枳术粉对雏鸡生长性能和肠道微生态及免疫功能的影响

李 强,肖 娜,杨 超，刘小宝,赵兴华,刘聚祥,何 欣*

(1.河北农业大学动物医学院,河北保定 071000；2.河北定州市动物防疫监督总站，河北定州 073000;3.保定职业技术学院,河北保定 071000)

枳术粉对雏鸡生长性能和肠道微生态及免疫功能的影响

李 强1,肖 娜2,杨 超2，刘小宝3,赵兴华1,刘聚祥1,何 欣1*

(1.河北农业大学动物医学院,河北保定 071000；2.河北定州市动物防疫监督总站，河北定州 073000;3.保定职业技术学院,河北保定 071000)

为了研究传统方剂枳术粉[枳实(炒)∶白术(炒) 1∶2，ZHF]对蛋雏鸡生长性能、免疫功能和肠道微生态的影响，选择海塞克蛋雏鸡180只，随机分为3组，即对照组(CON)和枳术粉添加组(10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF)，每组3个重复，每个重复20只，试验期42 d。结果显示，在生长性能上，21 d～42 d，10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF组平均日增质量显著高于CON组(P<0.05)，料重比分别比CON组降低了1.6%和4.1%(P<0.05)。添加ZHF组的肠道大肠埃希菌数量减少而双歧杆菌和乳酸杆菌的数量显著增加(P<0.05)，在免疫指标上，血清IFN-γ和IL-2的含量显著高于CON组(P<0.05)，NDV抗体效价提高(P<0.05)。结果表明，枳术粉可显著提高蛋雏鸡的生长性能,优化肠道微生态结构，提高免疫性能。

枳实；白术；生长性能；免疫；雏鸡

枳术粉(Zhizhu fomulation,ZHF)，源于张元素创制的脾胃病代表方剂——枳术丸，枳实(炒)和白术(炒)的比例为1∶2，该方具有治痞、消食、强胃之功效，按照该比例粉碎中药制得枳术粉。现代药理学研究表明，枳术丸可促进正常小鼠胃排空和肠推进速度，改善脾虚便秘模型小鼠的消化功能紊乱，并显著增强食欲，提高胃动力[1-2]。另外有研究显示，枳术丸(粉)重用白术，具有增强机体免疫的作用[3]。中药作为新型的饲料添加剂资源，可有效替代抗菌药物，减少因滥用抗菌药物引发的畜禽耐药性及药物残留问题。但是，目前尚未见到枳术丸(粉)应用于畜禽养殖当中的报道，本试验旨在研究枳术粉对蛋雏鸡生长性能及免疫功能的影响，为其在家禽生产上的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物和试验设计 按照单因素随机分组方式，选取180只1日龄健康海塞克蛋雏鸡，随机分为3组，每组3个重复，每重复20只。Ⅰ组为对照组(control group，CON)，饲喂基础日粮，Ⅱ、Ⅲ组为试验组，在基础日粮的基础上分别添加10 g/kg、20 g/kg的枳术粉(10 g/kg ZHF、20 g/kgZHF)，所有鸡只自由采食和饮水，基础饲粮组成及营养水平见表1[4]。

试验鸡采用笼养，24 h光照，自由采食及饮水，通风采用排气扇换气，常规免疫程序免疫。

1.1.2 试验用药 枳实(炒)和白术(炒)购于安国药材市场，按照1∶2的比例粉碎，过40目筛，备用。

1.2 方法

1.2.1 盲肠内容物大肠埃希菌、双歧杆菌和乳酸杆菌的检测 参照文献[5]，于21 d和42 d随机在各重复中取3只试验鸡处死，在无菌实验台内无菌采集其盲肠内容物0.5 g，置于盛有9 mL稀释液的试管中，涡旋混匀30 s，取适当稀释浓度的稀释液接入3种培养基中，每个稀释度每种培养基各做3个重复，大肠埃希菌采用麦康凯培养基有氧培养24 h，双歧杆菌和乳酸杆菌分别采用BBL、LBS培养基在厌氧条件下培养48 h，37℃恒温培养，进行活菌计数。

1.2.2 生长性能的测定 以重量为单位，于试验开始、第21天和第42天的清晨称空腹鸡只的体质量，每周记录给料量和料槽中的剩余饲料质量，用于计算饲料转化率(料重比)。

料重比=采食量/体增质量

1.2.3 免疫指标的测定 于21、28、35、42日龄时，每个重复随机选取5只，翅下静脉采血，分离血清，并进行倍比稀释，采用V型血凝板检测血清中的NDV血凝抑制抗体效价。

于21日龄和42日龄时，每个重复随机选取5只鸡，翅下静脉采血，分离血清，血清中IFN-γ和IL-2的含量测定按照 ELISA试剂盒操作进行。

1.2.4 数据分析 试验数据经Excel处理，采用SPSS17.0软件进行方差分析，结果以平均值±标准差表示，用Duncan法进行数据间的多重比较，P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 ZHF对蛋雏鸡生长性能的影响

在整个试验过程中，给药组的体增重都显著高于阴性对照组(P<0.05)，但是高剂量组和低剂量组之间无显著差异(P>0.05)。7 d～21 d，试验组和阴性对照组的饲料转化率之间无显著差异(P>0.05)，但是在21 d～42 d，给药组的饲料转化率显著低于阴性对照组(P<0.05)，但是高低剂量组之间无显著差异(P>0.05)(表2)。

2.2 ZHF对盲肠内容物微生物数量的影响

结果显示，在整个试验期间，ZHF组的盲肠内大肠埃希菌的数量显著低于阴性对照组(P<0.05)，但是两个ZHF组之间无显著差异(P>0.05)。在21 d之后，添加药物组的乳酸杆菌的数量显著高于阴性对照组(P<0.05)，但是高低剂量的药物组之间无显著差异(P>0.05)。而高剂量ZHF组的双歧杆菌的数量在21 d时显著高于其他两个组(P<0.05)，但是在42 d时3个组之间无显著差异(P>0.05)(表3)。

表1 基础日粮组成及营养水平Table 1 Ingredients and nutritional composition of the basal pretreatment and treatment diets

注：每千克复合预混料含：维生素A 1 420 IU，维生素D2190 IU，维生素E 9.5 IU, 维生素K 0.38 mg，维生素B11.0 mg， 维生素B23.4 mg，维生素B62.8 mg，维生素B120.009 mg，生物素0.14 mg，叶酸0.52 mg，泛酸9.4 mg，烟酸26 mg，胆碱1 225 mg，铁75.0 mg，锰56.0 mg，锌38.0 mg，铜5.0 mg，碘0.35 mg，硒0.14 mg。
Note：Premix provided per kilogram of diet：Vitamin A,1 420 IU;Vitamin D2,190 IU;Vitamin E,9.5 IU;Vitamin K, 0.38 mg;Vitamin B1,1.0 mg;Vitamin B2, 3.4 mg;Vitamin B6, 2.8 mg;Vitamin B12,0.009 mg;Biotin,0.14 mg;Folic acid,0.52 mg;Pantothenic acid,9.4 mg;Niacin,26.0 mg;Choline (as choline chloride),1 225 mg;Iron(FeSO4·H2O),75.0 mg;Manganese(MnSO4·7H2O),56.0 mg;Zinc(ZnSO4·7H2O),38.0 mg;Copper(CuSO4·5H2O), 5.0 mg;Iodine(KI), 0.35 mg;Selenium(Na2SeO3),0.14 mg.

表2 ZHF对蛋雏鸡生长性能的影响Table 2 Effects of ZHF on growth performance of chicks

注：角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同字母表示差异显著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

2.3 ZHF对雏鸡免疫性能的影响

2.3.1 ZHF对血清NDV抗体效价的影响 在21 d 时，3个试验组的抗体效价无显著性差异(P>0.05)，但是在试验进行至28 d之后，ZHF处理组的NDV抗体效价显著提高，在35 d时，高剂量的ZHF组的NDV抗体效价显著高于其他两组(P<0.05)，在42 d时，两个ZHF组之间的NDV抗体效价无显著性差异(P>0.05)，但却都显著高于阴性对照组(P<0.05)。在28 d和35 d的时候，20 g/kg ZHF组的ND抗体效价显著高于10 g/kg剂量组和阴性对照组(P<0.05)(表4)。

2.3.2 ZHF对血清中IL-2 和IFN-γ含量的影响 由结果可知，在试验的两个采样时间，10 g/kg ZHF组和20 g/kg ZHF组的IL-2含量均显著高于阴性对照组(P<0.05)，但是仅在42 d时高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05)，而在21 d时2个组无显著性差异(P>0.05)。血清中IFN-γ的含量在21 d时3个组之间无显著性差异(P>0.05)，但是到了42 d时，20 g/kg ZHF组的IFN-γ含量显著高于10 g/kg ZHF组和阴性对照组(P<0.05)(表5)。

表3 ZHF对蛋雏鸡盲肠内容物微生物数量的影响Table 3 Effects of ZHF on cecal microbial population of chicks lg(CFU·g-1)

注：角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表4 ZHF对蛋雏鸡血清新城疫病毒抗体效价的影响Table 4 Effects of ZHF on NDV HI Ab titers of chicks

注：角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同字母表示差异显著(P<0.05)。
Note：The same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表5 ZHF对蛋雏鸡血清IL-2 和IFN-γ含量的影响Table 5 Effect of ZHF on seral IL-2 and IFN-γ contents of chicks ng/L

注：角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05).

3 讨论

中药在中国应用历史悠久，中药用于防治家禽疾病和增强机体抵抗力可以追溯到明清时代[6]。枳术粉是炒白术和炒枳实以2∶1的比例粉碎而得，能健脾舒胃，增强机体的免疫力。有研究显示，使用不同比例白术和枳实(1∶1、1∶2、2∶1)的水煎液后发现， 2∶1组食物在小肠内停留时间最长，使食物在肠内得以充分消化吸收，这可以解释枳术粉能“治痞、消食、强胃”的功效[7]。来源于枳实的新橙皮苷可以有效保护胃黏膜并且具有调节功能性腹泻的作用[8]。枳术丸(即本文中的枳术粉)还能能够改善消化机能紊乱模型小鼠出现的脾胃虚弱症状，增强小鼠胃排空和促进肠平滑肌的推进性蠕动，显著增加小鼠的食欲[9]。在本次试验过程中，枳术粉添加组的雏鸡平均日增重显著高于阴性对照组，在21 d～42 d期间，给药组的饲料转化率显著低于阴性对照组，这与赵燕飞等[6]报道的白术和白术多糖均可以提高断奶仔猪的平均日增重结果相符，这可能就是因为药物增强了机体的脾胃吸收运化的功能，从而增加了饲料利用率。

文贵辉等[10]研究了白术粗多糖对樱桃谷肉鸭肠道微生物的影响，发现日粮中添加白术多糖能明显改善肉鸭肠道微生物区系，促进有益微生物的生长并抑制有害微生物的繁殖。刘又嘉等[11]的研究表明，含有白术的七味白术散超微粉剂可以有效地增加小鼠肠道中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量,同时限制大肠埃希菌和沙门菌的生长，这可能跟中药白术当中含有的多糖成分有关。本次研究表明，添加枳术粉组的雏鸡肠道大肠埃希菌数量显著低于阴性对照组，而乳酸杆菌的数量显著高于阴性对照组，说明枳术粉的添加可以有效改善雏鸡肠道菌群结构，这与前人的研究结果一致。枳术粉除了可以调节胃肠道的运动，改善营养物质的吸收，还可以优化肠道菌群的结构，说明枳术粉做为中药添加剂应用于畜禽养殖具有巨大潜力。

IL-2是机体调控免疫应答的重要因子，参与CD4+T和CD8+T细胞的活化增殖以及NK细胞的活化，参与抗体的分泌免疫因子[12]，IFN-γ具有抗病毒、免疫调节和抗肿瘤的作用，本次研究结果表明，枳术粉组的IFN-γ含量显著高于阴性对照组。卢一松等[13]的研究显示，从中药白术中提取的多糖成分可以促进小鼠血清IFN-γ的含量。Qiu Y等[14]的研究结果显示，添加白术多糖可以显著增加外周血淋巴细胞中IFN-γ的mRNA的表达量。Guo L等[15]研究表明，给老年大鼠添加白术多糖提取物可以有效提高机体的免疫力并加强心脏的功能。这些结果与本次的研究结果一致，说明枳术粉对动物机体的免疫水平有确切的提高作用。NDV抗体效价是机体特定体液免疫应答的指示指标，提高NDV的抗体效价在传统中药免疫调节作用的研究中已经很普遍[16-17]。候凯俪等[18]发现在梅岭土鸡的日粮中添加白术水煎剂可以显著提高NDV抗体效价，这和本试验研究结果一致。枳术粉增强机体免疫的机理主要在于此方中重用白术，而白术多糖的免疫调节作用表现明显，加上枳实调节胃肠的吸收功能，能使动物表现为生长性能提高。

综上所述，在蛋雏鸡日粮中添加枳术粉可以提高鸡的生长性能，优化肠道微生物的结构，有效改善机体的免疫性能，可以在临床上作为替代抗菌药物的免疫调节剂进行使用。

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EffectofDietaryAdditionofZHFonGrowthPerformance,CecalMicrobialPopulationsandImmunityinChicks

LI Qiang1,XIAO Na2,YANG Chao2,LIU Xiao-bao3, ZHAO Xing-hua1,LIU Ju-xiang1, HE Xin1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding,Hebei,071000,China;2.DingzhouAnimalHealthInspection,Dingzhou,Hebei,073000,China;3.BaodingVocationalandTechnicalCollege,Baoding,Hebei,071000,China)

The present study was conducted to determine the effects ofRhizomaAtractylodismacrocephalaeandAurantiiimmaturusFructus(Zhizhu Herbal Formula in China,ZHF) as a dietary additive on growth performance,cecal microbial populations and immunity in chicks.180 Hisex chicks were randomly assigned to three treatments.Treatment 1(control group CON) was fed with corn-soy based diets only;treatment 2 and 3 were supplemented with 10 g/kg ZHF and 20 g/kg ZHF,respectively.The results showed that body weight gains (BWG) of ZHF supplementation groups were significantly higher than the CON group,but the feed conversion ratio (FCR) was lower (P<0.05).FewerE.coliwere recovered from ceca of chicks provided with ZHF (P<0.05) and the quantities ofLactobacillusandBifidobacteriumof ZHF were significantly (P<0.05) higher than that of CON.The IFN-γ and IL-2 were significantly higher in ZHF than in CON (P<0.05).These results suggested that ZHF administration in feed displayed modulation effects on immunity and the cecal bacterial community.

RhizomaAtractylodismacrocephalae;AurantiiimmaturusFructus;growth performance;intestinal microbiota; chick

2016-12-08

河北省科技计划项目(13226624);河北省现代农业产业技术体系蛋鸡产业创新团队项目；河北省高等学校科学技术研究项目(QN2015339)

李 强(1991-)，男，河南驻马店人，硕士研究生，主要从事新兽药研发工作。*

S853.75

A

1007-5038(2017)10-0078-05