输血反应率、输血效率等无相关性（P>0.05）；次侧配血凝集原因主要有：患者红细胞形态结构变化、血浆蛋白影响、供者血清同种抗体、药物性抗体、加样量不当及技术因素等；由免疫因素与非免疫因素引起的次侧配血凝集原因的分类比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 微柱凝胶法交叉配血次侧凝集的原因很多，非免疫因素导致交叉配血次侧凝集比例较高，输血反应与输注无效率较低；而免疫因素引起的次侧凝集比例低，但输注无效率高，且较易引起输血反应。

[关键词]交叉配血；次侧凝集；原因分析；临床意义

[中图分类号] R446.61 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）10（a）-0014-04

[Abstract]Objective To evaluate the agglulination reasons for the minor cross-matching，to provide reference for the safety of clinical blood transfusion.Methods Cases of patients with side crosss-matching agglulination were chosen from January 2013 to May 2016 in our hospital，according to the disease group，to investigate the correlation of the proportion of side cross-matching agglulination and the numbers of blood transfusion and the blood transfusion reaction.We had analysed the reasons of the side crossmatching agglulination by the antiglobulin test，antibodies identification，drug antibody screening and identification，and the size of RBC and morphology，combined with the clinical blood transfusion.Results 45 672 cases were investigated by micro-column gel way，ther were 325 cases side agglutination，the agglutination rate was 0.71%.The patients with side cross-matching agglulination mainly included haematology patients，ICU critical patients and emergency and burn patients.The agglulination rates of the haematology patients associated with the numbers of blood transfusions，there were positive correlation between the times of blood transfusion reaction and the times of blood transfusion（P<0.05），but there were no relevance between the agglulination rates for the patients in the ICU and emergency room and the times of blood transfusion（P>0.05）.The reasons of side cross-matching agglulination mainly included，drugs antibodies，plasmas proteins，erythrocyte alloantibody of donor，the changes of the erythrocyte morphology，improper sample，the bad blood anticoagulation，the old red cell，insufficient washing cell，and so on.There were significant difference between the cases caused by immune and non immune factors in the side crosss-matching agglulination（P<0.05）.Conclusion The agglulination reasons of the side cross-matching have many types，the agglulination rates caused by non immune factors，are the highest in the clinical blood transfusion，which show low transfusion reaction rate and infusion inefficiency rate. But the side cross-matching agglulination cases caused by the imune factors easily lead to more transfusion reaction.and worse infusion efficiency.endprint

[Key words]Cross-matching；Minor agglulination；Reasons analysis；Clinical significance

输血前交叉配血是保证临床输血安全高效的重要环节之一[1-2]。目前不规则抗体筛选与鉴定已引起了输血工作者的重视，临床输血中制定了相关制度。但对于不规则抗体检测阴性、交叉配血试验次侧凝集的患者，如何正确分析凝集性质，并根据具体情况给患者提供合适的血液，值得广大临床输血工作者深入探讨。本调查分析了我院近几年交叉配血次侧凝集病例325例，经过多次实验并综合临床数据分析了可能原因，为该类患者的合理输血提供参考。

1资料与方法

1.1一般资料

2013年1月～2016年5月在我院输血患者45 672人次，纳入标准为输血前卡式交叉配血仅次侧出现凝集的患者，排除标准为输血前卡式交叉配血主侧或主次侧均出现凝集的患者。共收集325例，其中男性137例，女性188例；女性有妊娠史134例，无妊娠史54例；有输血史158例，无输血史167例；年龄1～87岁。

1.2材料与仪器

微柱凝胶抗人球蛋白卡（斑伯斯公司，西班牙，批号：16014）、抗体筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞，长春博德公司，批号：20160421）、抗体鉴定细胞（1～11组细胞，斑伯斯公司，西班牙，批號：16001.04）、抗生素类药物致敏红细胞试剂盒（江苏中济生物，批号：20160218）；XT-1600血常规分析仪、斑伯斯公司Dianafuge卡式专用离心机、恒温水浴箱、微柱孵育器。

1.3研究方法

1.3.1研究策略 先运用微柱凝胶卡法进行交叉配血，发现配血次侧凝集的样本，做直接抗人球蛋白试验（DAT）与红细胞常规与形态分析，对DAT阳性样本做放散试验，筛选与鉴定放散液的抗体特性；放散液抗体筛选阴性样本，对采用了抗生素治疗的患者行抗生素类药物抗体筛选。最后综合分析患者病种、输血次数、输血反应、红细胞形态性状、次侧凝集原因等，结合临床输血后情况随访分析（输血反应及输注效率）。

1.3.2实验方法 ①交叉配血运用微柱凝胶抗人球蛋白卡法进行，实验按照稀释、加样、孵育、离心、结果分析步骤，严格按照产品说明书进行操作；②不规则抗体筛选与鉴定：稀释Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 细胞至1%左右，分别加入50 μl至微孔性样本采用11组细胞进行抗体特异性鉴定，采用微柱凝胶卡，标记1～11号孔，分别加入稀释至1%左右的筛选细胞50 μl，再加25 μl放散液，其他同抗体筛选试验，具体操作按说明书进行，结果分析按照说明书抗体鉴定谱进行；③红细胞性状分析：将患者全血采用XT-1600分析仪进行血常规分析，重点观察红细胞MCV、RDW、RDW-SD的变化，具体操作按仪器规程进行；④抗生素类药物性抗体分析：类似抗体鉴定方法，具体操作按照产品说明书进行。

1.4统计学方法

采用SPSS16.0软件分析，实验结果用均数±标准差（x±s）表示，采用两样本t检验，两变量的相关程度用直线相关分析法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1微柱凝胶卡次侧配血凝集患者病种分布

按病种分类统计结果如下，次侧配血凝集病例主要为四大类病种：血液系统疾病（MDS、白血病、地中海贫血）、ICU重症、急诊外伤与烧伤（表1）。

2.2次侧配血凝集患者各病种凝集率与输血次数、输血反应的相关性分析

相关性分析表明，次侧配血凝集的血液病患者（白血病、地中海贫血、MDS），次侧配血凝集率与输血次数成正相关（r=0.652，P<0.05），但与输血反应率无相关性（r=0.132，P>0.05）；但ICU重症、急诊和烧伤患者次侧配血凝集率与输血次数、输血反应率均无相关性（r1=0.106，r2=0.211，P>0.05）（表2）。

2.3次侧配血凝集可能原因分析

调查分析显示，325例次侧配血凝集的主要原因为：患者红细胞形态变化、血浆蛋白影响、药物性抗体、供者血清同种抗体、加样量不当、陈旧细胞样本、血标本抗凝不佳、细胞洗涤不充分、DAT阳性等。其中临床输血前发现次侧配血凝集，但主侧无溶血无凝集，由红细胞大小形变引起的次侧配血凝集在临床输血中比例较高（24%）（表3），随访发现该类患者输血效果较好；但由免疫因素引起的次侧配血凝集患者，输血效果较差，且易引起输血不良反应（发热、过敏反应等）。

2.4免疫因素与非免疫因素对次侧配血凝集原因患者分类的比较

对325例次侧配血凝集的原因进行分类研究，免疫因素共69例，非免疫因素256例，其中免疫因素组15例发生输血反应，11例红细胞输注无效；非免疫因素组12例发生输血反应，7例红细胞输注无效（表4）。免疫因素组与非免疫因素组比较，输血反应的发生率与输注无效率差异均有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

交叉配血试验是保证临床输血安全高效的重要环节[3-4]。但如何正确分析交叉配血试验次侧凝集的性质，并根据具体情况给患者提供科学合理的血液，应引起临床输血工作者重视。本研究对近几年我院输注红细胞患者45 672人次进行了调查分析，其中325例微柱凝胶卡次侧配血凝集，凝集率为0.71%；对次侧出现凝集的样本进行了统计分析，次侧配血凝集患者主要在外科ICU、急诊ICU、血液科、儿科及肿瘤科等科室，病种主要是重症急救、血液病、地中海贫血及烧伤、感染等患者，该类患者红细胞悬液主侧配血相合，输注的红细胞基本无供者血浆成分，观察发现临床输血不良反应较低，如何全面分析次侧凝集原因并制定相关标准或制度，规范该类患者临床输血，有利于提高输血效率，降低输血风险[5-7]。

收集次侧配血凝集患者血样，经过多次实验并综合临床数据进行分析，次侧配血凝集原因主要有如下几个方面[8-9]：①红细胞大小形态出现变化，共78例，调查分析显示，ICU患者抢救时输注液体较多，低张液会使红细胞肿胀，细胞膜可能损伤，大小形态变形，红细胞体积增大，血常规检测RDW及RDW-SD增高，红细胞变形，微柱凝集法检测出现次侧凝集，这是一种非免疫因素引起的"假凝集"无临床意义，但该类次侧凝集的比例较高，应引起日常配血工作的重视；②患者红细胞表面吸附自身同种抗体，由于多次输血产生同种免疫抗体致敏自身红细胞引起，如地中海贫血、白血病等，此外该类患者也有RBC变形、RDW及RDW-SD增高，微柱凝集法次侧凝集；③药物性抗体，如感染或肿瘤患者运用大量抗生素或抗肿瘤药物，这些药物多为半抗原，产生的相关抗体结合于红细胞表面，次侧配血凝集，本研究调查发现9例药物性抗体，且出现输血反应2例与RBC的输注无效3例；④疫球蛋白的影响，2例MDS患者和3例短时间内注入大量丙种球蛋白患者，这些抗体（IgG）吸附在红细胞表面，引起微柱凝胶卡配血次侧凝集；其他引起次侧凝集的原因，35例加样时RBC浓度过大，新来工作人员操作技术不合格；33例血浆蛋白影响，23例脂血时血细胞洗涤不充分；还存在31例无法分析原因，输血也无任何反应，但次侧配血凝集出现一过性现象，次侧凝集可自动消失。endprint

输血效果评价是规范临床合理用血的重要环节[10-13]。对这些患者次侧凝集的原因与临床输血效果综合分析表明：大部分患者主侧配血相合，次侧凝集，输血无不良反應，输血效果良好；但出现18例患者输血效果较差的病例，免疫因素引起的11例，非免疫因素引起的7例。其中3例开始次侧配血凝集，后来出现主侧配血也凝集，不规则抗体阳性，由此表明多次输血患者出现次侧凝集后，可能进一步引起同种抗体产生，加大临床配血的难度，或者开始可能为同种抗体较弱，常规方法无法检测；另外2例患者有时主次侧均无法配血，有时仅次侧配血次侧凝集，出现不稳定状况，输血效果不好，输血的频次增加；另外3例患者红细胞放散后，经过检测有临床意义的抗体；但是什么时间该做放散试验，要结合临床输血效果与临床表现，如果无不良输血反应，且输血效果好，血清胆红素无异常，可不做放散试验。但对于输血效果差或可能有慢性或迟发性溶血患者的样本，如IAT阴性应做放散试验，分析同种抗体的性质与类型[13-15]。相关性分析结果提示，血液病患者次侧配血凝集率与输血次数成正相关，但与输血反应率无相关性；但ICU重症、急诊和烧伤患者次侧配血凝集率与输血次数、输血反应率均无相关性[16-18]。免疫因素组与非免疫因素组比较，输血反应的发生率与输注无效率均有显著不同，差异有统计学意义。

综上所述，临床输血前应重视次侧配血凝集的问题，区分是免疫性还是非免疫因素，加强临床输血合理检测与分析，并与临床医生合作共同处理相关难点，有利于提高临床输血疗效，为患者提供相容性血液；但也不必过度检测，需结合临床表现与实验室结果，统筹安排血液检测资源，做到科学合理。

[参考文献]

[1]Dinardo CL，Bonifácio SL，Mendrone A Jr.Indirect antiglobulin test-crossmatch using low-ionic-strength saline-albumin enhancement medium and reduced incubation time：effectiveness in the detection of most clinically significant antibodies and impact on blood utilization[J]. Immunohematology，2014，30（1）：1-5.

[2]Okutsu M，Ohto H，Yasuda H，et al.Increased detection of clinically significant antibodies and decreased incidence of delayed haemolytic transfusion reaction with the indirect antiglobulin test potentiated by polyethylene glycol compared to albumin：a Japanese study[J].Blood Transfus，2011， 9（3）：311-319.

[3]Yamane K，Yagihashi A，Sasaki M，et al.A delayed hemolytic transfusion reaction （DHTR） with multiple alloantibodies （Anti-E，Jka，Dia，Fyb，and S）induced by E-antigen-negative，crossmatch-compatible blood[J].Immunopharmacol Immunotoxicol，1998，20（4）：531-539.

[4]Noumsi GT，Billingsley KL，Moulds JM.Successful transfusion of antigen positive blood to alloimmunised patients using a monocyte monolayer assay[J].Transfus Med，2015，25（2）：92-100.

[5]Bujandri NB，Gruji JN，Krga-Milanovi MM.Transfusion management of patients with red blood cell antibodies[J].Med Pregl，2013，66（11-12）：491-496.

[6]Zaidi U，Borhany M，Ansari S，Red cell alloimmunisation in regularly transfused beta thalassemia patients in Pakistan[J].Transfus Med，2015，25（2）：106-110.

[7]Lamba DS，Mittal K，Sood T，et al.Antibody screening in multitransfused patients： a prerequisite before each transfusion[J].Transfus Apher Sci，2014，51（2）：132-133.

[8]Miller ST，Kim HY，Weiner DL，et al.Red blood cell alloimmunization in sickle cell disease： prevalence in 2010[J].Transfusion，2013，53（4）：704-709.

[9]O'Suoji C，Liem RI，Mack AK，et al.Alloimmunization in sickle cell anemia in the era of extended red cell typing[J].Pediatr Blood Cancer，2013，60（9）：1487-1491.endprint

[10]Cheng CK，Lee CK，Lin CK.Clinically significant red blood cell antibodies in chronically transfused patients：a survey of Chinese thalassemia major patients and literature review[J].Transfusion，2012，52（10）：2220-2224.

[11]张勇，杨世明，曹丽妍，等.抗人球蛋白试验阳性及其临床意义的探讨[J].细胞与分子免疫学杂志，2011，27（11）：1245-1247.

[12]熊亚非.直接抗人球蛋白试验在安全输血中的应用[J].中国输血杂志，2006，19：235-236.

[13]Makarovska-Bojadzieva T，Velkova E，Blagoevska M.The impact of extended typing on red blood cell alloimmunization in transfused patients[J].Open Access Maced J Med Sci，2017，5（2）：107-111.

[14]Choktaweesak N，Krasathong P，Ammaranond P.Development of enhancing agglutination reaction using gold nanoparticle for pre-transfusion testing[J].Transfus Med，2016，26（5）：360-364.

[15]Li MF，Liu F，Zhang M.Micro gel column technique is fit for detecting mixed fields post ABO incompatible hematopoietic stem cell transplantation[J].Transfus Apher Sci，2015， 52（2）：222-225.

[16]Noumsi G.The role of automated gel column testing technology in enhancing transfusion safety[J].MLO Med Lab Obs， 2014，46（7）：34，36.

[17]El Kenz H，Corazza F.Automated point-of-care testing for ABO agglutination test： proof of concept and validation[J].Vox Sang，2015，109（1）：79-85.

[18]Then WL，Li M，McLiesh H，et al.The detection of blood group phenotypes using paper diagnostics[J].Vox Sang，2015，108（2）：186-196.

（收稿日期：2017-05-15 本文編辑：崔建中）endprint