化学发光法检测人类免疫缺陷病毒抗体高值阴性样本的分析

靳丽丽 王晓伟 邵春燕 骆群

化学发光法检测人类免疫缺陷病毒抗体高值阴性样本的分析

靳丽丽 王晓伟 邵春燕 骆群

目的 分析化学发光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）检测人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗体高值阴性样本是否有潜在危险性。方法 用CLIA试剂在临床标本中筛选出HIV抗体0.3＜S/CO（absorbance signal of sample/cut off value）＜0.9的血清样本，用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）复查，将ELISA法阳性反应标本用蛋白印迹（Westernblot，WB）确证并分析结果。结果用CLIA试剂从64 425份临床标本中筛查出CLIA检测HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的血清样本134例。其中ELISA试剂有阳性反应的标本2例，且此2例患者4周后复查均为阴性。结论 CLIA检测HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的样本可直接发放阴性结果，无潜在危险性。

化学发光 酶联免疫吸附法 人类免疫缺陷病毒抗体 蛋白印迹

艾滋病又称获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），是一种危害极大的传染病。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗体在人体潜伏期平均8～9年，患AIDS以前可以无症状生活和工作很多年，是患者术前及输血前必查传染病项目之一。近年HIV感染率呈上升趋势，由于存在检测窗口期、隐匿性感染、操作技术水平等因素，防范经血传播AIDS成为全球关注的焦点[1]。作为一个发展中国家，中国已经把控制和预防艾滋病毒/艾滋病作为其公共卫生保健的最重要问题[2]。而临床HIV抗体S/CO在0.3～0.9的样本，未达到临界值但处于高值状态，此部分样本是否有潜在危险性，检测人员及临床医生对此提出疑问。为此，笔者对化学发光（chemiluminescence immunoassay，CLIA）检测HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的样本用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）进行复测，对是否存在潜在危险进行分析。

材料与方法

1 材料 2013年1月～2014年12月本院临床患者血清标本64 425份，年龄19～60岁。

2 试剂 美国强生公司HIV抗体CLIA检测试剂盒（批号3040、3055、3100、3140、3160 ）；意大利索林公司HIV抗体ELISA诊断试剂盒（批号D163510、D148210、D223610、D249010、D270710）；MP生物医学亚太私人有限公司人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（批号IMT1404001、IMT1404002）。

3 仪器 爱康公司Uranus AE 280全自动酶免分析仪；强生公司Vitros3600全自动免疫分析仪；MP全自动免疫印迹分析仪。

4 方法 首先采用CLIA试剂从64 425份临床标本中筛选出HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的血清样本，再用ELISA复查，将ELISA试剂有阳性反应的标本送解放军三〇二医院采用蛋白印迹（ Westernblot，WB）试验确证并分析结果。

结 果

采用CLIA试剂从64 425份临床标本中筛查出HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的血清样本134例。CLIA检测HIV抗体0.3＜S/CO＜0.6时ELISA结果均为阴性无送确证标本，CLIA检测HIV抗体0.6＜S/CO＜0.9的32例样本检测结果见表1。当CLIA检测HIV抗体0.6≤S/CO＜0.7及0.8≤S/CO＜0.9时ELISA阳性结果各1例，确证结果均为不确定。这2例患者4周后复查确证结果均为阴性。

表1 CLIA检测HIV抗体0.6＜S/CO＜0.9的样本与ELISA及确证结果的对比

讨 论

目前全球艾滋病流行仍在继续蔓延，我国艾滋病疫情仍呈上升趋势，且逐渐从有高危行为人群向一般人群扩散。开展HIV抗体检测是发现病原并进行有效管理的基础[3]。HIV抗体是患者术前必查项目之一，但是由于存在窗口期及检测方法局限性的影响，目前按国家标准，市售检测试剂盒尚不能100%检测出血液中病毒[4]。因此检验人员及临床医生对一些低于临界值高值状态的样本是否有潜在危险提出疑问。

我们初筛实验室选择ELISA法或CLIA法检测HIV抗体。ELISA检测HIV抗体的原理是采用双抗原夹心法和双抗体夹心法，四代试剂可以联合检测抗原及抗体，ELISA成本低、特异性好，但耗时较长。CLIA法是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，具有稳定快速、操作简单、自动化程度高、高灵敏度和宽线性范围的优势，广泛适用于临床抗原和抗体的免疫学定量检测[5]。为确保 HIV 抗体检测的准确性，筛及确认试剂必须是国家食品药品 管理局（SFDA）注册批准、批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。HIV抗体检测流程及结果判定必须依据《全国艾滋病检测技术规范》进行[6]。

本实验室用CLIA检测HIV抗体在0.6≤S/CO＜0.7及0.8≤S/CO＜0.9内ELISA复查S/CO＞1的

标本各为1例，确证结果均为不确定，且这2例患者4周后复查确证结果均为阴性。考虑到本院以血液病及肿瘤患者为主，再有少部分孕妇，其疾病特殊性导致HIV抗体检测值稍偏高。用ELISA试剂复查大量样本，造成试剂浪费，增加患者等候时间。医院或检验机构若用化学发光法作为临床HIV抗体的筛查检测，为控制成本，可对CLIA检测HIV抗体0.3＜S/CO＜0.9的样本直接发放阴性结果。

1 冯健亮，翁远桥，陈日明，等. 2种酶联免疫试剂筛查血液抗-HIV应用比较[J]. 中国输血杂志，2012，25（6）：568-569.

2 Bi XH，Ning HX，Wang TT，et al. Comparative Performance of Electrochemiluminescence Immunoassay and EIA for HIV Screening in a Multiethnic Region of China[J]. PLoS One，2012，7（10）：e48162.

3 郑艳丽.HIV抗体检验影响因素的分析[J].中国卫生检验杂志，2008，18（2）：354 – 355.

4 王锐，韩玲，赵伟萍.20例输血感染安全引起的思考[J].中国输血杂志，2002，15（3）：216-218.

5 吴风武，何治柯，罗庆尧，等.化学发光分析新进展[J].分析测试学，2000，19（1）：81-87.

6 曹玉梅. HIV抗体20例初筛阳性与确认阳性之间的关系[J].中国社区医师，2014，30（32）：212-214.

Ob jective To reveal the potential risk of the negative samples near the critical value in detection of human immunodeficiency virus antibody by chemiluminescence immunoassay. Method The samples were selected by chemiluminescence immunoassay（CLIA） for antibodies against HIV in which absorbance of the sample's cutoff value（S/CO）between 0.3 and 0.9，and checked by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. Result One hundred and thirty-four samples over 0.3＜S/CO＜0.9 were screened from 64425 clinical samples by CLIA. Among them，2 cases were positive withr ELISA. The two positive cases，however，turned to be negative four weeks later. Conclusion Detection of CLIA HIV antibodies based on the threshold of 0.3＜S/CO＜0.9 will be able to ensure the safety in HIV diagnosis.

Chemiluminescence immunoassay Enzyme linked immunosorbent assay HIV antibody Western blot

R373 R446.11

A

1671-2587（2017）05-0508-02

Confirmatory Tests of Ne gative Samples Near the Critical Value i n Human Immunodeficiency Virus Antibody Detection by Chemiluminescence Immunoassay JIN Li-li，WANG Xiao-wei，SHAO Chun-yan，et al. Departmeng of Blood Transfusion Chinese PLA 307 Hospital，Beijing 100071

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.030

100071 北京市解放军三〇七医院输血科

靳丽丽（1988–），女，检验技师，学士，主要从事传染病检测工作，（Tel）18141903126（E-mail）zhaoning2008061106@126.com。

骆群（1967–），男，主要从事临床输血与研究，（E-mail）luoq66@aliyun.com。

2017-03-10）

（本文编辑：王敏）